50,000 cells/well in 100 µL Minimal

50,000 cells/well in 100 µL Minimal Essential Media (MEM) with 10% Fetal Bovine Serum (FBS). Incubate the cells for 16 hr at 37 °C. Replace the cell culture medium with MEM containing 2% Bovine Serum
Albumin. Dissolve the test สารประกอบ in 0.5% DMSO and prepare serial dilutions in

15 half-log increments. Add the serially diluted test สารประกอบ into separate wells. Incubate for 0.5 hr at 37 °C. Thereafter replace the cell culture medium with a medium of the same
composition, but which รวมถึง 50 µM 13Crn-oleate and 300 µM hydropropyl-P•

cyclodextrine. Incubate for an additional 4 hr at 3 7 °C. Discard the cell culture medium by flipping the microplate over thereby draining the wells and then soaking up any
20 residual media from the wells with a paper towel. Dry the microplate at ambient temperature (~21 °C) for 10 min. Add aliquots of 125 µL of solvent (isopropyl alcohol:tetrahydrofuran:methanol: chloroform, in a ratio of 90: 10:2.5 :2.5 v/v), an internal standard for ฟอสฟาทิดิลโคลีน (PC), and an internal standard for triacylglycerol (TG)
to each well. Seal and shake the plate for 30 min at ambient temperature. Transfer 100
25 µL aliquots of the upper phase of each well into a wells of a deep-well plate (2 mL per well). Analyze the contents of the wells using mass-spectrometry analysis. Measure both
triolein with a single 13C18-oleate มอยอิตี้ and POPC using liquid โครมาโทกราฟี/mass spectroscopy method (LC/MS). The degree of incorporation of a single 13C18-oleate

มอยอิตี้ into triolein, normalized to the concentration of 1-palmitoyl-2-โอลีโออิล-

30 ฟอสฟาทิดิลโคลีน (POPC) is used as a measure ofDGAT2 activity.



22


Determine the IC50 for each สารประกอบ, using a 4 parameter logistic curve fit. The geometric mean for the calculated IC50 values for Examples 1 and 2 are listed in Table 2 below. The data listed in Table 2 demonstrate that both Examples 1 and 2 inhibit human DGAT2 in a cell based assay.
5 Table 2
In vivo Pharmacodynamic Assay

This assay measures the potency of สารประกอบ by measuring the reduction in plasma triglycerides in mice treated with the test สารประกอบ compared to control animals
10 that are treated only with the vehicle สารละลาย. Male, C57BL6 mice (10-11 weeks old, each approximately 22 gin weight) are used in this assay.
Triglycerides synthesized in the liver are secreted into circulation as a component of the Very Low Density ไลโปโปรตีน (VLDL). To prevent degradation of triglycerides in circulation by the ไลโปโปรตีน Lipase (LPL), this assay uses IV injection of a detergent,
15 tyloxapol, which inhibits activity of LPL. Since another enzyme, DGATl, participates in the synthesis ofliver triglyceride, a saturating dose of a DGATl inhibitor (sodium {trans-
4-[ 4-( 4-amino-7,7-diเมธิล-7H-pyrimido[ 4,5-b ][1,4]oxazin-6-
yl)phenyl]cyclohexyl }acetate, IUPAC ACDLABS naming convention, see Dow et al. Bioorg. & Med. Chem., (2011) 21(20), 6122-6128) is also used in this assay.

20 Prepare a สารแขวนลอย of the test สารประกอบ (สารยับยั้ง DGAT2 ) mixed with the DGATl inhibitor in a suitable vehicle, to assure dosing of 10 mL/kg สารประกอบ สารแขวนลอย and 3 mg/kg dose of the DGA Tl inhibitor. In this set of experiments the vehicle is 1 % Hydroxyethylcellulose, 0.25% Polysorbate 80, and 0.05% Antifoam in
purified water. Fast the mice for 4 hours prior to treatment. Administer to the test mice,

25 by gavage, the สารแขวนลอย of the test สารประกอบ (สารยับยั้ง DGAT2 ) at 5 doses ranging from 0.1to10 mg/kg, togอีเธอร์ with the 3 mg/kg dose of the DGATl inhibitor. Similarly administer to a set of control mice the vehicle alone (10 mL/ g). Thirty minutes later,



23


administer to each mouse, by retro-orbital injection, a 400 mg/kg dose of tyloxapol. After an additional 30 minutes, euthanize the mice with C02.
Collect the blood via cardiac puncture into tube containing the anti-coagulant

EDTA. Collect the plasma following centrifugation of blood at 3,000 g for 10 min.

