The T111H CtrHb spectrum resulting

The T111H CtrHb spectrum resulting from the treatment (Fig. 3d)
contains a multitude of hyperfine shifted lines with intensities suggesting
a mixture of at least three species. The new predominant set of
resonances corresponds to a major product accounting for ~60% of the
sample. The inability for DT to reduce cyanomet T111H CtrHb completely
under these NMR conditions can be seen from Supporting
Information Fig. S15 and explains the second set of peaks, which
corresponds to the cyanomet major heme orientational isomer of the
starting material (~25%). Finally, a third set corresponds to a minor
product that may be due to a different modification of the heme or
DT-damaged protein. Notably, after treatment, peaks belonging to the
minor cyanomet isomer of the T111H starting material have vanished.
We therefore hypothesize that the primary product contains a covalent
linkage between H111 and the heme 4-substituent in an orientation
analogous to the minor isomer starting material. We refer to this product
as T111H CtrHb-A4 (Supporting Information Fig. S20A).
Signals corresponding to heme methyl groups of T111H CtrHb-A4
are assigned on the basis of their high intensity and characteristic
paramagnetic downfield 1H and upfield 13C shifts. DQF-COSY spectra
reveal one vinyl and both propionate spin systems. Intra-heme NOEs
between the 1-CH3 and 8-CH3, along with contacts between the heme
1- and 2-substituents indicate that the heme 2-vinyl group has
remained intact (Supporting Information Fig. S17). Cyanomet T111H
CtrHb 1H-15N lr-HMQC data collected before and after DT treatment
and compared with WT data indicate the presence of a peculiar
imidazole system [52] in the T111H CtrHb-A4 product, exhibiting two
downfield shifted 15N signals (at 250.6 and 220.7 ppm) J-coupled to a
proton at 8.36 ppm, itself J-connected via TOCSY to a proton at
6.48 ppm. These resonances are attributed to H111 (Table 2). Restraints
defining the position of the side chain include: H111 Hε1 toheme3-CH3
and F48 Hζ and Hε,ε', and H111 Hδ2 to the heme 3-CH3 and V115 side
chain methyls. Both H111 Hε1 and Hδ2 have shared NOEs (strong and
weak, respectively) to a methyl group at 3.39 ppm, which is assigned
to the modified heme 4-CβH3 group. Accordingly, a scalar connectivity
is observed between the 4-CβH3 and a single proton at 6.15 ppm
(Supporting Information Fig. S17) corresponding to the modified
heme 4-CαH. This proton, like the 4-CβH3, is in dipolar contact with
H111 Hε1. Although JHN-coupling between H111 15Nε2 and the newly
produced 4-CβH3 or 4-CαH was not detected in the long-range data,
the observed NOEs, heme methyl 1H chemical shift dispersion pattern
[53], propionate shifts, and unusual H111 15N shifts are all consistent
with modification occurring at H111 and the heme 4-substituent
(Supporting Information Fig. S20A).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สเปกตรัม T111H CtrHb ที่เกิดจากการรักษา (Fig. 3d)ประกอบด้วยหลากหลายรายการ hyperfine ที่เปลี่ยน มีการแนะนำการปลดปล่อยก๊าซผสมพันธุ์น้อย 3 ชุดของกันใหม่resonances ตรงกับบัญชีผลิตภัณฑ์หลัก ~ 60% ของการตัวอย่างการ ไม่สำหรับ DT ลด cyanomet T111H CtrHb สมบูรณ์ภายใต้ NMR นี้ เงื่อนไขสามารถดูได้จาก Supportingข้อมูลฟิก S15 และอธิบายชุดสองของยอดเขา ที่สอดคล้องกับหลัง orientational ของ heme หลัก cyanomet ของการเริ่มต้นวัสดุ (~ 25%) สุดท้าย ชุดที่สามตรงกับเด็กอมมือผลิตภัณฑ์ที่อาจเกิดจากการปรับเปลี่ยน heme แตกต่างกัน หรือโปรตีน DT เสียหาย ยวด หลังการรักษา