3. Results and discussion3.1. Purif

3. Results and discussion
3.1. Purification of Z. ophiocephalus trypsin
Trypsin from the viscera of Z. ophiocephalus was extracted and purified by the two-step procedure described in Section 2. In the first step, the crude enzyme extract was fractionated with ammonium sulphate. The precipitate formed at 20–60% (w/v) saturation showed higher specific activity (0.07 U/mg protein) than precipitates formed at 0–20% (0.007 U/mg protein) and 60–80% (0.017 U/mg protein). No activity was detected in the final supernatant. The 20–60% fraction, with the greatest specific activity for trypsin, was then subjected to Sephadex G-100 gel filtration. This procedure yielded three peaks of protease activity using casein as a substrate, and a single peak of trypsin activity using BAPNA as a substrate (results not shown). The specific activity in the initial enzyme extract was 0.05 U/mg protein. After the final purification step, the trypsin was purified 16-fold, with a recovery of 20% and a specific activity of 0.8 U/mg protein, using BAPNA as a substrate (Table 1). Purified trypsin from goby migrated as a single band in SDS-PAGE (Fig. 1a) and native PAGE (Fig. 1b), indicating the homogeneity of the enzyme and confirming that the purified trypsin had only one isoform. The molecular weight of trypsin was estimated to be 23.2 kDa based on SDS-PAGE (Fig. 1a), corresponding to that determined by gel filtration. Most of fish trypsins have been reported to have molecular weights in the range of 23–28 kDa [21]. The molecular weight of Z. ophiocephalus trypsin was similar to those from other fish species, such as walleye pollock (Theragra chalcogramma) [22], true sardine (Sardinops melanostictus) and arabesque greenling (Pleuroprammus azonus) [23], Amazonian fish tambaqui (C. macropomum) [11], grey triggerfish (B. capriscus) [10], and cuttlefish (S. officinalis) [7], and lower than those of trypsins from zebra blenny (S. basilisca) [13], and silver mojarra (D. rhombeus) [12].
Casein-zymogram staining, a very sensitive and rapid assay method that detects nanograms of protein, revealed a unique clear zone of proteolytic activity against the blue background of the gel, indicating the purity of the trypsin (Fig. 1b).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1 การทำให้บริสุทธิ์ของทริปซิน ophiocephalus zทริปซินจากศพของ ophiocephalus z.สกัด และบริสุทธิ์ ด้วยกระบวนการสองขั้นตอนที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 2 ในขั้นแรก สารสกัดเอนไซม์ดิบถูกแบ่ง ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต Precipitate เกิดขึ้นที่ความเข้ม 20-60% (w/v) แสดงให้เห็นว่าสูงกิจกรรม (0.07 U/มิลลิกรัม โปรตีน) กว่า precipitates เกิดที่ 0 – 20% (0.007 U/มิลลิกรัม โปรตีน) และ 60 – 80% (0.017 U/มิลลิกรัม โปรตีน) กิจกรรมไม่พบใน supernatant ขั้นสุดท้าย เศษส่วน 20 – 60% มีกิจกรรมเฉพาะมากที่สุดสำหรับทริปซิน แล้วถูกยัดเยียดให้กรองเจ Sephadex G-100 ตอนนี้หากิจกรรมรติเอสเคซีนโดยใช้เป็นพื้นผิวแบบสามระดับ และช่วงเดียวของทริปซินกิจกรรมที่ใช้ BAPNA เป็นพื้นผิว (ไม่แสดงผล) กิจกรรมในสารสกัดเอนไซม์เริ่มต้น 0.05 U/มิลลิกรัม โปรตีน หลังจากขั้นตอนสุดท้ายฟอก ทริปซินจะได้บริสุทธิ์ 16-fold กู้คืน 20% พร้อมกิจกรรม 0.8 U/มิลลิกรัม โปรตีน ใช้ BAPNA เป็นพื้นผิว (ตารางที่ 1) ทริปซินบริสุทธิ์จากบู่ย้ายเป็นวงเดียวใน SDS-เพ (Fig. 1a) และพื้นหน้า (Fig. 1b), ระบุ homogeneity ของเอนไซม์นี้และยืนยันว่า ทริปซินบริสุทธิ์มี isoform ที่เดียวเท่านั้น น้ำหนักโมเลกุลของทริปซินได้ประมาณ 23.2 kDa ตามหน้า (Fig. 1a), องค์กรที่เกี่ยวข้องที่กำหนด โดยเครื่องกรองเจ มีการรายงานของ trypsins ปลาจะมีน้ำหนักโมเลกุลในช่วง 23 – 28 kDa [21] น้ำหนักโมเลกุลของทริปซิน ophiocephalus z.