2.7. Cellular caspase activities (C

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

2.7 กิจกรรม caspase โทรศัพท์มือถือ (Caspase-3/7, -8 และ-9)เซลล์เอชที-29 (25000 เซลล์/ดี), ใน RPMI 1640 และ 10% FBS ถูกseeded ในจานดี 96 ขาว (SPL เกาหลี) และ incubated ค้างคืนที่ 37 _C กับ 5% CO2 และ 37 _C สื่อได้แล้วแทนที่ ด้วยสื่อสดและเซลล์รับ IC50ความเข้มข้นของ WTE สำหรับรอบระยะเวลาต่าง ๆ เช่น 2, 8, 16, 24และ 48 h. เซลล์โดยไม่ต้องรักษาและเพียงอย่างเดียวโดยไม่มีสื่อใด ๆเซลล์ใน triplicate สำหรับช่วงเวลาต่าง ๆ ที่ incubated ใช้เป็นควบคุมและว่างเปล่า Caspases-3/7, -8 และ-9 ได้ดำเนินการออกโดยชุดพาณิชย์ซื้อจาก บริษัท Promega(สหรัฐอเมริกา) ตามโพรโทคอลของบริษัทผู้ผลิต สังเขปหลังจากรักษา reagents ของ™ Caspase Glo-3/7, -8และ-9 reagents ได้เตรียมเพิ่มโดยตรงกับเซลล์ในดี 96 แผ่น และ incubated สำหรับ 30 นาทีก่อนบันทึก luminescenceการลดกิจกรรมพื้นหลังเจาะจงในเซลล์โดยใช้assays, MG 132 เพิ่มสารยับยั้งการ Caspase-Glo_-8 และ-9รีเอเจนต์ แผ่นไม่อ่าน luminometer (GloMax microplateluminescence อ่าน บริษัท Promega สหรัฐอเมริกา) ข้อมูลดิบรวบรวมจาก luminometer และค่าเฉลี่ยที่คำนวณได้จากสามารถจำลอง อ่านเบื้องหลังถูกกำหนดจากบ่อประกอบด้วยสื่อวัฒนธรรม โดยเซลล์ '' ไม่เซลล์สื่อ '' ค่าควบคุมเปล่าถูกหักออกจากค่าแต่ละค่า2.8. fluorescence ตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ทำการตรวจลักษณะเฉพาะของของเซลล์เอชที-29โดยไอโอไดด์ propidium (PI) และส้ม acridine (อ่าว)คู่ย้อมสีตามวิธีที่อธิบายโดย Ng et al(2013) และสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ fluorescence สั้น ๆเซลล์เอชที-29 ถูกชุบที่ความหนาแน่นของ 1 _ 106 เซลล์/มล.ในการ25 ml วัฒนธรรมหนาว และรักษา ด้วย IC50 ความเข้มข้นของWTE กำหนดจาก MTT วิเคราะห์ ณจุดเวลาต่าง ๆ ของคณะทันตแพทยศาสตร์เซลล์ถูก incubated ในบรรยากาศ 5% CO2 ที่ 37 _C8, 12 และ 24 h เซลล์ถูกเก็บเกี่ยว แล้วล้างสองครั้งใช้ PBS หลัง centrifuging ที่ 1800 รอบต่อนาที 5 นาทีสำหรับการเอาออกสื่อที่เหลือ มีปริมาตรเท่าประกอบด้วยสีเรืองแสง (อ่าว/PI)อ่าว (10 lg/ml) และพาย (10 lg/มล) ถูกเพิ่มเข้าไปมือถือเม็ดและสดทิ้งคราบเซลล์ที่สังเกตภายใต้การ UVfluorescenceกล้องจุลทรรศน์ภายใน 30 นาทีก่อนการ fluorescenceสีเริ่มจาง2.9 การวิเคราะห์ความเสียหายของดีเอ็นเอวิเคราะห์ความเสียหายของดีเอ็นเอถูกดำเนินการโดยดาวหางassay ในบรรทัด fibroblast murine ตัวอ่อน 3T3-L1 (ATCC)เซลล์ 3T3 L1 มีอ่างในเยื่อดี 12 แผ่น(เซลล์ 1 _ 105 ดี) ใน 24 ชมที่ 37 _C ในบรรยากาศ humidifiedประกอบด้วย 5% CO2 แล้ว เซลล์ถูกบำบัดก่อนใน 24 ชมด้วยWTE ที่ความเข้มข้นของแอล จี/ml 5-25 หลังจาก 24 ชมของคณะทันตแพทยศาสตร์เซลล์ได้รับการรักษา 100 lM ของ H2O2 ใน 60 นาทีในน้ำแข็งอ่างอาบน้ำเพื่อป้องกันการดำเนินการของกลไกการซ่อมแซมดีเอ็นเอ (มิลเลอร์Thomas, & Buschbom, 1995), และจากนั้น เก็บเกี่ยวใช้ทริปซิน –EDTA, centrifuged ใน 5 นาทีที่ 1500 รอบต่อนาที และ resuspended ในml 1 ของ PBS ปริมาตร 25 จะระงับเซลล์ถูกผสมกับ75 ของ 0.6% agarose ละลายต่ำสุดจะ กระจายไปในการระงับภาพนิ่งกล้องจุลทรรศน์ฝ้าก่อนเคลือบ ด้วย 250 จะปกติ 0.8%ละลาย agarose ปกคลุม ด้วยใบปก และได้รับอนุญาตให้แข็งในน้ำแข็ง 10 นาที แล้วออกใบครอบคลุม และภาพนิ่งที่ถูกแช่อยู่ในโซลูชัน lysis เย็นประกอบด้วย 1%โซเดียม dodecyl ซัลเฟต 2.5 M NaCl, Na2EDTA, 100 มม. 1% ไตรตั้นX 100 และ 10% DMSO ด้วย DMSO สำหรับ h 1 ที่ _C 4 ในมืดภาพนิ่งถูกจัดถัง electrophoresis เต็มไปด้วยเย็นก่อนด้วยบัฟเฟอร์ (Na2EDTA 1 มม.