The hygromycin B phosphotransferase

The hygromycin B phosphotransferase gene (hpt) has been widely used in the process of plant genetic
engineering to produce plants that can secrete the HPT protein. As part of a safety assessment, sufficient quantities
of the proteinwere produced in Escherichia coli to conduct in vitro digestibility and animal studies.Western blotting
analysis showed that the HPT protein was digested by simulated gastric fluid within 40 s. ELISA demonstrated that
the protein did not induce detectable levels of specific IgE antibodies or histamine in test animals. Alignment of
the amino acid sequence of HPT with those of known allergens did not produce evidence of sequence similarities
between these allergens and the HPT protein.We conclude that HPT has a low probability to induce allergenicity.
Keywords: allergenicity, animalmodel, HPT protein, in vitro digestibility, safety assessment

The hygromycin B phosphotransferase gene (hpt), derived from
aminoglycoside 4-phospotransferases encoded by aph (4)-
Ta of Streptomyces hygroscopicus, is a useful selectable marker
to screen for transformants in gene transfer experiments involving
plants (Linda 1983). The gene codes for an enzyme, which
detoxifies hygromycin B through phosphorylation. Hygromycin B
is an aminocyclitol antibiotic that inhibits protein synthesis in
both prokaryotes and eucaryotes by interfering with both ribosomal
translocation and aminoacyl-tRNA recognition (Waldron and
others 1985).
The gene is found in several transgenic plants such as rape, rice,
corn, and so on (Li andNarayana 1991; Sawahel 2003).However, before
these plants can be commercialized, it is necessary to conduct
safety assessments (FAO/WHO 2001).
Since the level of HPT in these plants is low, HPT was produced
in E. coli to obtain sufficient HPT protein for in vitro digestion and
animal studies.

