7.3.5.3 Chemicals and reagents• Eth

7.3.5.3 Chemicals and reagents
• Ethanol 78% (diluted, Agrar-Alkohol, Vienna, UN1170, C-K25V)
• Thermostable α-amylase (Megazyme Kit, Total starch)
• Sodium acetate buffer (100 mM, pH 5.0)
• Amyloglucosidase (Megazyme Kit, Total starch)
• GOPOD reagent (Glucose Determination Reagent)
• D-glucose standard solution (1 mg/ml, Megazyme Kit, Total starch)
7.3.5.4 Procedure
Approximately 100 mg ± 0.1 mg of each sample were weighed into glass test tubes
(triple determination) and 0.2 ml of aqueous ethanol (78%) was added to each tube to
wet the sample and aid dispersion. The tubes were stirred on a vortex mixer.
Immediately 3 ml of thermostable α-amylase (diluted 1:30 in 100 mM sodium acetate
buffer, pH 5.0) were added. Then, the tubes were incubated in a bowling water bath
for 6 min (vigorously stirring all 2 min). Accordingly, the tubes were placed in a water
bath at 50 °C, 0.1 ml amyloglucosidase was added and then, the tubes were stirred and
incubated at 50 °C for 30 min. Subsequent, the entire contents of the test tube were
transferred to a 100 ml volumetric flask (tubes were rinsed with distilled water),
adjusted with distilled water and mixed. Then, an aliquot of the solution was centrifuged at 3.000 rpm for 10 min and 0.1 µl of the clear, undiluted filtrate (duplicate
aliquot) was transferred to the bottom of a glass test tube. Then, 3 ml of GOPOD
reagent were added to each tube and incubated at 50 °C for 20 min.
Preparation of D-glucose control and reagent blank solution:
D-glucose control: 0.1 ml of D-glucose standard solution (1 mg/ml) and 3.0 ml of
GOPOD Reagent.
Reagent blank solution: 0.1 ml of water and 3.0 ml of GOPOD
The samples were transferred into macro-cuvettes and for each sample (including Dglucose
control) the absorbance at 510 nm was read against the reagent blank. The
starch content was calculated according to eq. 7.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

7.3.5.3 สารเคมีและสารเคมี
•เอทานอล 78% (ปรับลด Agrar-Alkohol เวียนนา UN1170 C-K25V)
•ทนความร้อนαอะไมเลส (Megazyme Kit, แป้งทั้งหมด)
•บัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตท (100 มิลลิเมตรมีค่า pH 5.0)
• Amyloglucosidase (Megazyme Kit, แป้งทั้งหมด)
• GOPOD น้ำยา (กลูโคสการกำหนด Reagent)
• D-กลูโคสสารละลายมาตรฐาน (1 mg / ml, Megazyme Kit, แป้งทั้งหมด)
7.3.5.4 ขั้นตอน
ประมาณ 100 มิลลิกรัม± 0.1 mg ของแต่ละตัวอย่างชั่งลงในแก้ว หลอดทดลอง
(ความมุ่งมั่นที่สาม) และ 0.2 มล. เอทานอลในน้ำ (78%) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหลอดจะ
เปียกตัวอย่างและช่วยกระจาย หลอดถูกกวนในน้ำวนผสม.
ทันที 3 มิลลิลิตรต่ออุณหภูมิสูงαอะไมเลส (ปรับลด 01:30 ใน 100 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตต
บัฟเฟอร์ค่า pH 5.0) มีการเพิ่ม จากนั้นหลอดถูกบ่มในอ่างน้ำโบว์ลิ่ง
6 นาที (แรงกวนตลอด 2 นาที) ดังนั้นหลอดถูกวางไว้ในน้ำ
อาบน้ำที่ 50 องศาเซลเซียส 0.1 มล. amyloglucosidase ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วหลอดที่ถูกกวนและ
บ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ภายหลังเนื้อหาทั้งหมดของหลอดทดลองที่ถูก
โอนไปยัง 100 มล. ขวดปริมาตร (หลอดถูกล้างด้วยน้ำกลั่น)
ปรับได้ด้วยน้ำกลั่นและการผสม จากนั้นการหารของการแก้ปัญหาที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3.000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีและ 0.1 ไมโครลิตรของชัดเจนกรองเจือปน (ซ้ำ
หาร) ถูกย้ายไปอยู่ด้านล่างของหลอดทดลองแก้ว จากนั้น 3 มิลลิลิตร GOPOD
น้ำยาถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหลอดและบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที.
การเตรียมความพร้อมของการควบคุม D-กลูโคสและสารทางออกที่ว่างเปล่า:
D-การควบคุมระดับน้ำตาล: 0.1 มิลลิลิตรสารละลายมาตรฐาน D-กลูโคส (1 mg / มล.) และ 3.0 มล
. GOPOD Reagent
น้ำยาแก้ปัญหาว่างเปล่า: 0.1 มิลลิลิตรของน้ำและ 3.0 มิลลิลิตร GOPOD
ตัวอย่างถูกโอนเข้ามหภาค cuvettes และแต่ละตัวอย่าง (รวม Dglucose
Control) การดูดกลืนแสงที่ 510 นาโนเมตรได้อ่านกับน้ำยาว่างเปล่า .
ปริมาณแป้งที่คำนวณได้ตาม EQ 7