และ 300 มม.NaOH) และ incubated สำหรับ 20 นาที วิธี Electrophoresisที่ 25 V (300 mA) สำหรับ 20 นาทีใช้เพาเวอร์ซัพพลาย ภาพนิ่งได้ล้าง ด้วย 0.4 M ตรี – HCl (pH 7.5) และสีกับ lg 20 mlโบรไมด์ ethidium มี Olympus BX50 fluorescence กล้องจุลทรรศน์ใช้สำหรับดูภาพนิ่ง จำนวนเซลล์ 50 ใน triplicateสำหรับแต่ละกลุ่มใช้ในการคำนวณความเสียหายของดีเอ็นเอเกิดจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ความยาวหางของดาวหางถูกวัดโดยใช้การไมโครมิเตอร์แนวและความเสียหายของดีเอ็นเอถูกคำนวณโดยการสูตรต่อไปนี้:เส้นผ่าศูนย์กลางหัวดาวหางหางยาวความยาวทั้งหมดสูงสุด_2.10. สถิติวิเคราะห์ผลการทดลองจะแสดงเป็น} SD และวัดทั้งหมดและวิเคราะห์ได้ดำเนินการใน triplicate Excel 2007และซอฟต์แวร์ทางสถิติโปรแกรม V.18.0 ใช้สำหรับสถิติที่และประเมินกราฟิกในการศึกษานี้ วิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการ โดยต่างของการวิเคราะห์แบบทางเดียว (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) กับของ Tukeyเปรียบเทียบหลายและ t-ทดสอบของนักเรียน ค่า p ทั้งหมด < 0.05ได้พิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1 การรวมเนื้อหาของฟีนอและ flavonoidรวมเนื้อหาฟีนอ (สิ่งทอ) ถูก quantified เป็นกรด gallicเทียบเท่า (GAE) ชาขาวเข็มสิ่งทอเงินถูก863 } 5.6 mg GAE/g น้ำหนักของตัวอย่างในการสูบน้ำร้อนแห้ง(Fig. 1) พบในการศึกษาของเรา ชาขาวสกัด ด้วยน้ำร้อนจำนวนเงินที่สูงของ phenols รวมภายในเวลา 5 นาทีแยกสิ่งทอของสารสกัดน้ำร้อนได้สูงกว่าของ flavonoid บริสุทธิ์rutin ตามระดับของการ (Venditti et al., 2010),โพลีฟีนได้สูงในชาเขียว และสีขาวภายใต้สองแตกต่างกันวิธีสกัด 7 นาทีน้ำร้อนและน้ำเย็นสำหรับ 2 hอย่างไรก็ตาม เราตัดสินใจที่จะ steep ชาสำหรับเพียง 5 นาทีเท่านี้จะแสดงเวลาที่ใช้โดยทั่วไปใน steeping ชาจริงเนื้อหาของ phenols รวมและ flavonoids ในชาขาวสารสกัดนำเสนอใน Fig. 1 เนื้อหา flavonoid ที่รวม (TFC)ของเข็มเงิน เป็นชาขาวที่ลงตัวในน้ำร้อน 5 นาที530 } มิลลิกรัม 10.6 quercetin/g แห้งน้ำหนักของตัวอย่าง TFC ของควบคุม สารสกัดจาก และ rutin ถูก 999.2 } 9.9 และ569.7 } 12.026 มิลลิกรัม quercetin/g แห้งน้ำหนัก ตามลำดับ เหล่านี้ผลลัพธ์บ่งชี้ว่า เข็มเงินขาวชา สกัดสำหรับเท่านั้น5 นาที เป็นแหล่งอุดมของ flavonoids เมื่อแยกในเครื่องทำน้ำอุ่นตั้งแต่ TFC จะเทียบได้กับที่ rutin อย่างไรก็ตาม การศึกษาโดยRusak รายงานว่า TFC ของชาเขียว และขาวขึ้นด้วยเวลาแยก (Rusak โกเมศ Likic, Horzic และ Kovac, 2008)3.2. เฟอร์ลดอนุมูลอิสระ (FRAP)ในการทดสอบนี้ อ่านตัวอย่างมีอ้างอิงมาตรฐานเส้นโค้งของเหล็กซัลเฟต FeSO4_H2O ค่า FRAPแสดงเป็น mmol Fe2 + /mts อย่าง g ตารางที่ 1 แสดงที่กล้าหาญความสามารถของ WTE ค่า FRAP ของตัวอย่างในน้ำร้อนสกัดได้ 1.6 } 0.044 mmol Fe2 + /mts g และ FRAP ค่าสำหรับควบคุม สารสกัดจาก quercetin และ rutin ได้ 6.5 } 0.0047.5 } 0.035 และ 3.03 } 0.028 mmol Fe2 + /mts g ตามลำดับ เนื่องจากการตัวบวก