5 Freeze the plasma samples on dry ice until they are to be analyzed. Thaw the samples using wet ice. Determine the concentration of triglycerides in the plasma using an automated clinical chemistry analyzer. Reduction in total triglycerides in the test mice is calculated relative to the concentration of triglycerides in the control mice. The results
for Examples 1 and 2 are listed below in Table 3. The data in Table 3 demonstrates that

10 Examples 1 and 2 reduce the concentration of plasma triglycerides.



Table 3

Example EDso (mg/kg)

1 0.29

2 0.27


In vivo Efficacy Model

15 This assay measures the potency of

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

50,000 เซลล์/รวมใน 100 µL สื่อสำคัญที่น้อยที่สุด (MEM) 10% ซีรั่มวัวทารก (FBS) ฟักเซลล์ 16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แทนที่สื่อวัฒนธรรมเซลล์ มีหน่วยความจำที่ประกอบด้วย 2% ซีรั่มวัวAlbumin ละลายสารประกอบทดสอบใน 0.5% DMSO และเตรียมหมาย dilutions ในเพิ่มครึ่งบันทึก 15 เพิ่มสารประกอบเจือจาง serially ทดสอบลงในหลุมที่แยกต่างหาก ฟัก 0.5 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หลังจากนั้นแทนสื่อวัฒนธรรมเซลล์กลางเดียวกันองค์ประกอบ แต่ที่รวมถึง 50 µM 13Crn-oleate และ 300 ไมครอน hydropropyl-P•cyclodextrine ฟักที่ชม 4 เพิ่มเติมที่ 3 7 องศาเซลเซียส ละทิ้งสื่อวัฒนธรรมเซลล์ โดยพลิกการ microplate จึงเปลืองหลุม และแช่แล้ว ค่าใด ๆสื่อเหลือ 20 จากบ่อด้วยผ้ากระดาษ แห้ง microplate ที่อุณหภูมิแวดล้อม (~ 21 ° C) 10 นาทีเพิ่ม aliquots ของ µL 125 ของตัวทำละลาย (isopropyl แอลกอฮอล์: tetrahydrofuran:methanol: คลอโรฟอร์มในอัตราส่วน 90: 10:2.5: 2.5 v/v), มีมาตรฐานภายในสำหรับฟอสฟาทิดิลโคลีน (PC), และมีมาตรฐานภายในสำหรับ triacylglycerol (TG)การรวมแต่ละ ประทับตรา และเขย่าแผ่น 30 นาทีที่อุณหภูมิ โอน 100Aliquots µL 25 ของระยะด้านบนของแต่ละอย่างลงในหลุมของแผ่นบาดาล (2 mL ต่อดี) วิเคราะห์เนื้อหาของบ่อที่ใช้ในการวิเคราะห์มวลหลัก วัดทั้งสองtriolein เดียว 13C 18 oleate มอยอิตี้และ POPC ใช้วิธีมิกโครมาโทกราฟี/มวลของเหลว (LC/MS) ระดับของ 18 13C เดียว-oleateมอยอิตี้เป็น triolein ตามปกติเพื่อความเข้มข้น 1-palmitoyl-2-โอลีโออิล -30 ฟอสฟาทิดิลโคลีน (POPC) ใช้เป็นกิจกรรมวัด ofDGAT2 22กำหนด IC50 สำหรับแต่ละสารประกอบ ใช้พารามิเตอร์ 4 โลจิสติกโค้งพอดี เรขาคณิตสำหรับคำนวณค่า IC50 สำหรับตัวอย่าง 1 และ 2 แสดงอยู่ในตารางที่ 2 ด้านล่าง ข้อมูลที่แสดงในตารางที่ 2 แสดงตัวอย่าง 1 และ 2 ยับยั้ง DGAT2 มนุษย์ในทดสอบเซลล์ที่ใช้ตาราง 5 2วิเคราะห์เภสัชในสัตว์ทดลองทดสอบนี้วัดความแรงของสารประกอบ โดยการวัดการลดในพลาสมาไตรกลีเซอไรด์ในหนูรักษา ด้วยสารประกอบการทดสอบเปรียบเทียบกับการควบคุมสัตว์10 ซึ่งถือว่าเท่ากับสารละลายรถ ชาย หนู C57BL6 (10-11 สัปดาห์ แต่ละน้ำหนักประมาณ 22 กิน) ที่ใช้ในการทดสอบนี้ไตรกลีเซอไรด์ที่สังเคราะห์ในตับจะหลั่งเข้าไปในการหมุนเวียนเป็นส่วนประกอบของไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำมาก (VLDL) เพื่อป้องกันการสลายตัวของไตรกลีเซอไรด์ใน โดยไลโปโปรตีนเอนไซม์ไลเปส (LPL), ทดสอบนี้ใช้ฉีด IV ของผงซักฟอกtyloxapol 15 ซึ่งยับยั้งกิจกรรมของบี ตั้งแต่เอนไซม์อื่น DGATl มีส่วนร่วมในการสังเคราะห์ ofliver ไตรกลีเซอไรด์ ยายับยั้ง DGATl (โซเดียม {ทรานส์-saturating4- [4- (4-amino-7,7-diเมธิล-7H-pyrimido [4, 5-บี] [1,4] oxazin - 6-cyclohexyl ฟีนิลเซต)] } อะซิเตท ตั้งชื่อ ACDLABS ยิ่ง ๆ ดูดาวร้อยเอ็ด Bioorg และเคมี. med., (2011) 21(20), 6122-6128) ยังใช้ในการทดสอบนี้20 เตรียมสารแขวนลอยของสารประกอบทดสอบ (สารยับยั้ง DGAT2) ผสมกับสารยับยั้ง DGATl ในรถยนต์เหมาะสม เพื่อให้มั่นใจจ่าย 10 มล.กิโลกรัมสารประกอบสารแขวนลอยและ 3 มิลลิกรัมกิโลกรัมยายับยั้ง DGA Tl ในชุดการทดลอง รถเป็น 1% Hydroxyethylcellulose, 0.25% Polysorbate 80 และ 0.05% Antifoam ในน้ำบริสุทธิ์ รวดเร็วหนู 4 ชั่วโมงก่อนการรักษา ดูแลการทดสอบเมาส์25 โดยทางหลอดอาหาร สารแขวนลอยของสารประกอบทดสอบ (สารยับยั้ง DGAT2) ที่ 5 ปริมาณตั้งแต่ 0.1to10 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม togอีเธอร์ กับยา 3 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมของสารยับยั้ง DGATl ในทำนองเดียวกัน จัดการกับชุดควบคุมเมาส์รถคนเดียว (10 mL/g) สามสิบนาทีต่อมา 23จัดการกับเมาส์แต่ละ โดยการฉีดย้อนยุคออร์บิทัล tyloxapol ยา 400 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม หลังจากเพิ่มเติม 30 นาที euthanize หนู ด้วย C02รวบรวมเลือดผ่านหัวใจเจาะลงในหลอดที่ประกอบด้วยการรับEDTA เก็บพลาสม่าไปหมุนเหวี่ยงเลือดที่ 3,000 กรัมสำหรับ 10 นาที5 ตรึงตัวอย่างพลาสม่าบนน้ำแข็งแห้งจนจะวิเคราะห์ ทรานตัวอย่างใช้เปียกน้ำแข็ง กำหนดความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในพลาสมาโดยใช้การวิเคราะห์อัตโนมัติทางเคมีคลินิก ลดไตรกลีเซอไรด์รวมในหนูทดสอบคำนวณสัมพันธ์กับความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในหนูควบคุม ผลลัพธ์ตัวอย่าง 1 และ 2 มีดังในตารางที่ 3 ข้อมูลในตารางที่ 3 แสดงที่10 ตัวอย่าง 1 และ 2 ลดความเข้มข้นของพลาสมาไตรกลีเซอไรด์ตารางที่ 3อย่าง EDso (มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม)1 0.292 0.27รุ่นประสิทธิภาพในสัตว์ทดลอง15 ทดสอบนี้วัดความแข็งแรงของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

