Quantitation of bacteria and yeasts

Quantitation of bacteria and yeasts is an important tool in molecular biology. In particular, the ability to transfer plasmids into E. coli enables production of recombinant proteins. Endpoint quantitation of E. coli is used to normalize results to a standard amount of bacteria and inhibitory effects can be studied via growth studies. Absorbance at 600 nm is the recommended wavelength for measuring solutions containing E. coli or other bacterial samples.

Research citing the use of microplate readers measuring cell growth at 600 nm is plentiful. Stubbings, et al, validated microplate reader 600 nm cell growth reading compared to classical methods for studying post antibiotic effects [1], while Shapiro, et al, used lysogen growth measurement at 600 nm to develop a means to detect sublethal concentrations of antibacterial agents that can interfere with prokaryotic translation [2]. Brocklehurst, et al, examined the metal-ion tolerance of various strains of E. coli by determining the MICs of each culture at 600 nm in the presence of several metals after a 24-hour period [3]. Chekmenev, et al, studied the amphipathic cationic antimicrobial peptides from fish, amidated and non-amidated piscidins 1 and 3, using a modified liquid growth assay, which was read at 600 nm and the MICs reported [4]. Lauth, et al, isolated a novel antimicrobial peptide, moronecidin, from the skin and gill of hybrid striped bass and the antimicrobial properties were monitored with a modified liquid growth assay read at 600 nm [5]. Blanchard, et al, studied OxyR and SoxRS systems in E. coli co-regulated SoxRS-dependent and independent genes modulated by superoxide minutes after exposure to stress.

The above research notes that while a variety of absorbance readers can read bacterial endpoint and growth curves at 600 nm, maintaining a uniform 37ºC is recommended for reading the changing absorbance of the growth of E. coli over long periods of time eliminating variations due to room temperature changes.

BioTek markets a variety of readers with the capability of monitoring growth curves at 600 nm with temperature control at 37ºC including the new Synergy 4 Multi-Mode Microplate Reader with Hybrid Technology, the Synergy 2 and Synergy HT Multi-Mode Microplate Readers, the PowerWave series of Monochromator Based Microplate Readers and the ELx808IU Filter Based Microplate Reader.

This application note demonstrates the capability of a BioTek plate reader to reading an E. coli growth assay and to illustrate the effect of a growth inhibitor such as ethanol. The experiment below uses the Synergy 4 Multi-Mode Microplate Reader with Hybrid Technology which combines a quad monochromator system with high powered xenon lamp for flexible wavelength selection with another optical system featuring a quartz halogen lamp and filter wheel system for assays requiring the most sensitive detection limits including fluorescent proteins, time resolved fluorescence, the demands of FRET and TR-FRET, fluorescence polarization, ratiometric ion channel assays, filtered luminescence such as BRET and BRET2 and AlphaScreen®. The experiment below uses the third optical system in the Synergy 4, a super quiet xenon flash lamp with dedicated monochromator for absorbance reading.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์หาปริมาณแบคทีเรียและ yeasts เป็นเครื่องมือสำคัญในอณูชีววิทยา โดยเฉพาะ สามารถโอน plasmids ใน E. coli ทำให้ผลิต recombinant โปรตีน การวิเคราะห์หาปริมาณปลายของ E. coli ใช้ปกติผลลัพธ์เป็นจำนวนมาตรฐานของแบคทีเรีย และลิปกลอสไขผลที่สามารถศึกษาผ่านการศึกษาการเจริญเติบโต Absorbance ที่ 600 nm เป็นความยาวคลื่นแนะนำโซลูชั่นที่ประกอบด้วย E. coli หรืออื่น ๆ แบคทีเรียตัวอย่างการวัด

วิจัยอ้างถึงใช้อ่าน microplate วัดเจริญเติบโตของเซลล์ที่ 600 nm ค่ะ Stubbings, et al, microplate ตรวจอ่าน 600 nm เซลล์เจริญเติบโตอ่านเปรียบเทียบกับวิธีคลาสสิกศึกษาลงยาปฏิชีวนะผล [1], ในขณะที่ Shapiro, et al ใช้วัดการเจริญเติบโต lysogen ที่ 600 nm ในการพัฒนาวิธีการตรวจหาความเข้มข้น sublethal ตัวแทนต้านเชื้อแบคทีเรียที่สามารถรบกวนแปล prokaryotic [2] Brocklehurst, et al ตรวจสอบยอมรับไอออนโลหะของสายพันธุ์ต่าง ๆ ของ E. coli โดยกำหนด MICs ของแต่ละวัฒนธรรมที่ 600 nm ในต่อหน้าของโลหะต่าง ๆ หลังจากรอบระยะเวลา 24 ชั่วโมง [3] Chekmenev, et al ศึกษา amphipathic cationic จุลินทรีย์เปปไทด์จากปลา amidated และ amidated ไม่ใช่ piscidins 1 และ 3 ใช้ปรับเปลี่ยนการเจริญเติบโตของเหลววิเคราะห์ ซึ่งถูกอ่านที่ 600 nm และ MICs การรายงาน [4] Lauth, et al แยกต่างหากเปปจุลินทรีย์เป็นนวนิยาย moronecidin จากผิวหนังและเหงือกของไฮบริ striped เบสและคุณสมบัติต้านจุลชีพถูกตรวจสอบ ด้วยการวิเคราะห์การเจริญเติบโตของเหลวแก้ไขอ่านที่ 600 นาโนเมตร [5] Blanchard, et al ศึกษาระบบ OxyR และ SoxRS ใน E. coli ร่วมควบคุม SoxRS ขึ้นอยู่กับและยีนอิสระสันทัดซูเปอร์ออกไซด์นาทีหลังจากสัมผัสกับความเครียด