สารสกัดจาก quercetin และ rutin ใช้ได้บริสุทธิ์สาร คาดว่า จะมีค่า FRAP สูงวิเคราะห์ความสัมพันธ์เพียร์สันได้ดำเนินการเพื่อประเมินความสัมพันธ์ระหว่างฟีนอเฟอร์ และเนื้อหาของการดึงข้อมูลลดกิจกรรม มีความสัมพันธ์ในเชิงบวกแรงระหว่างค่า FRAP และสิ่งทอ WTE (r = 0.902)3.3 การวิเคราะห์กิจกรรม scavenging รุนแรง DPPHการลดที่สมบูรณ์ของอนุมูล DPPH จะเกี่ยวข้องกับการสูง scavenging กิจกรรมแสดงตัวอย่างเฉพาะ ระดับสูงสารต้านอนุมูลอิสระในสารสกัดจะระบุมากกว่า รัศมีscavenging กิจกรรมสารสกัดจากชาการศึกษาอื่น ๆ พบว่าระดับของสารสกัดจากส่งผลกระทบต่อกำลังการผลิตสารต้านอนุมูลอิสระ ชาเขียว และสีดำได้อย่างมีประสิทธิภาพในการลด DPPH เนื่องจากระดับความสูงสารสกัดจาก (Katalinic, MilosKulisic, & Jukic, 2006) ผลการศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่าสีขาวชาลดอนุมูลอนุมูลอิสระฟรี DPPH ได้อย่างมีประสิทธิภาพ นี้อาจเนื่องจากระดับสูงของ EGCG (epigallocatechingallate), polyphenol ชาในชาขาว (Almajano et al., 2008)สารสกัดน้ำร้อนชาพบค่า IC50 ของ 99.9 } lg 4.9 ml(ตาราง 1) สารสกัดจากชาขาวได้ลดรัศมีมั่นคงDPPH จะ diphenylpicrylhydrazine สีเหลือง ที่scavenging ผลกระทบเพิ่มขึ้นพร้อมเพิ่มความเข้มข้นของการแยก ผลพบว่ากิจกรรม scavenging ของสารสกัดจากต้านอนุมูลอิสระชื่อดัง ได้สูงกว่าสารสกัดของ C. sinensisค่า IC50 ของสารสกัดจาก quercetin และ rutin 39.3 } 4.635.5 } 3.6 และ 44.4 } lg 5.8/ml ตามลำดับ การศึกษาอื่น ๆ แสดงให้เห็นว่าความสัมพันธ์ระหว่างชาสิ่งทอของอนุมูล DPPH scavengingเพิ่มในสิ่งทอทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นของ DPPH ที่รุนแรงscavenging กิจกรรม (Horzˇic´ et al., 2009) ในการศึกษาปัจจุบัน การชากับสิ่งทอสูงจัดแสดงสูงเป็น DPPH รุนแรง scavengingกิจกรรมการ3.4 การวิเคราะห์ของอนุมูลอิสระไฮดรอกซิล scavenging กิจกรรมในความเครียด oxidative โมเลกุลปฏิกิริยาออกซิเจน (ROS)ไฮดรอกซิลและ peroxyl อนุมูลสร้างขึ้นเช่นซูเปอร์ออกไซด์จำนวนของการศึกษาได้แสดงว่า ROS มีบทบาทสำคัญในพยาธิกำเนิดของโรคโรคต่าง ๆ เช่น neurodegenerativeโรค มะเร็ง โรคหัวใจ หลอด เลือดต้อกระจก และการอักเสบ (Aruoma, 1998) ดังแสดงในตารางที่ 1 ตัวอย่างทดสอบแสดงค่า IC50 ของไอออนไฮดรอกซิลscavenging กิจกรรมของ 353.4 } 31.9 lg/ml น้ำร้อนแยกผลลัพธ์ที่ระบุกำลังการผลิตน้ำร้อน scavengingสารสกัดจากชาขาวที่ใช้กับอนุมูลไฮดรอกซิล3.5 การวิเคราะห์ของไนตริกออกไซด์ scavenging กิจกรรมไนตริกออกไซด์เป็นชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาเกี่ยวข้องกับการอักเสบมะเร็งและเงื่อนไขอื่น ๆ ทางพยาธิวิทยา (Moncada พาล์มเมอร์ &Higgs, 1991) หนึ่งในสาเหตุสำคัญของโรคมะเร็งเกิดจากนิโคตินmetastasis และดีเอ็นเอเสียหายก่อไนตริกออกไซด์ ชาเตรียมใช้น้ำอุ่น 5 นาทีพบว่ามีผลป้องกันกับ nitricออกไซด์อนุมูล โดย scavenging อนุมูลไนตริกออกไซด์ (ตาราง 1) มันมีการตั้งสมมติฐานว่าว่า scavenging ของไนตริกออกไซด์เป็นหนึ่งกลไกหลักการทางชีวภาพของ flavonoids3.6 การวิเคราะห์กิจกรรม scavenging รุนแรงซูเปอร์ออกไซด์ซูเปอร์ออกไซด์รุนแรงเป็นที่รู้จักกันจะเป็นอันตรายมากกับมือถือส่วนประกอบที่เป็นสารตั้งต้นชนิดออกซิเจนปฏิกิริยามากขึ้น(Halliwell & Gutteridge, 1985) ตารางที่ 1 แสดงการซูเปอร์ออกไซด์รัศมี (O2sc _)

