2.5. Enzyme assaysRandomly selected

2.5. Enzyme assays
Randomly selected potato slices were collected at 0, 3, 6, 9, 12 days after fresh cut and frozen immediately by liquid nitrogen. The samples were then grinded with liquid nitrogen into frozen powder by an analytic mill (IKA A11 basic; IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen, Germany), and stored at −80 °C until used. PPO activity was analysed based on the method described by Galeazzi, Sgarbieri, and Constantinides (1981). One g of frozen powder was homogenized with 4 mL of phosphate buffer (pH 7.0) and 0.1 g insoluble polyvinylpolypyrrolidone (PVPP), centrifuged at 10,000×g for 15 min at 4 °C, and the supernatant was used for analysis. The reactive mixture consisted of 0.1 ml of enzyme extracts, 2 ml of 200 mM phosphate buffer (pH 6.8) and 0.5 mL of 20 mM catechol solution. Enzyme activity was measured by the increase in absorbance at 410 nm. One unit of enzyme activity was defined as the increase in absorbance of 0.01 per min under assay conditions. PPO activity was expressed as unit of activity per mg protein per h. Protein content was measure as described by ( Bradford, 1976) from the same extraction buffer at pH 7.0.

PAL activity was measured as previously described by Martinez-Tellez and Lafuente (1997), with slight modifications. 1 g frozen powder described as above PPO assay was homogenized with 4 mL of 50 mM borate buffer (pH 8.5), centrifuged at 10,000×g for 15 min at 4 °C. 2 ml buffer (pH 8.5) and 1 ml of 20 mM l-phenylalanine was added to two individual tubes, 0.3 ml of enzyme solution (from supernatant) was added to one of the tubes and 0.3 ml water was added to the other tube. Absorbance at 290 nm was measured twice (before and after reaction tubes were incubated at 40 °C for 1 h). One unit of PAL activity was defined as the amount of enzyme produced as an increase of 0.01 absorbance units in 1 h. PAL activity was expressed as unit of activity per mg protein per h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. เอนไซม์ assaysสุ่มเลือกมันฝรั่งชิ้นถูกเก็บรวบรวมที่ 0, 3, 6, 9, 12 วันหลังสดตัด และแช่แข็งทันที โดยไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างดีแล้ว grinded กับไนโตรเจนเหลวเป็นผงแช่แข็งโดยมีโรงสีโกดัง (A11 IKA พื้นฐาน IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen เยอรมนี), และเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้ กิจกรรม PPO เป็น analysed ตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Galeazzi, Sgarbieri และ Constantinides (1981) หนึ่งกรัมของผงแช่แข็งถูก homogenized เป็นกลุ่มกับ mL 4 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ polyvinylpolypyrrolidone ละลาย 0.1 g (PVPP), centrifuged 10, 000 กรัม× 15 นาทีที่ 4 ° C และ supernatant ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยสารสกัดจากเอนไซม์ 0.1 มล. 2 ml 200 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) และ 0.5 mL ของโซลูชัน catechol 20 มม. เอนไซม์ถูกวัด โดยเพิ่ม absorbance ที่ 410 nm หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นเพิ่ม absorbance ของ 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรม PPO ได้แสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อ h. โปรตีน วัดตามที่อธิบายไว้ โดย (แบรดฟอร์ด 1976) จากเดิมแยกบัฟเฟอร์ที่ pH 7.0กิจกรรมพาลถูกวัดเป็นก่อนหน้านี้ อธิบาย โดยเบรัท Tellez และ Lafuente (1997), มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 1 g แช่ผงอธิบายไว้ ตามด้านบน PPO วิเคราะห์ถูก homogenized เป็นกลุ่มกับ mL 4 50 มม. borate บัฟเฟอร์ (pH 8.5), centrifuged 10, 000 ซื้อ g สำหรับ 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส 2 ml บัฟเฟอร์ (pH 8.5) ml 1 ของ 20 มม. l phenylalanine ที่เพิ่มหลอดละ 2, 0.3 ml ของเอนไซม์ (จาก supernatant) ถูกเพิ่มเข้าไปหนึ่งหลอด และได้เพิ่มน้ำ 0.3 ml หลอดอื่น ๆ Absorbance ที่ 290 nm มีวัดสองครั้ง (ก่อน และ หลังปฏิกิริยาหลอดถูก incubated ที่ 40 ° C สำหรับ 1 h) หน่วยหนึ่งของ PAL กิจกรรมถูกกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่ผลิตเป็นการเพิ่มขึ้นของหน่วยระดับ 0.01 absorbance ในกิจกรรม 1 h. PAL ได้แสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อ h

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ตรวจเอนไซม์
สุ่มเก็บชิ้นมันฝรั่งที่ 0 , 3 , 6 , 9 , 12 วัน หลังจากตัดสดและแช่แข็งทันทีด้วยไนโตรเจนเหลว จำนวนแล้วบดด้วยไนโตรเจนเหลวแช่แข็งโดยการบดผงในการวิเคราะห์ ( Ika Ika A11 พื้นฐาน werke GmbH & Co . KG , Staufen , เยอรมนี ) , และเก็บไว้ที่− 80 ° C จนใช้กิจกรรมของเอนไซม์ PPO วิเคราะห์ตามวิธีที่อธิบายไว้โดย galeazzi sgarbieri , และ constantinides ( 1981 ) หนึ่งกรัมของผงบดแช่แข็ง 4 มิลลิลิตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 0.1 กรัม ละลายน้ำ polyvinylpolypyrrolidone ( pvpp ) ที่ระดับ 10 , 000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C และนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ ผสมสีจำนวน 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์ สารสกัด2 มิลลิลิตร 200 มิลลิเมตร ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ) และ 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายแคติคอล 20 มิล กิจกรรมของเอนไซม์ถูกวัดโดยการเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกนิยามในฐานะที่เป็นเพิ่มค่า 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมของเอนไซม์ PPO จะแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมิลลิกรัมต่อชั่วโมง โปรตีนคือวัดตามที่อธิบายไว้โดยแบรดฟอร์ด2519 ) จากเดิมใช้สารพีเอช 7.0

เพื่อนกิจกรรมวัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า โดยมาร์ติเนชเทลเลส และ lafuente ( 1997 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 1 กรัมผงตามที่อธิบายไว้ข้างต้นแช่แข็ง PPO assay เป็นโฮโมด้วย 4 ml 50 มม. บอเรตบัฟเฟอร์ pH 8.5 ) , ระดับที่ 10 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C 2 ml บัฟเฟอร์ pH 85 ) และ 1 มิลลิลิตรของฟีนิลอะลา 20 มิลลิเมตร เพิ่มไปสองหลอดละ 0.3 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ ( น่าน ) เป็นหนึ่งในท่อและ 0.3 มล. เติมน้ำหลอดอื่น ๆ การดูดกลืนแสงที่ 290 nm วัดสองครั้ง ( ก่อนและหลังหลอดปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 40 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ) หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเพื่อนถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิตเพิ่มขึ้นจาก 0อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ . 01 ค่าหน่วยใน 1 ชั่วโมง เพื่อน กิจกรรม จะแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมก. ต่อชม.