การวิจัยดังกล่าวบันทึกที่ขณะผู้อ่าน absorbance ที่หลากหลายสามารถอ่านโค้งปลายทางและเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ 600 nm รักษาเหมือน 37ºC เหมาะสำหรับการอ่าน absorbance เปลี่ยนแปลงของการเจริญเติบโตของ E. coli มากกว่าระยะเวลาตัดรูปเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิห้องนาน

BioTek ตลาดผู้อ่าน มีความสามารถในการตรวจสอบเส้นโค้งการเจริญเติบโตที่ 600 nm มีการควบคุมอุณหภูมิที่ 37ºC ที่รวมใหม่ Synergy 4 โหมดมัลติ Microplate อ่าน ด้วย เทคโนโลยีไฮบริด Synergy 2 และ Synergy เอชทีมัลติโหมด Microplate อ่าน ชุด PowerWave ของ Monochromator อยู่ Microplate อ่านและที่ ELx808IU กรองตาม Microplate Reader

หมายเหตุโปรแกรมประยุกต์นี้แสดงให้เห็นถึงความสามารถของเครื่องอ่านแผ่น BioTek เพื่ออ่านวิเคราะห์การเจริญเติบโตของ E. coli และแสดงให้เห็นถึงผลของสารยับยั้งการเจริญเติบโตเช่นเอทานอล ทดลองด้านล่างใช้ Synergy 4 โหมดมัลติ Microplate Reader ด้วยเทคโนโลยีไฮบริดซึ่งรวมระบบควอด monochromator กับโคมไฟซีนอนสูงขับเคลื่อนสำหรับความยาวคลื่นยืดหยุ่นเลือกระบบแสงอีกแห่งควอตซ์ฮาโลเจนโคมไฟและกรองล้อระบบสำหรับ assays จำกัดตรวจสำคัญมากที่สุดรวมทั้งโปรตีนเรืองแสง ต้องใช้เวลาแก้ไข fluorescence ความต้องการของช่องไอออนของ ratiometric ไม่สบายใจและ TR-ไม่สบายใจ fluorescence โพลาไรซ์ assays กรอง luminescence เบรต และ BRET2 และ AlphaScreen ® ด้านล่างทดลองใช้ระบบออปติคอล 3 4 Synergy โคมไฟแฟลชซีนอนซูเปอร์เงียบกับ monochromator ทุ่มเทอ่าน absorbance