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

2.7. Cellular caspase activities (Caspase-3/7, -8 and -9)
HT-29 cells (25,000 cells/well), in RPMI-1640 and 10% FBS, were
seeded in the white 96-well plate (SPL, Korea) and incubated overnight
at 37 _C with 5% CO2 and 37 _C. The medium was then
replaced with fresh medium and the cells treated with the IC50
concentration of WTE for different time periods, i.e., 2, 8, 16, 24
and 48 h. Cells without any treatment and media alone without
cells in triplicate for the different times incubated were used as
the control and blank. Caspases-3/7, -8 and -9 activities were carried
out by using commercial kits purchased from Promega Company
(USA) according to the manufacturer’s protocol. In brief,
after the treatment time, the reagents of Caspase-Glo™ -3/7, -8
and -9 reagents were prepared and added directly to the cells in
96-well plates and incubated for 30 min before recording luminescence.
To reduce nonspecific background activity in cell-based
assays, MG-132 inhibitor was added to Caspase-Glo_ -8 and -9
reagent. The plates were read in a luminometer (GloMax microplate
luminescence reader, Promega Company, USA). The raw data
were collected from the luminometer and the average calculated
from the replicates. Background readings were determined from
wells containing culture medium without cells. The ‘‘no cell
media’’ blank control value was subtracted from each value.
2.8. Fluorescence microscopic examination
The morphological characterisation of HT-29 cells was performed
by using propidium iodide (PI) and acridine orange (AO)
double staining according to the method described by Ng et al.
(2013) and observed under a fluorescence microscope. Briefly,
HT-29 cells were plated at a density of 1 _ 106 cells/ml in a
25 ml culture flask and treated with the IC50 concentration of
WTE determined from MTT assay at varying time points of incubation.
The cells were incubated in an atmosphere of 5% CO2 at 37 _C
for 8, 12 and 24 h. Then the cells were harvested and washed twice
using PBS after centrifuging at 1800 rpm for 5 min to remove the
remaining media. An equal volume of fluorescent dye (AO/PI) containing
AO (10 lg/ml) and PI (10 lg/ml) were added to the cellular
pellet and freshly stained cells were observed under a UVfluorescence
microscope within 30 min before the fluorescence
colour started to fade.
2.9. Analysis of DNA damage
Analysis of DNA damage was carried out by using the comet
assay in the murine embryonic fibroblast line, 3T3-L1 (ATCC).
The 3T3-L1 cells were cultured in 12-well tissue culture plates
(1 _ 105 cells/well) for 24 h at 37 _C, in a humidified atmosphere
containing 5% CO2. Then the cells were pre-treated for 24 h with
WTE at concentrations of 5–25 lg/ml. After 24 h of incubation,
the cells were treated with 100 lM of H2O2 for 60 min in an ice
bath to prevent the action of DNA repair mechanisms (Miller,
Thomas, & Buschbom, 1995), and then harvested using trypsin–
EDTA, centrifuged for 5 min at 1500 rpm and resuspended in
1 ml of PBS. A volume of 25 ll of cell suspension was mixed with
75 ll of 0.6% low melting agarose. The suspension was spread on
a frosted microscopic slide pre-coated with 250 ll of 0.8% normal
melting agarose, covered with a cover slip, and then allowed to
solidify on ice for 10 min. The cover slips were then removed and
the slides were immersed in cold lysis solution containing 1%
sodium dodecyl sulphate, 2.5 M NaCl, 100 mM Na2EDTA, 1% Triton
X-100, and 10% DMSO, with the DMSO for 1 h at 4 _C in the dark.
The slides were arranged in an electrophoresis tank filled with
pre-chilled electrophoretic buffer (1 mM Na2EDTA and 300 mM
NaOH) and incubated for 20 min. Electrophoresis was conducted
at 25 V (300 mA) for 20 min using a power supply. The slides were
washed with 0.4 M Tris–HCl (pH 7.5) and stained with 20 lg/ml
ethidium bromide. An Olympus BX50 fluorescence microscope
was used for viewing the slides. A total of 50 cells in triplicate
per group were used to calculate the DNA damage induced by
hydrogen peroxide. The comet tail length was measured using an
ocular micrometer and the DNA damage was calculated by the
following formula:
Comet tail length maximum total length _ head diameter
2.10. Statistical analysis
Experimental results are presented as means } SD, and all measurements
and analyses were carried out in triplicate. Excel 2007
and SPSS V.18.0 statistical software were used for the statistical
and graphical evaluations in this study. Statistical analysis was
performed by one-way analysis of variance (ANOVA) with Tukey’s
multiple comparisons and the Student’s t-test. All p-values <0.05
were considered significant.
3. Results and discussion
3.1. Total phenolic and flavonoid content
The total phenolic content (TPC) was quantified as gallic acid
equivalents (GAE). The TPC of Silver needle white tea was
863 } 5.6 mg GAE/g dried weight of sample in hot water extraction
(Fig. 1). In our study, white tea extracted with hot water showed