50,000 เซลล์ / ดีใน 100 ไมโครลิตรสื่อที่จำเป็นน้อยที่สุด (MEM) 10% ของทารกในครรภ์โคเซรั่ม (FBS) บ่มเพาะเซลล์ 16 HR ที่ 37 ° C แทนที่อาหารเลี้ยงเซลล์ที่มี MEM มี 2% โคเซรั่ม
อัลบูมิ ละลายทดสอบสารประกอบ 0.5% DMSO และเตรียมความพร้อมในการเจือจางอนุกรม15 เพิ่มขึ้นทีละครึ่งเข้าสู่ระบบ เพิ่มการทดสอบปรับลดลำดับสารประกอบลงในหลุมที่แยกต่างหาก ฟัก 0.5 HR ที่ 37 ° C หลังจากนั้นเป็นต้นมาแทนที่อาหารเลี้ยงเซลล์ที่มีสื่อกลางในการเดียวกันองค์ประกอบ แต่รวมถึง 50 ไมครอน 13Crn-oleate และ 300 ไมครอน hydropropyl-P • cyclodextrine บ่มเพาะสำหรับอีก 4 ทรัพยากรบุคคลที่ 3 7 ° C ทิ้งกลางการเพาะเลี้ยงเซลล์โดยการพลิก microplate มากกว่าจึงระบายน้ำบ่อแล้วดื่มด่ำใด ๆ20 สื่อที่เหลือจากบ่อด้วยผ้าขนหนูกระดาษ แห้ง microplate ที่อุณหภูมิห้อง (~ 21 ° C) เป็นเวลา 10 นาที เพิ่ม aliquots 125 ไมโครลิตรของตัวทำละลาย (isopropyl แอลกอฮอล์: tetrahydrofuran: เมทานอล: คลอโรฟอร์มในอัตราส่วน 90: 10: 2.5: 2.5 v / v) ซึ่งเป็นมาตรฐานภายในสำหรับฟอสฟาทิดิลโค ลีน (PC) และมาตรฐานภายในสำหรับ triacylglycerol (TG) แต่ละอย่างดี ปิดผนึกและเขย่าจานเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง โอน 100 25 aliquots ไมโครลิตรของเฟสบนของแต่ละดีในหลุมของจานลึกดี (2 มิลลิลิตรต่อกัน) วิเคราะห์เนื้อหาของหลุมโดยใช้การวิเคราะห์มวล spectrometry วัดทั้งtriolein เดียวกับ 13C18-oleate มอยอิตี้และ popc ใช้ของเหลวโครมาโทกราฟี / วิธีสเปกโทรสโกมวล (LC / MS) ระดับของการรวมตัวกันของเดี่ยว 13C18-oleate มอยอิตี้เข้า triolein, ปกติกับความเข้มข้นของ 1 Palmitoyl-2- โอลีโออิล - 30 ฟอสฟาทิดิลโค ลีน (popc) ถูกนำมาใช้ เป็นกิจกรรมที่วัด ofDGAT2. 22 กำหนด IC50 สำหรับแต่ละสารประกอบโดยใช้พารามิเตอร์ 4 โค้งพอดีโลจิสติก ค่าเฉลี่ยเรขาคณิตสำหรับค่า IC50 คำนวณสำหรับตัวอย่างที่ 1 และ 2 มีการระบุไว้ในตารางที่ 2 ด้านล่าง ข้อมูลที่ระบุไว้ในตารางที่ 2 แสดงให้เห็นว่าทั้งสองตัวอย่างที่ 1 และ 2 ยับยั้งมนุษย์ DGAT2 ในการทดสอบตามเซลล์. 5 ตารางที่ 2 ในร่างกายของเภสัชวิเคราะห์ทดสอบนี้วัดแรงของสารประกอบโดยการวัดในการลดระดับไตรกลีเซอไรด์ในหนูรับการรักษาด้วยการทดสอบสารประกอบ เมื่อเทียบกับการควบคุมสัตว์10 ที่มีการรักษาเฉพาะกับรถสารละลาย ชาย, หนู C57BL6 (10-11 สัปดาห์แต่ละน้ำหนักประมาณ 22 จิน) ที่ใช้ในการทดสอบนี้. Triglycerides สังเคราะห์ในตับจะหลั่งในการไหลเวียนเป็นองค์ประกอบของความหนาแน่นต่ำมากไลโปโปรตีน (VLDL) ป้องกันการเสื่อมสลายของไตรกลีเซอไรด์ในการไหลเวียนโดยไลโปโปรตีนไลเปส (LPL) การทดสอบนี้ใช้ฉีด IV ของผงซักฟอก15 tyloxapol ซึ่งยับยั้งการทำงานของ LPL เนื่องจากเอนไซม์อื่น DGATl, มีส่วนร่วมในการสังเคราะห์ ofliver ไตรกลีเซอไรด์, ยาอิ่มตัวของ DGATl ยับยั้ง (โซเดียม {ทรานส์4- [4- (4-Amino-7,7-di เมธิล -7h-pyrimido [4, 5-B] [1,4] oxazin-6- YL) phenyl] cyclohexyl} น้ำนม IUPAC ACDLABS ตั้งชื่อให้ดูดาวโจนส์ et al. Bioorg. Med. Chem., (2011) 21 (20), 6122-6128 ) นอกจากนี้ยังใช้ในการทดสอบนี้. 20 เตรียมสารแขวนลอยของการทดสอบสารประกอบ (สารยับยั้ง DGAT2) ผสมกับสารยับยั้ง DGATl ในรถที่เหมาะสมเพื่อให้มั่นใจว่าการใช้ยา 10 ml / kg ของสารประกอบสารแขวนลอยและ 3 มก. / กก. ปริมาณของ ยับยั้ง DGA Tl อยู่ในชุดของการทดลองนี้รถเป็น 1% hydroxyethylcellulose, 0.25% Polysorbate 80, และ Antifoam 0.05% ในน้ำบริสุทธิ์ รวดเร็วหนูเป็นเวลา 4 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการรักษา จัดการกับหนูทดสอบ25 โดยติดชื้อนานที่สารแขวนลอยของการทดสอบสารประกอบ (สารยับยั้ง DGAT2) ที่ 5 ปริมาณตั้งแต่ 0.1to10 mg / kg TOG อีเธอร์กับ 3 มก. / กก. ปริมาณของสารยับยั้ง DGATl ในทำนองเดียวกันการบริหารจัดการถึงชุดของหนูควบคุมยานพาหนะเพียงอย่างเดียว (10 มิลลิลิตร / กรัม) สามสิบนาทีต่อมา23 จัดการกับการใช้เมาส์แต่ละโดยการฉีดย้อนยุคโคจร 400 mg / kg ปริมาณของ tyloxapol หลังจากเพิ่มอีก 30 นาที euthanize หนูด้วย C02. เก็บเลือดผ่านหัวใจเจาะลงในหลอดที่มีป้องกันการตกตะกอนEDTA เก็บพลาสม่าดังต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยงเลือด 3,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที. 5 ตรึงตัวอย่างพลาสมาบนน้ำแข็งแห้งจนกว่าพวกเขาจะได้รับการวิเคราะห์ ละลายตัวอย่างโดยใช้น้ำแข็งเปียก ตรวจสอบความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในพลาสม่าโดยใช้อัตโนมัติวิเคราะห์ทางเคมีคลินิก ในการลดไตรกลีเซอไรด์รวมในหนูทดสอบที่มีการคำนวณเทียบกับความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในหนูควบคุม ผลสำหรับตัวอย่างที่ 1 และ 2 มีการระบุไว้ด้านล่างในตารางที่ 3 ข้อมูลในตารางที่ 3 แสดงให้เห็นว่า10 ตัวอย่างที่ 1 และ 2 ลดความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์พลาสมา. ตารางที่ 3 ตัวอย่าง EDso (mg / kg) 1 0.29 2 0.27 ในร่างกายประสิทธิภาพรุ่น15 การทดสอบมีขนาดความแรงของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