chased from Sigma (Sigma Co., St. Louis, Mo., U.S.A.). Mouse antirat
IgE serum and HRP-goat antimouse IgG serum were purchased
from PharMigen (PharMigen Bioscience Co., Calif., U.S.A.).
His6·Tag monoclonal antibody and Ni-NTA metal-affinity column
were purchased from Novagen (Merck Co., Darmstadt, Germany).
O-phenylene diamine was purchased fromSigma. Rat histamine kit
was purchased from RapidBio Calabas, Calif., U.S.A. The biochemicals
and kit were used according to the recommendations of the
supplier. All other common reagents were of analytical grade.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยีน phosphotransferase ของ hygromycin B (hpt) ได้ถูกใช้ในกระบวนการทางพันธุกรรมพืชวิศวกรรมการผลิตพืชที่สามารถหลั่งโปรตีน HPT เป็นส่วนหนึ่งของการประเมินความปลอดภัย ปริมาณที่เพียงพอของ proteinwere ที่ผลิตใน Escherichia coli ทำ digestibility เพาะเลี้ยงและศึกษาสัตว์ Blotting วิธีตะวันตกวิเคราะห์พบว่า โปรตีน HPT ถูกต้องตามของเหลวในกระเพาะอาหารจำลองภายใน s ได้ ELISA 40 แสดงที่โปรตีนไม่ก่อให้เกิดการตรวจระดับของ IgE แอนตี้หรือฮิสตามีนในสัตว์ทดสอบเฉพาะ จัดตำแหน่งของลำดับกรดอะมิโนของ HPT กับสารก่อภูมิแพ้ที่รู้จักไม่ได้สร้างหลักฐานของความเหมือนของลำดับระหว่างสารก่อภูมิแพ้เหล่านี้และโปรตีน HPT เราสรุปว่า HPT มีความน่าเป็นต่ำสุดเพื่อก่อให้เกิด allergenicityคำสำคัญ: allergenicity, animalmodel โปรตีน HPT, digestibility เพาะเลี้ยง การประเมินความปลอดภัยยีน phosphotransferase ของ hygromycin B (hpt), มาจาก4 aminoglycoside-เข้ารหัส โดย aph (4) phospotransferases-ตาของ Streptomyces hygroscopicus มีเครื่องหมายเลือกมีประโยชน์กับหน้าจอสำหรับ transformants ในการทดลองถ่ายโอนยีนที่เกี่ยวข้องกับพืช (1983 ลินดา) รหัสยีนสำหรับเอนไซม์ ซึ่งจะ hygromycin B ผ่าน phosphorylation Hygromycin Bจะเป็น aminocyclitol ยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนprokaryotes และ eucaryotes ด้วยการแทรกแซงทั้ง ribosomalการรู้การสับเปลี่ยนและ aminoacyl tRNA (Waldron และothers 1985).The gene is found in several transgenic plants such as rape, rice,corn, and so on (Li andNarayana 1991; Sawahel 2003).However, beforethese plants can be commercialized, it is necessary to conductsafety assessments (FAO/WHO 2001).Since the level of HPT in these plants is low, HPT was producedin E. coli to obtain sufficient HPT protein for in vitro digestion andanimal studies. chased from Sigma (Sigma Co., St. Louis, Mo., U.S.A.). Mouse antiratIgE serum and HRP-goat antimouse IgG serum were purchasedfrom PharMigen (PharMigen Bioscience Co., Calif., U.S.A.).His6·Tag monoclonal antibody and Ni-NTA metal-affinity columnwere purchased from Novagen (Merck Co., Darmstadt, Germany).O-phenylene diamine was purchased fromSigma. Rat histamine kitwas purchased from RapidBio Calabas, Calif., U.S.A. The biochemicalsand kit were used according to the recommendations of thesupplier. All other common reagents were of analytical grade.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีน B phosphotransferase ไฮโกร (HPT)
ได้รับการใช้กันอย่างแพร่หลายในกระบวนการของพันธุกรรมพืชวิศวกรรมการผลิตพืชที่สามารถหลั่งโปรตีนHPT ในฐานะที่เป็นส่วนหนึ่งของการประเมินความปลอดภัย,
ปริมาณที่เพียงพอของproteinwere ที่ผลิตในเชื้อ Escherichia coli ที่จะดำเนินการในการย่อยหลอดทดลองและสัตว์ studies.Western blotting
การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าโปรตีน HPT ถูกย่อยโดยของเหลวในกระเพาะอาหารจำลองภายใน 40 วินาที วิธี ELISA
แสดงให้เห็นว่าโปรตีนที่ไม่ก่อให้เกิดการตรวจพบระดับแอนติบอดีIgE ที่เฉพาะเจาะจงหรือฮีสตามีการทดสอบในสัตว์ การจัดตำแหน่งของลำดับกรดอะมิโนของ HPT กับบรรดาสารก่อภูมิแพ้ที่รู้จักกันไม่ได้ผลิตหลักฐานของความคล้ายคลึงกันตามลำดับระหว่างสารก่อภูมิแพ้เหล่านี้และHPT protein.We สรุปได้ว่า HPT มีโอกาสต่ำที่จะทำให้เกิดภูมิแพ้. คำสำคัญ: ภูมิแพ้, animalmodel โปรตีน HPT ใน หลอดทดลองย่อย, การประเมินความปลอดภัยยีนไฮโกรB phosphotransferase (HPT) ที่ได้มาจากaminoglycoside 4 phospotransferases เข้ารหัสโดย Aph (4) - ตาของ hygroscopicus Streptomyces เป็นเครื่องหมายเลือกที่มีประโยชน์ไปยังหน้าจอสำหรับtransformants ในการทดลองการถ่ายโอนยีนที่เกี่ยวข้องกับพืช(ลินดา 1983 ) รหัสยีนเอนไซม์ซึ่งล้างพิษ B ไฮโกรผ่าน phosphorylation ไฮโกร B เป็นยาปฏิชีวนะ aminocyclitol ที่ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนในprokaryotes และ eucaryotes โดยรบกวนทั้งโซมอลโยกย้ายและการรับรู้aminoacyl-tRNA (ลดรอนและคนอื่นๆ 1985). ยีนที่พบในพืชดัดแปรพันธุกรรมหลายอย่างเช่นการข่มขืนข้าวข้าวโพดและอื่น ๆ (Li andNarayana 1991; Sawahel 2003) อย่างไรก็ตามก่อนที่พืชเหล่านี้จะสามารถผลิตในเชิงพาณิชย์ก็เป็นสิ่งจำเป็นที่จะดำเนินการ. การประเมินความปลอดภัย (FAO / WHO 2001) ตั้งแต่ระดับของ HPT ในพืชเหล่านี้อยู่ในระดับต่ำ HPT ถูกผลิตในE . โคไลที่จะได้รับโปรตีนที่เพียงพอสำหรับ HPT ในหลอดทดลองการย่อยอาหารและการศึกษาสัตว์. ไล่จากซิกม่า (Sigma Co. , เซนต์หลุยส์, Mo, ​​สหรัฐอเมริกา) เมาส์ antirat ซีรั่มและ IgE HRP แพะ antimouse IgG ซีรั่มที่ซื้อมาจากPharMigen (PharMigen Bioscience Co. , Calif. USA). His6 ·แท็กโมโนโคลนอลแอนติบอดีและ Ni-NTA คอลัมน์โลหะความสัมพันธ์ที่ซื้อมาจากNovagen (เมอร์ค จำกัด , ดาร์มสตัด เยอรมนี). diamine O-phenylene ถูกซื้อ fromSigma ชุดฮีสตามีหนูซื้อมาจาก RapidBio Calabas, Calif., USA ชีวเคมีและชุดถูกนำมาใช้ตามคำแนะนำของผู้ผลิต น้ำยาทั่วไปอื่น ๆ ของเกรดวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มียีนต้านยา hygromycin B ยีน phosphotransferase ( HPT ) ถูกใช้อย่างกว้างขวางในกระบวนการพันธุวิศวกรรม
โรงงานผลิตพืชที่สามารถหลั่ง HPT โปรตีน เป็นส่วนหนึ่งของการประเมินความปลอดภัยที่เพียงพอ ปริมาณ
ของ proteinwere ผลิตใน Escherichia coli เพื่อดำเนินการในหลอดทดลองและสัตว์การศึกษาการย่อยได้ของ Western blotting
.การวิเคราะห์พบว่าโปรตีนที่ถูกย่อยในกระเพาะอาหาร HPT จำลองของเหลวภายใน 40 วินาที ) แสดงให้เห็นว่าโปรตีนไม่ได้ทำให้
ตรวจพบระดับของแอนติบอดี IgE ที่เฉพาะเจาะจงหรือ histamine ในสัตว์แบบทดสอบ การเรียงตัวของลำดับกรดอะมิโนของ HPT
กับ allergens ทราบไม่ได้แสดงหลักฐานของความคล้ายคลึงกันระหว่างลำดับ
allergens เหล่านี้และ HPT โปรตีนสรุปว่า HPT มีโอกาสน้อยที่จะทำให้เกิด allergenicity .
คำสำคัญ : allergenicity ในโมเดล , โปรตีน , HPT ในหลอดทดลองการย่อยได้ , การประเมินความปลอดภัย