high amounts of total phenols within the extraction time of 5 min.
The TPC of the hot water extract was higher than that of the pure flavonoid,
rutin. According to (Venditti et al., 2010), the levels of total
polyphenols were high in green and white teas under two different
extraction methods, hot water for 7 min and cold water for 2 h.
However, we decided to steep the tea for only 5 min as this would
reflect the actual time commonly used in steeping tea.
The content of total phenols and flavonoids in white tea
extract are presented in Fig. 1. The total flavonoid content (TFC)
of Silver needle white tea infused in hot water for 5 min was
530 } 10.6 mg quercetin/g dried weight of sample. The TFC of the
controls, catechin and rutin, were 999.2 } 9.9 and
569.7 } 12.026 mg quercetin/g dried weight, respectively. These
results indicate that Silver needle white tea, extracted for only
5 min, is a rich source of flavonoids, when extracted in hot water,
since the TFC is comparable to that of rutin. However, a study by
Rusak reported that the TFC of green and white tea increased with
extraction time (Rusak, Komes, Likic, Horzic, & Kovac, 2008).
3.2. Ferric reducing antioxidant power (FRAP)
In this assay sample readings were referenced to the standard
curve of ferrous sulphate, FeSO4_H2O. The FRAP value was
expressed as mmol Fe2+/g sample. Table 1 shows the reductive
capability of WTE. The FRAP value of the sample in hot water
extractions was 1.6 } 0.044 mmol Fe2+/g and the FRAP values for
the controls, catechin, quercetin and rutin, were 6.5 } 0.004,
7.5 } 0.035 and 3.03 } 0.028 mmol Fe2+/g, respectively. Since the
positive controls, catechin, quercetin and rutin, used were pure
compounds, it is expected that they would have higher FRAP values.
Pearson correlation analysis was performed to assess the relationship
between the phenolic content of the extract and ferric
reducing activity. There was a strong positive correlation between
the TPC of WTE and FRAP value (r = 0.902).
3.3. Assay of DPPH radical scavenging activity
The complete reduction of the DPPH radical is related to the
high scavenging activity shown by a particular sample. A high level
of antioxidants in the extract would indicate greater radical
scavenging activity.
Other studies on tea extracts showed that the levels of catechin
affect the antioxidant capacity. Green and black teas were efficient
in reducing DPPH due to their high catechin levels (Katalinic, Milos,
Kulisic, & Jukic, 2006). The results of our study showed that white
tea effectively reduces the oxidant free radical, DPPH. This could be
due to the presence of high levels of EGCG (epigallocatechin
gallate), a tea polyphenol in white tea (Almajano et al., 2008).
Hot water extract of tea showed IC50 values of 99.9 } 4.9 lg/ml
(Table 1). White tea extract was able to reduce the stable radical
DPPH to the yellow coloured diphenylpicrylhydrazine. The
scavenging effect increased with increasing concentrations of the
extract. The results showed that the scavenging activity of catechin,
a known antioxidant, was higher than extracts of C. sinensis.
The IC50 value of catechin, quercetin and rutin was 39.3 } 4.6,
35.5 } 3.6 and 44.4 } 5.8 lg/ml, respectively. Other studies showed
the relationship between tea TPC and scavenging of DPPH radical.
An increase in TPC resulted in an increase of DPPH radical
scavenging activity (Horzˇic´ et al., 2009). In the present study, the
tea with high TPC exhibited high potential DPPH radical scavenging
activity.
3.4. Assay of hydroxyl free radical scavenging activity
In a state of oxidative stress, reactive oxygen molecules (ROS)
such as superoxide, hydroxyl and peroxyl radicals are generated.
A number of studies have shown that ROS play an important role
in the pathogenesis of various chronic diseases, such as, neurodegenerative
disorders, cancer, cardiovascular diseases, atherosclerosis,
cataracts, and inflammation (Aruoma, 1998). As shown in
Table 1, the samples tested showed IC50 values of hydroxyl ion
scavenging activity of 353.4 } 31.9 lg/ml, in hot water extract.
The results indicated the scavenging capacity of the hot water
extract of white tea used against hydroxyl radicals.
3.5. Assay of nitric oxide scavenging activity
Nitric oxide is a reactive oxygen species involved in inflammation,
cancer and other pathological conditions (Moncada, Palmer, &
Higgs, 1991). One of the major causes of nicotine-induced cancer
metastasis and DNA damage is nitric oxide formation. Tea prepared
using hot water for 5 min showed a protective effect against nitric
oxide radicals by scavenging the nitric oxide radicals (Table 1). It
has been hypothesized that scavenging of nitric oxide is one of
the main mechanisms for the bioactivity of flavonoids.
3.6. Assay of superoxide radical scavenging activity
The superoxide radical is known to be very harmful to cellular
components as a precursor of more reactive oxygen species
(Halliwell & Gutteridge, 1985). Table 1 shows the superoxide
radical (O2
_) sc