50 , 000 เซลล์ดี 100 µ l สื่อที่จำเป็นน้อยที่สุด ( แหม่ม ) ร้อยละ 10 ของซีรั่มโค ( FBS ) บ่มเพาะเซลล์ 16 ชม. ที่อุณหภูมิ 37 องศา แทนการเพาะเลี้ยงเซลล์ปานกลางกับแหม่ม ที่ประกอบด้วย 2 % ) เซรั่มอัลบูมิน . ละลายทดสอบสารประกอบ 0.5% DMSO และเตรียมซีเรียลเจือจางใน15 ครึ่งเข้าสู่ระบบเพิ่มขึ้น . ใส่เป็นแบบสารประกอบเจือจางลงในหลุมที่แยกต่างหาก ฟักไข่ 0.5 ชม. ที่ 37 องศา หลังจากนั้นแทนที่เซลล์วัฒนธรรมสื่อเป็นสื่อของเดียวกันองค์ประกอบ แต่ที่รวมถึง 50 µ M 13crn โอลีเอทและ 300 µ hydropropyl-p - ม.cyclodextrine . บ่มเพาะสำหรับอีก 4 ชั่วโมงที่ 3 7 องศา ทิ้งอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์ด้วยการพลิกพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยกว่าจึงระบายบ่อแล้วแช่ขึ้นใด ๆ20 สื่อที่เหลือจากบ่อด้วยผ้ากระดาษ . แห้งในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยที่อุณหภูมิห้อง ( ~ 21 ° C ) เป็นเวลา 10 นาที เพิ่มเฉยๆ 125 µ L ของตัวทำละลาย ( isopropyl แอลกอฮอล์คลอโรฟอร์ม : เมทานอล : : เตตระไฮโดรฟแรนในอัตราส่วน 90 : 10:2.5 : 2.5 V / V ) มาตรฐานภายในฟอสฟาทิดิลโคลีน ( PC ) และภายใน ( TG triacylglycerol มาตรฐานสำหรับ )ไปแต่ละครั้งได้อีกด้วย ซีลและเขย่าจาน 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง โอน 10025 µผมเฉยๆบนเฟสของแต่ละหลุมเป็นบ่อของจานลึกดี ( 2 มล. ต่อด้วย ) วิเคราะห์เนื้อหาของ เวลส์ โดยใช้มวลสาร . วัดได้ทั้งโอลีโอลีเอทมอยอิตี้ popc 13c18 เดียวและใช้โครมาโทกราฟี / มวลวิธีสเปกโทรสโกปีของเหลว ( LC / MS ) การรวมตัวกันของโอลีเอท 13c18 เดี่ยวมอยอิตี้เป็นปกติเพื่อความเข้มข้นของไตรโอลี น , 1-palmitoyl-2 - โอลีโออิล -30 ฟอสฟาทิดิลโคลีน ( popc ) เป็นกิจกรรม ofdgat2 การวัด22หา ic50 แต่ละสารประกอบโดยใช้ 4 พารามิเตอร์เส้นโค้งขนส่งพอดี ค่าเฉลี่ยเรขาคณิตสำหรับคำนวณค่า ic50 ตัวอย่าง 1 และ 2 อยู่ในรางที่ 2 ด้านล่าง ข้อมูลที่ระบุไว้ในตารางที่ 2 แสดงให้เห็นว่า ทั้งสองตัวอย่างที่ 1 และ 2 ยับยั้งมนุษย์ dgat2 ในเซลล์ ( ตามตาราง 5 2โดยกองการทดสอบวิธีนี้วัดความแรงของสารประกอบโดยการวัดการลดไตรกลีเซอไรด์ในพลาสมาในหนูที่ได้รับการทดสอบสารประกอบเมื่อเทียบกับการควบคุมสัตว์10 ที่ปฏิบัติเฉพาะกับรถสารละลาย . เพศชาย c57bl6 หนู ( 8-12 สัปดาห์ แต่ละน้ำหนักประมาณ 22 จิน ) ใช้ในการทดสอบนี้ไตรกลีเซอไรด์ในตับจะสังเคราะห์หลั่งลงในการไหลเวียนเป็นส่วนประกอบของไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำมาก ( VLDL ) เพื่อป้องกันการสลายตัวของไตรกลีเซอร์ไรด์ในการหมุนเวียนโดยไลโปโปรตีนไลเปส ( lpl ) วิธีนี้จะใช้น้ำเกลือฉีดผงซักฟอก ,15 tyloxapol ซึ่งยับยั้งกิจกรรมของ lpl . เนื่องจากเอนไซม์อื่น dgatl , มีส่วนร่วมในการสังเคราะห์ไตรกลีเซอไรด์สูง ofliver , ขนาดของ dgatl inhibitor ( { Trans - โซเดียม4 - [ 4 - ( 4-amino-7,7-di เมธิล - 7H pyrimido [ ] [ ] - 1 , 4 oxazin-6 4,5-bYL ) ) ] cyclohexyl } acetate , acdlabs แบบแผนการตั้งชื่อสากล เห็นดาว et al . bioorg . & Med . Chem . , ( 2011 ) 21 ( 20 ) , 6122-6128 ) ยังใช้ในการทดสอบนี้20 เตรียมสารแขวนลอยของการทดสอบสารประกอบ ( สารยับยั้ง dgat2 ) ผสมกับ dgatl ยับยั้งในยานพาหนะที่เหมาะสม เพื่อให้มั่นใจว่าใช้ 10 มล. / กก. สารประกอบสารแขวนลอยและ 3 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ปริมาณของ dga TL ยับยั้ง . ในชุดการทดลองของรถคันนี้คือ 1% hydroxyethylcellulose เบท 0.25% , 80 , และ 0.05 % antifoam ในน้ำบริสุทธิ์ เร็วหนู 4 ชั่วโมงก่อนการรักษา ให้ กับหนูนา ทดสอบ25 โดย gavage , สารแขวนลอยของการทดสอบสารประกอบ ( สารยับยั้ง dgat2 ) ที่ 5 ขนาด ตั้งแต่ 0.1to10 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ถอกอีเธอร์กับ 3 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ปริมาณของ dgatl ยับยั้ง . ในทํานองเดียวกันให้กับชุดของหนูควบคุมรถคนเดียว ( ml / 10 กรัม ) สามสิบนาทีต่อมา23ให้กับแต่ละเมาส์โดยย้อนยุคแบบฉีด , 400 มก. / กก. ปริมาณ tyloxapol . หลังจากนั้นอีก 30 นาที ฆ่าหนูด้วย C02 .เก็บเลือดผ่านหัวใจเจาะเข้าไปในหลอดบรรจุสารป้องกันEDTA เก็บพลาสมาของเลือดที่ปั่นต่อไป 3000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที5 แช่แข็งตัวอย่างพลาสมาบนน้ำแข็งแห้งจนกว่าพวกเขาจะวิเคราะห์ ตัวอย่างการใช้ละลายน้ำแข็งเปียก ตรวจสอบความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในพลาสมาโดยใช้เครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติทางเคมีคลินิก . ในการลดไตรกลีเซอไรด์ในหนูทดลองรวมคำนวณเทียบกับความเข้มข้นของไตรกลีเซอไรด์ในการควบคุมเมาส์ ผลลัพธ์สำหรับตัวอย่างที่ 1 และ 2 ด้านล่างในตารางที่ 3 ข้อมูลในตารางที่ 3 แสดงให้เห็นว่า10 ตัวอย่าง 1 และ 2 ลดความเข้มข้นของพลาสมาไตรกลีเซอไรด์ .ตารางที่ 3ตัวอย่าง edso ( มก. / กก. )1 ใช้2 เดือนโดยประสิทธิภาพ