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณของเชื้อแบคทีเรียและยีสต์เป็นเครื่องมือที่สำคัญในการทางอณูชีววิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งความสามารถในการถ่ายโอนพลาสมิดใน E. coli ช่วยให้การผลิตโปรตีน ปริมาณปลายทางของ E. coli จะใช้ในการปรับผลเป็นจำนวนเงินที่มาตรฐานของเชื้อแบคทีเรียและยับยั้งสามารถศึกษาผ่านการศึกษาการเจริญเติบโต การดูดกลืนแสงที่ 600 นาโนเมตรเป็นความยาวคลื่นแนะนำสำหรับการวัดการแก้ปัญหาที่มี E. coli หรืออื่น ๆ ตัวอย่างแบคทีเรียวิจัยอ้างการใช้งานของผู้อ่านของไมโครวัดเจริญเติบโตของเซลล์ที่ 600 นาโนเมตรอุดมสมบูรณ์ Stubbings, et al, ผู้อ่านตรวจสอบไมโคร 600 นาโนเมตรการอ่านการเติบโตของเซลล์เมื่อเทียบกับวิธีคลาสสิกสำหรับการศึกษาผลกระทบของการโพสต์ยาปฏิชีวนะ [1] ในขณะที่ชาปิโร, et al, การวัดการเจริญเติบโตที่ใช้ lysogen ที่ 600 นาโนเมตรที่จะพัฒนาวิธีการในการตรวจสอบความเข้มข้นของ sublethal ของตัวแทนต้านเชื้อแบคทีเรีย ที่สามารถยุ่งเกี่ยวกับการแปลนิวเคลียส [2] Brocklehurst, et al, การตรวจสอบความทนทานต่อโลหะไอออนของสายพันธุ์ต่างๆของ E. coli โดยการกำหนด MICs ของแต่ละวัฒนธรรมที่ 600 นาโนเมตรในการปรากฏตัวของโลหะหลายหลังจากที่ระยะเวลา 24 ชั่วโมง [3] Chekmenev, et al, การศึกษาเปปไทด์ amphipathic ประจุบวกต้านจุลชีพจากปลา amidated และ piscidins ไม่ amidated 1 และ 3 โดยใช้การวิเคราะห์การปรับเปลี่ยนการเจริญเติบโตของของเหลวซึ่งได้รับการอ่านที่ 600 นาโนเมตรและ MICs รายงาน [4] Lauth, et ​​al, แยกเปปไทด์ต้านจุลชีพนวนิยาย moronecidin จากผิวหนังและเหงือกของปลากะพงไฮบริดและคุณสมบัติต้านจุลชีพได้รับการตรวจสอบด้วยการทดสอบของเหลวแก้ไขการเจริญเติบโตอ่านที่ 600 นาโนเมตรได้ [5] บลอนชา, et al, การศึกษาและ OxyR SoxRS ระบบใน E. coli ร่วมควบคุมยีน SoxRS ขึ้นและเป็นอิสระจากการปรับ superoxide นาทีหลังจากที่สัมผัสกับความเครียดในการวิจัยดังกล่าวตั้งข้อสังเกตว่าในขณะที่ความหลากหลายของการดูดกลืนแสงผู้อ่านสามารถอ่านแบคทีเรียปลายทางและการเจริญเติบโตของเส้นโค้ง ที่ 600 นาโนเมตรการรักษาเครื่องแบบ 37 º C เป็นที่แนะนำสำหรับการอ่านการดูดกลืนแสงที่เปลี่ยนแปลงไปของการเจริญเติบโตของเชื้อ E. coli ในช่วงเวลาที่ยาวนานของเวลาการขจัดรูปแบบเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิห้องBiotek ตลาดที่หลากหลายของผู้อ่านที่มีความสามารถในการตรวจสอบการเจริญเติบโตของเส้นโค้งที่ 600 นาโนเมตรที่มีการควบคุมอุณหภูมิที่ 37 องศาเซลเซียสใหม่รวมทั้งการทำงานร่วมกัน 4 โหมด Multi ไมโครอ่านด้วยเทคโนโลยีไฮบริด, Synergy 2 และผู้อ่าน Synergy HT หลายโหมดไมโครชุด POWERWAVE ของผู้อ่าน monochromator ตามไมโครและ ELx808IU กรองตามไมโครอ่านโปรแกรมนี้ บันทึกแสดงให้เห็นถึงความสามารถในการอ่านแผ่น Biotek กับการอ่าน E. coli ทดสอบการเจริญเติบโตและเพื่อแสดงให้เห็นถึงผลของการยับยั้งการเจริญเติบโตเช่นเอทานอล การทดลองด้านล่างนี้ใช้ Synergy 4 โหมด Multi ไมโครอ่านด้วยเทคโนโลยีไฮบริดที่ผสมผสานระบบ monochromator รูปสี่เหลี่ยมด้วยโคมไฟซีนอนสูงขับเคลื่อนสำหรับการเลือกความยาวคลื่นมีความยืดหยุ่นกับระบบแสงอื่นที่มีหลอดฮาโลเจนควอทซ์และระบบล้อกรองการตรวจที่จำเป็นต้องใช้การตรวจสอบที่มีความสำคัญมากที่สุด จำกัด รวมทั้งโปรตีนเรืองแสงเวลาเรืองแสงการแก้ไขความต้องการของหงุดหงิดและ TR-สบายใจเรืองแสงโพลาไรซ์ ratiometric ตรวจช่องไอออนกรองแสงเรืองเช่น BRET และ BRET2 และ AlphaScreen ® การทดลองด้านล่างจะใช้ระบบออปติคอลที่สามในการทำงานร่วมกัน 4, โคมไฟแฟลชซีนอนซูเปอร์เงียบสงบกับ monochromator เฉพาะสำหรับการอ่านการดูดกลืนแสง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์ของแบคทีเรียและยีสต์ที่เป็นเครื่องมือสำคัญในชีววิทยาระดับโมเลกุล โดยเฉพาะความสามารถในการถ่ายโอนพลาสมิดเข้าสู่ E . coli ช่วยให้การผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ . ทั้งนี้ เซลล์ของ E . coli ใช้ปกติผลให้ปริมาณมาตรฐานของแบคทีเรียและผลการยับยั้งสามารถศึกษาผ่านการศึกษาการเจริญเติบโตการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 600 nm เป็นแนะนำวัดสารละลายตัวอย่างแบคทีเรีย E . coli หรืออื่น ๆ .