ผู้จากพันธุ์ปลาอื่น ๆ เช่น pollock walleye (Theragra chalcogramma) [22], จริงแปลก greenling (Pleuroprammus azonus) และปลาซาร์ดีน (บ้าน Sardinops) [23], แอมะซอนปลา tambaqui (C. macropomum) [11], สีเทา (เกิด capriscus) วงศ์ปลาวัว [10], และปลาหมึก (S. officinalis) [7], และต่ำกว่าของ trypsins จากตั๊กแตนหินม้าลาย (S. basilisca) [13], และเงิน mojarra (D. rhombeus) [12]การย้อมสี วิธีการวิเคราะห์อย่างรวดเร็ว และมีความสำคัญมากที่ตรวจพบ nanograms ของโปรตีน zymogram เคซีนเปิดเผยชัดเจนโซนเฉพาะของกิจกรรม proteolytic กับพื้นหลังสีฟ้าของเจ แสดงความบริสุทธิ์ของทริปซิน (Fig. 1b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลการอภิปรายและ
3.1 การทำให้บริสุทธิ์ของซี ophiocephalus trypsin
Trypsin จากอวัยวะภายในของซี ophiocephalus ถูกสกัดและทำให้บริสุทธิ์โดยขั้นตอนที่สองขั้นตอนที่อธิบายไว้ในมาตรา 2 ในขั้นตอนแรกสารสกัดเอนไซม์ถูก fractionated กับแอมโมเนียมซัลเฟต ตะกอนที่เกิดขึ้นที่ 20-60% (w / v) แสดงให้เห็นถึงความอิ่มตัวของกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงสูงกว่า (0.07 U / มิลลิกรัมโปรตีน) กว่าตกตะกอนเกิดขึ้นที่ 0-20% (0.007 U / mg protein) และ 60-80% (0.017 U / mg โปรตีน) ไม่มีกิจกรรมใดถูกตรวจพบในสารละลายสุดท้าย ส่วน 20-60% โดยมีกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงยิ่งใหญ่ที่สุดสำหรับ trypsin ถูกยัดเยียดแล้ว Sephadex G-100 กรองเจล ขั้นตอนนี้จะให้ผลสามยอดของกิจกรรมโปรติเอสโดยใช้เคซีนเป็นสารตั้งต้นและจุดสูงสุดของกิจกรรมเดียว trypsin ใช้เป็นสารตั้งต้น BAPNA (ผลไม่แสดง) กิจกรรมที่ระบุในสารสกัดเอนไซม์เริ่มต้น 0.05 U / มก. โปรตีน หลังจากขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สุดท้าย trypsin บริสุทธิ์ 16 เท่าที่มีการกู้คืน 20% และกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ 0.8 U / มก. โปรตีนโดยใช้เป็นสารตั้งต้น BAPNA (ตารางที่ 1) trypsin บริสุทธิ์จากปลาบู่อพยพเป็นวงเดียวใน SDS-PAGE (รูป. 1a) และหน้าพื้นเมือง (รูป. 1 ข) แสดงให้เห็นความเป็นเนื้อเดียวกันของเอนไซม์และยืนยันว่า trypsin บริสุทธิ์มีเพียงหนึ่งไอโซฟอร์ม น้ำหนักโมเลกุลของ trypsin ก็จะประมาณ 23.2 กิโลดาลตันขึ้นอยู่กับระบบ SDS-PAGE (รูป. 1a) สอดคล้องกับที่กำหนดโดยการกรองเจล ส่วนใหญ่ trypsins ปลาได้รับรายงานว่าจะมีน้ำหนักโมเลกุลในช่วง 23-28 กิโลดาลตัน [21] น้ำหนักโมเลกุลของซี ophiocephalus trypsin ก็คล้ายคลึงกับผู้ที่มาจากปลาชนิดอื่น ๆ เช่นตาล Pollock (Theragra chalcogramma) [22], ปลาซาร์ดีนที่แท้จริง (Sardinops melanostictus) และอาหรับ greenling (Pleuroprammus azonus) [23], ปลาคู้ดำปลาอเมซอน ( ซี macropomum) [11], สีเทากวาง (บี capriscus) [10] และปลาหมึก (เอส officinalis) [7] และต่ำกว่า trypsins จากม้าลายตีน (เอส basilisca) [13], และสีเงิน กระโดง (d rhombeus) [12].
การย้อมสีเคซีน-zymogram, วิธีการทดสอบที่มีความสำคัญมากและอย่างรวดเร็วที่ตรวจพบนาโนกรัมของโปรตีนเปิดเผยโซนที่ชัดเจนที่ไม่ซ้ำกันของกิจกรรมโปรตีนกับพื้นหลังสีฟ้าของเจลแสดงให้เห็นความบริสุทธิ์ของ trypsin (รูป. 1b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลและการอภิปราย
3.1 . การ ophiocephalus ซินซิน Z .
จากอวัยวะภายในของ Z ophiocephalus สกัดบริสุทธิ์โดยสองขั้นตอนขั้นตอนที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 2 ในขั้นตอนแรกของเอนไซม์สกัดเป็นลำดับด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต ที่ก่อตั้งขึ้นที่ 20 – 60 % ( w / v ) ความเข้มสูงกว่ากิจกรรมจำเพาะ ( 0