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

2.7 . กิจกรรมเซลลูลาร์แคสเปส ( การศึกษาลักษณะ / 7 - 8 - 9 )
ht-29 เซลล์ ( 25 , 000 เซลล์ / ดี ) ใน rpmi-1640 และ 10% FBS ,
เมล็ดในจานสีขาว 96 ( SPL , เกาหลี ) และบ่มค้างคืน
37 _c กับคาร์บอนไดออกไซด์ 5% และ 37 _c กลางแล้ว
แทนที่ด้วยสื่อสดและเซลล์รักษากับ ic50
ความเข้มข้นของ wte คนละช่วงเวลาคือ 2 , 8 , 16 , 24 และ 48 ชั่วโมง
เซลล์ไม่มีการรักษาใด ๆและสื่อคนเดียว
เซลล์ทั้งสามใบสำหรับเวลาที่ต่างกันโดยถูกใช้เป็น
การควบคุมและว่างเปล่า caspases-3 / 7 - 8 - 9 กิจกรรมครั้งนี้
โดยใช้ชุด ซื้อจาก บริษัท การค้า promega
( USA ) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต ในช่วงสั้น ๆ ,
หลังจากเวลารักษา สารเคมีของตนเอง ™แคสเปส - 3 / 7 - 8
และ - 9 เพื่อเตรียมและเพิ่มไปยังเซลล์ใน
96 ดีแผ่นและบ่ม 30 นาที ก่อนการบันทึกเทป เพื่อลดการติดเชื้อในกิจกรรมพื้น

) mg-132 ปัจจุบัน , ซึ่งถูกเพิ่ม caspase-glo_ - 8 - 9
3 . จานถูกอ่านในลูมิโนมิเตอร์ ( glomax พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
เรืองแสงอ่าน , บริษัท , promega USA )
ข้อมูลดิบเก็บมาจากลูมิโนมิเตอร์และเฉลี่ยคำนวณ
จากได้แก่ การอ่านพื้นหลังเป็นบ่อที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อจาก
โดยไม่ต้องเซลล์ ' ' สื่อ ' ' เปล่าควบคุมเซลล์
ถูกหักออกจากค่าแต่ละค่า
2.8 . โดยศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของกล้องจุลทรรศน์

ht-29 เซลล์แสดงโดยใช้ propidium ไอโอไดด์ ( PI ) และเรือโว้ย ( อ่าว )
4 คู่ตามวิธีการที่อธิบายโดย NG et al .
( 2013 ) และสังเกตการภายใต้กล้องจุลทรรศน์ สั้น ๆ ,
ht-29 เซลล์มีการชุบที่ความหนาแน่น 1 _ 106 เซลล์ / มล. ในขวด 25 ml
วัฒนธรรมและปฏิบัติกับ ic50 ความเข้มข้นของ MTT assay
wte กำหนดจากจุดของเวลาที่แตกต่างกัน 4 .
เซลล์ที่ถูกบ่มในบรรยากาศของ CO2 ร้อยละ 5 ที่ 37 _c
8 , 12 และ 24 ชั่วโมง จากนั้นเซลล์เก็บล้างสองครั้ง
ใช้ PBS หลังจากวรรณนาที่ 1800 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีลบ
เหลือสื่อ ปริมาณเท่ากับสีเรืองแสง ( อ่าว / PI ) ประกอบด้วย
อ่าว ( 10 LG / มิลลิลิตร ) และพี ( 10 ) ต่อมิลลิลิตร ) มีการเพิ่มของเซลล์เม็ดสีและเซลล์ใหม่

uvfluorescence พบว่าภายใต้กล้องจุลทรรศน์ภายใน 30 นาทีก่อนที่จะเรืองแสงสีเริ่มจาง
.
2.9 . การวิเคราะห์การวิเคราะห์ความเสียหาย
ดีเอ็นเอของความเสียหายของดีเอ็นเอโดยใช้ดาวหาง
~ ( ในส่วนของบรรทัด 3t3-l1 ( ATCC )
3t3-l1 เพาะเลี้ยงในเซลล์เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อดีแผ่น
( 1 _ 105 เซลล์ / ดี ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 _c ใน humidified บรรยากาศ
ที่มี คาร์บอนไดออกไซด์ 5%แล้วเซลล์ก็ก่อนการรักษา 24 ชั่วโมงด้วย
wte ที่ความเข้มข้น 5 – 25 LG / มิลลิลิตร หลังจาก 24 ชั่วโมงของระยะเวลา
เซลล์รักษาด้วย 100 LM ของ H2O2 60 นาทีในน้ำแข็ง
อาบน้ำเพื่อป้องกันการกระทำของกลไกการซ่อมแซมดีเอ็นเอ ( Miller
โทมัส & buschbom , 1995 ) แล้วเก็บเกี่ยวโดยใช้เอนไซม์–
EDTA , ไฟฟ้าสำหรับ 5 นาทีที่ 1 , 500 รอบต่อนาที และ resuspended ใน
1 มิลลิลิตรของ PBSปริมาณ 25 จะของเซลล์แขวนลอยผสมกับ
75 จะ 0.6% ( จุดหลอมเหลวต่ำ ถูกระงับการแพร่กระจายบน
เป็นฝ้าก่อนเคลือบด้วยกล้องจุลทรรศน์ภาพนิ่งของ 0.8% ปกติ
ละลาย ( 250 จะปกคลุมด้วยฝาครอบใบ และได้รับอนุญาตแล้วให้
แข็งแข็งนาน 10 นาที แล้วเอาออก และฝาหลุด
สไลด์ถูกแช่ในสารละลายที่มีการสลายเย็น 1 %
โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต2.5 M NaCl na2edta 100 มม. , 1% Triton X-100 และ DMSO
, 10% มี DMSO เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน 4 _c ในความมืด
สไลด์ถูกจัดเรียงในวิธีถังที่เต็มไปด้วย
ก่อนแช่เย็น electrophoretic บัฟเฟอร์ ( na2edta 1 มม. และ 300 มม.
NaOH ) บ่มเป็นเวลา 20 นาทีและอิเลคโตรโฟเรซีส ดำเนินการ
ที่ 25 V ( MA 300 ) สำหรับ 20 นาทีที่ใช้แหล่งจ่ายไฟ ภาพนิ่งถูก
ล้างด้วย 0.4 M ทริส– HCl ( pH 75 ) และย้อมด้วย 20 LG / ml
ทิเดียมโบรไมด์ . มีการใช้กล้องจุลทรรศน์ Olympus bx50
ดูภาพนิ่ง ทั้งหมด 50 เซลล์ทั้งสามใบ
/ กลุ่มถูกใช้เพื่อคำนวณความเสียหายของดีเอ็นเอที่เกิดจาก
ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ดาวหางหางความยาวการวัด
ไมโครเมตรและจักษุความเสียหายของดีเอ็นเอถูกคำนวณด้วยสูตรต่อไปนี้ :