phosphotransferase ยีนยีนต้านยา hygromycin B ( HPT ) มาจาก
อะมิโนกลัยโคไซด์ 4-phospotransferases เข้ารหัสโดย APH ( 4 ) -
ตาของ Streptomyces hygroscopicus เป็น
เครื่องหมายเลือกประโยชน์หน้าจอสำหรับพลาสมิดในการถ่ายโอนยีน การทดลองเกี่ยวกับ
พืช ( ลินดา 1983 ) ยีนรหัสสำหรับเอนไซม์ ซึ่งยีนต้านยา hygromycin B
ล้างพิษผ่านกรุงเทพมหานคร . ยีนต้านยา hygromycin B
เป็นอะมิโนไซคริทอลยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนใน
ทั้งโพรคาริโ eucaryotes และโดยรบกวนทั้งการเคลื่อนย้ายและการ aminoacyl Protein
ทีอาร์เอ็นเอ ( วอลดรอนและ

คนอื่น 1985 )ยีนที่พบในพืชดัดแปรพันธุกรรมหลายอย่าง เช่น ข่มขืน , ข้าว ,
ข้าวโพด และอื่นๆ ( หลี่ andnarayana 1991 ; sawahel 2003 ) . อย่างไรก็ตาม , ก่อนที่
พืชเหล่านี้สามารถ commercialized จำเป็นต้องดำเนินการ
การประเมินความปลอดภัย ( FAO / WHO 2001 ) .
ตั้งแต่ระดับของ HPT ในพืชเหล่านี้คือ ต่ำ , HPT ผลิต
ใน E . coli ที่ได้รับโปรตีนเพียงพอในการย่อยอาหารและ HPT หลอด
การศึกษาสัตว์

ไล่จาก ซิกม่า ( Sigma Co . , เซนต์ หลุยส์ , โม , สหรัฐอเมริกา ) เมาส์ antirat
IgE และ IgG HRP แพะ antimouse ซีรั่มซื้อ
จาก pharmigen ( pharmigen Bioscience Co . , Inc . , USA )
his6 ด้วยแท็ก โมโนโคลนอลแอนติบอดีและ Ni NTA โลหะ affinity คอลัมน์
ซื้อมาจาก novagen ( Merck Co . , ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี )
o-phenylene ไดอะซื้อ fromsigma . ชุด
หนูมีนซื้อมาจาก rapidbio calabas , รัฐแคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา และอัลลิซิน
และชุดใช้ตามคำแนะนำของ
ซัพพลายเออร์ สารเคมีทั่วไปอื่น ๆทั้งหมดถูกวิเคราะห์เกรด