งานวิจัยอ้างใช้ผู้อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยวัดการเจริญเติบโตของเซลล์ที่ 600 nm อุดมสมบูรณ์ stubbings , et al , ตรวจสอบพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน 600 nm การเจริญเติบโตของเซลล์อ่านเมื่อเทียบกับวิธีคลาสสิก เพื่อศึกษาผลการโพสต์ [ 1 ] ในขณะที่ Shapiro , et al ,ใช้ในการวัดการเจริญเติบโต lysogen ที่ 600 nm ที่จะพัฒนาวิธีการตรวจหาความเข้มข้นของแบคทีเรียการตัวแทนที่สามารถแทรกแซงกับโพรคาริโอติกแปล [ 2 ] บร็อกลีเฮิร์สต , et al , ตรวจโลหะไอออนความอดทนของสายพันธุ์ต่างๆ ของเชื้อ E . coli โดยกำหนดไมค์ของแต่ละวัฒนธรรมที่ 600 nm ในการแสดงตนของโลหะหลายหลังจากระยะเวลา 24 ชั่วโมง [ 3 ] chekmenev , et al ,ศึกษามาตรฐาน เปปไทด์จากยาแอมฟิพาติกปลา amidated และไม่ amidated piscidins 1 และ 3 ใช้แก้ไขการใช้ของเหลวที่ถูกอ่านที่ 600 nm และไมค์รายงาน [ 1 ] ลอท , et al , แยกนวนิยายยา moronecidin เปปไทด์ ,จากผิวหนังและเหงือกของปลากะพงไฮบริดและคุณสมบัติต้านจุลชีพที่ได้ตรวจสอบกับการแก้ไข ( อ่านของเหลวที่ 600 nm [ 5 ] ชาร์ด , et al , การศึกษาและระบบ oxyr soxrs ใน E . coli Co soxrs ควบคุมตัวแปรอิสระและยีนปรับโดยซุปเปอร์นาทีหลังจากการสัมผัสกับความเครียด .

บันทึกการวิจัยข้างต้นในขณะที่ความหลากหลายของผู้อ่านสามารถอ่านข้อมูลที่มีค่าและเส้นโค้งการเจริญเติบโตที่ 600 nm , การรักษาชุด 37 º C แนะนำสำหรับการอ่านการเปลี่ยนแปลงค่าการเจริญเติบโตของเชื้อ E . coli มากกว่าระยะเวลานานของเวลาการเปลี่ยนแปลงเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิในห้อง

ตลาดที่หลากหลายของผู้อ่าน ที่มีความสามารถในการตรวจสอบที่เส้นโค้งการเจริญเติบโต 600 nm ที่มีการควบคุมอุณหภูมิที่ 37 º C รวมใหม่ ( 4 โหมด multi พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่านด้วยเทคโนโลยีไฮบริด biotek ( 2 ) , และโหมด ht หลายพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ผู้อ่าน ชุด powerwave ของโมโนโครเมเตอร์จากผู้อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยและ elx808iu กรองพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
อ่านตาม
หมายเหตุ โปรแกรมนี้แสดงให้เห็นถึงความสามารถของ biotek จานอ่านอ่าน E . coli ในการแสดงผลของตัวยับยั้งการเจริญเติบโต เช่น เอทานอลการทดลองข้างล่างใช้พลัง 4 มัลติโหมดไฮบริดเทคโนโลยีซึ่งรวมกับพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่านรูปสี่เหลี่ยมระบบโมโนโครเมเตอร์ที่มีพลังงานสูงไฟซีนอนสำหรับการเลือกความยาวคลื่นแสงที่มีความยืดหยุ่นกับอีกระบบควอทซ์ฮาโลเจนโคมไฟและล้อระบบกรองสำหรับวิธีที่ต้องการที่อ่อนไหวที่สุด จำกัด รวมทั้งตรวจหาโปรตีนเรืองแสง , เวลาการแก้ไขการเรืองแสงความต้องการและการ tr-fret ฉลุ , โพลาไรเซชัน ratiometric ช่องทางไอออน ) , กรองแสง เช่น bret2 alphascreen และ Bret และ® . การทดลองใช้ระบบแสงด้านล่างที่สาม ( 4 , super แฟลชซีนอนโคมไฟเงียบโดยโมโนโครเมเตอร์สำหรับค่า

อ่านต่อ