ดาวหางหางความยาวสูงสุดความยาวรวม _ หัวเส้นผ่าศูนย์กลาง
2.10 . การวิเคราะห์ผลการทดลองจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย
? } SD และการวัดทั้งหมด
การวิเคราะห์ ทดลองทั้งสามใบ Excel 2007
และ SPSS v.18.0 สถิติซอฟต์แวร์ที่ถูกใช้สำหรับสถิติ
และการประเมินผลแบบกราฟิกในการศึกษานี้ สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลคือ
โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ( ANOVA ) โดยทดสอบ
หลายเปรียบเทียบและแบบทดสอบของนักเรียน ทั้งหมด p-values < 0.05
ถือว่าสำคัญ .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . สารฟลาโวนอยด์และเนื้อหาทั้งหมด
เนื้อหาฟีนอลิกทั้งหมด ( TPC ) คือปริมาณที่เพิ่มขึ้น
เทียบเท่า ( เก ) ส่วน TPC ของใบชาขาวเข็มเงินคือ
863 ? } 56 มิลลิกรัม / กรัมน้ำหนักของตัวอย่างในเก
การสกัดร้อนแห้ง ( รูปที่ 1 ) ในการศึกษาของเรา ชาขาวสกัดด้วยน้ำร้อน พบ
ยอดสูงของฟีนอลทั้งหมดภายในเวลา 5 นาที สกัด
TPC สารสกัดน้ำร้อนสูงกว่าของฟลาโวนอยด์ , เพียว
รูติน ตาม ( เวนดิตตี้ et al . , 2010 ) , ระดับของโพลีฟีนทั้งหมด
สูงขาวเขียวชาภายใต้สองแตกต่างกัน
วิธีสกัดร้อน น้ำ 7 นาทีและน้ำเย็น 2 H .
แต่เราตัดสินใจที่จะชันชาเพียง 5 นาทีเช่นนี้จะ
ที่แท้จริงเวลาที่ใช้กันทั่วไปใน steeping ชา
เนื้อหาของฟีนอลทั้งหมด และฟลาโวนอยด์ใน
ชาขาวจะแสดงในรูปที่ 1 เนื้อหาทั้งหมดของฟลาโวนอยด์ ( TFC )
เข็มเงินชาขาวผสมในน้ำอุ่นประมาณ 5 นาที
530 ? } 106 มิลลิกรัม / กรัมน้ำหนักแห้ง เคอร์ซิทินในตัวอย่าง . ใน TFC ของ
การควบคุม , Catechin และรูติน เป็น 999.2 ? และ ? } } 1
569.7 เคอร์ 12.026 มิลลิกรัม / กรัม ตามลำดับ ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า ใบชาขาวเข็มเงิน

ได้เพียง 5 นาที เป็นแหล่งที่อุดมไปด้วย flavonoids , เมื่อใช้ในน้ำร้อน
ตั้งแต่ TFC ก็เปรียบได้กับว่ารูติน อย่างไรก็ตาม การศึกษาโดย
rusak รายงานว่า TFC สีเขียวและชาขาวเพิ่มขึ้น
เวลาการสกัด ( rusak โกเมศ likic horzic , , , , & โควัก , 2008 ) .
2 . สารต้านอนุมูลอิสระลดพลังงานเฟอริค ( VDO )
( อ่านในนี้ตัวอย่างมีการอ้างอิงไปยังเส้นโค้งมาตรฐาน
ของเฟอรัสซัลเฟต , feso4_h2o ค่า VDO คือ
แสดงเป็น fe2 mmol / g ตัวอย่าง ตารางที่ 1 แสดงความสามารถในการลดลงของ wte
.ค่า VDO ของตัวอย่างในการสกัดน้ำ
ร้อน 1.6 ? } 0.044 mmol / g และ fe2 Frap
ค่าสำหรับการควบคุม , Catechin quercetin และรูตินเป็น 6.5 ? } 0.004 ,
7.5 ? และ ? } } 0.035 3.03 fe2 0.028 mmol / g ตามลำดับ ตั้งแต่
บวกการควบคุม , Catechin quercetin และรูติน ใช้เป็นสารประกอบบริสุทธิ์
คาดว่าจะสูงกว่า Frap
ค่าการวิเคราะห์สหสัมพันธ์เพียร์สันได้ศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างปริมาณสาร
สกัดและลดกิจกรรมเฟอร์

มีความสัมพันธ์ทางบวกระหว่างแรง
wte และค่าเอฟทีของ VDO ( r = 0.90 )
3 . ใช้เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาของ dpph กิจกรรม
ลดสมบูรณ์ของ dpph รุนแรงที่เกี่ยวข้องกับ
สูงการกิจกรรมแสดงโดยตัวอย่างที่เฉพาะเจาะจงระดับของสารต้านอนุมูลอิสระในน้ำ

การรุนแรงมากขึ้นจะแสดงกิจกรรม
การศึกษาอื่น ๆพบว่า สารสกัดจากชาในระดับของ Catechin
มีผลต่อความจุของสารต้านอนุมูลอิสระ สีเขียวและสีดำชา มีประสิทธิภาพในการลด dpph
เนื่องจากระดับสูงของ catechin ( katalinic มิล
kulisic & , , , jukic , 2006 ) ผลการศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่า
สีขาวว่าชาได้อย่างมีประสิทธิภาพช่วยลดอนุมูลอิสระอนุมูลอิสระ dpph ฟรี . นี้อาจจะเป็น
เนื่องจากการแสดงตนของระดับสูงของ EGCG ( epigallocatechin
แกลเลต ) , โพลีชาชาสีขาว ( almajano et al . , 2008 ) .
สารสกัดน้ำร้อนให้คุณค่าของชา ic50 99.9 ? } 4.9 LG / ml
( ตารางที่ 1 ) สารสกัดชาขาวสามารถลด dpph หัวรุนแรง
มั่นคงกับ diphenylpicrylhydrazine สีเหลือง
การผลเพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นของ
สารสกัด ผลการศึกษา พบว่า การจัดกิจกรรมของ Catechin ,
รู้จักสารต้านอนุมูลอิสระสูงกว่าสารสกัดจากซี ไซแนนซิส ค่า
ic50 Catechin quercetin และรูตินเป็น 39.3 ? 4.6 ? } }
35.5 , 3.6 และ 44.4 ? } 5.8 LG / มิลลิลิตร ตามลำดับ การศึกษาอื่น ๆพบ
ความสัมพันธ์ระหว่างชาและการร่วมของ dpph
หัวรุนแรงเพิ่มขึ้น มีผลทำให้มีการเพิ่มของ TPC dpph หัวรุนแรง
การกิจกรรม ( horz ˇ IC ใหม่ et al . , 2009 ) ในการศึกษา
ชาสูง มีศักยภาพสูง dpph ร่วมกิจกรรมเป็นตัวเร่งปฏิกิริยา
.
3.4 . การทดสอบของไฮดรอกซิลกำจัดอนุมูลอิสระ
ในภาวะเครียดออกซิเดชันปฏิกิริยาโมเลกุลออกซิเจน ( ROS )
เช่นออกไซด์และ ( peroxyl , Radicals
สร้างจำนวนของการศึกษาได้แสดงให้เห็นว่ารอสเล่นบทบาทสำคัญในพยาธิกำเนิดของโรคเรื้อรังต่างๆ เช่น โรคมะเร็ง โรคหัวใจ โรค Neurodegenerative
, โรคหลอดเลือด ,
cataracts และการอักเสบ ( aruoma , 1998 ) ดังแสดงใน ตารางที่ 1
, ตัวอย่างการทดสอบพบว่าค่า ic50 ของไฮดรอกซิลไอออน
การกิจกรรมของ 353.4 ? } LG / 31.9 มิลลิลิตรสกัดน้ำร้อน
ผลการศึกษาแสดงให้เห็นว่าการความจุน้ำร้อนสารสกัดชาขาวใช้

( ต่อต้านอนุมูลอิสระ 3.5 . การทดสอบของไนตริกออกไซด์การกิจกรรม
ไนตริกออกไซด์เป็นชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบ
โรคมะเร็งและเงื่อนไขอื่น ๆทางพยาธิวิทยา ( มอนคาดา พาร์มเมอร์&
, ฮิกส์ , 1991 ) หนึ่งในสาเหตุหลักของการเกิดมะเร็ง
นิโคตินการแพร่กระจายและความเสียหายของดีเอ็นเอ คือ การเกิดออกไซด์ไนตริก ชาเตรียม
ใช้น้ำร้อนเป็นเวลา 5 นาที พบว่ามีผลป้องกันการเกิดออกไซด์ไนตริก
โดยอนุมูลไนตริกออกไซด์ ( ตารางที่ 1 ) มีการตั้งสมมติฐานว่ามัน

ของไนตริกออกไซด์เป็นหนึ่งในกลไกหลักสำหรับการ flavonoids .
3.6 การทดสอบของออกไซด์เป็นตัวเร่งปฏิกิริยากิจกรรม
ออกไซด์ Radical เป็นที่รู้จักกันจะเป็นอันตรายกับชิ้นส่วนโทรศัพท์มือถือ
เป็นสารตั้งต้นของชนิดออกซิเจนปฏิกิริยา
( ฮัลลิเวลล์& gutteridge , 1985 ) ตารางที่ 1 แสดงออกไซด์ Radical ( O2

_ ) ม

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.