ยอดเป็นของไอโซเมอร์ cyanomet รองวัสดุเริ่มต้น T111H มีศาสดาเราจึง hypothesize ว่า ผลิตภัณฑ์หลักประกอบด้วยแบบ covalentการเชื่อมโยงระหว่าง H111 และ 4-substituent heme ในการคล้ายคลึงกับหลังรองวัสดุเริ่มต้น เราหมายถึงผลิตภัณฑ์นี้เป็น T111H CtrHb-A4 (สนับสนุนข้อมูลฟิก S20A)สัญญาณที่สอดคล้องกับกลุ่ม methyl heme ของ T111H CtrHb A4กำหนดตามลักษณะและความสูงของพวกเขาparamagnetic downfield 1H และ upfield 13C กะ โคซี่ DQF แรมสเป็คตราเปิดเผยหนึ่งไวนิลและทั้งระบบหมุน propionate อินทรา heme NOEsระหว่าง 1-CH3 8-CH3 พร้อมกับติดต่อระหว่าง heme1 - และ 2-substituents ระบุว่า มีกลุ่ม 2-ไวนิล hemeยังคงเหมือนเดิม (สนับสนุนข้อมูลฟิก S17) Cyanomet T111HCtrHb 1H 15N lr HMQC การรวบรวมข้อมูลก่อน และ หลังการรักษา DTเปรียบเทียบกับ WT ข้อมูลบ่งชี้สถานะของความแปลกระบบอิมิดาโซล [52] ในผลิตภัณฑ์ T111H CtrHb A4 อย่างมีระดับ 2downfield เปลี่ยนสัญญาณ 15N (ที่ 250.6 และ 220.7 ppm) J-ควบคู่กับการโปรตอนที่ 8.36 ppm ตัว J-เชื่อมต่อผ่าน TOCSY กับโปรตอนที่6.48 ppm Resonances เหล่านี้มาจาก H111 (ตารางที่ 2) Restraintsการกำหนดตำแหน่งของโซ่ข้างรวม: H111 Hε1 toheme3-CH3และ F48 Hζ และ Hε ε', และ Hδ2 H111 heme 3-CH3 และด้าน V115โซ่ methyls H111 Hε1 และ Hδ2 ได้ร่วม NOEs (แข็งแรง และอ่อนแอ ตามลำดับ) กลุ่ม methyl ที่ 3.39 ppm ซึ่งถูกกำหนดกลุ่ม 4 CβH3 heme ที่ปรับเปลี่ยน เชื่อมต่อสเกลาตามสังเกตระหว่าง 4 CβH3 และโปรตอนเดียวที่ 6.15 ppm(สนับสนุนข้อมูลฟิก S17) ที่สอดคล้องกับการปรับเปลี่ยนheme 4-CαH โปรตอนนี้ เช่น 4-CβH3 เป็น dipolar ติดต่อกับH111 HΕ1 แม้ว่า JHN คลัประหว่าง H111 15Nε2 และใหม่ผลิต 4-CβH3 หรือ 4 CαH ไม่พบในข้อมูลพิสัยสังเกต NOEs, heme methyl 1H กะเคมีกระจายตัวในรูปแบบ[53], กะ propionate และ 15N กะ H111 ปกติจะสอดคล้องกันทั้งหมดมีการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นใน H111 และ heme 4-substituent(สนับสนุนข้อมูลฟิก S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สเปกตรัม T111H CtrHb ที่เกิดจากการรักษา (รูป. 3D)
มีความหลากหลายของ hyperfine ขยับเส้นที่มีความเข้มบอก
ส่วนผสมของอย่างน้อยสามชนิด ชุดเด่นใหม่ของ
Resonances สอดคล้องกับบัญชีสินค้าที่สำคัญสำหรับ ~ 60% ของ
กลุ่มตัวอย่าง การไร้ความสามารถในการที่จะลด DT cyanomet T111H CtrHb อย่างสมบูรณ์
ภายใต้เงื่อนไข NMR เหล่านี้สามารถเห็นได้จากการสนับสนุน
ข้อมูลรูป S15 และอธิบายถึงชุดที่สองของยอดเขาซึ่ง
สอดคล้องกับ cyanomet สำคัญ heme isomer orientational ของ
สารตั้งต้น (~ 25%) สุดท้ายชุดที่สามสอดคล้องกับผู้เยาว์
ผลิตภัณฑ์ที่อาจจะเกิดจากการเปลี่ยนแปลงที่แตกต่างกันของ heme หรือ
โปรตีน DT-เสียหาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งหลังการรักษายอดเขาที่อยู่ในประเภท
isomer cyanomet เล็กน้อย T111H เริ่มต้นวัสดุได้หายไป.
ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่าผลิตภัณฑ์หลักประกอบด้วยโควาเลน
เชื่อมโยงระหว่าง H111 และ heme 4 แทนในการวางแนวทาง
คล้ายกับสารตั้งต้น isomer เล็กน้อย เราหมายถึงผลิตภัณฑ์นี้
เป็น T111H CtrHb-A4 (สนับสนุนข้อมูลรูป. S20A).
สัญญาณที่สอดคล้องกับกลุ่มเมธิล heme ของ T111H CtrHb-A4
มีการกำหนดบนพื้นฐานของความเข้มสูงของพวกเขาและลักษณะ
paramagnetic ร่น 1H และ 13C upfield กะ สเปกตรัม DQF-COSY
เปิดเผยไวนิลหนึ่งและทั้งสองระบบหมุน propionate noes ภายใน heme
ระหว่าง 1 CH3 และ 8-CH3 พร้อมกับการติดต่อระหว่าง heme
1 และ 2 substituents ระบุว่ากลุ่ม heme 2 ไวนิลที่ได้
ยังคงสภาพสมบูรณ์ (สนับสนุนข้อมูลรูป. S17) Cyanomet T111H
CtrHb 1H-15N ข้อมูล LR-HMQC เก็บก่อนและหลังการรักษา DT
และเปรียบเทียบกับข้อมูล WT แสดงต่อหน้าเฉพาะ
ระบบ imidazole [52] ใน T111H สินค้า CtrHb-A4 การแสดงสอง
ขยับร่นสัญญาณ 15N (ที่ 250.6 และ 220.7 ppm) J-คู่กับ
โปรตอนที่ 8.36 ppm และตัว J-เชื่อมต่อผ่าน TOCSY เพื่อโปรตอนที่
6.48 ส่วนในล้านส่วน Resonances เหล่านี้จะมีการบันทึก H111 (ตารางที่ 2) พันธนาการ
การกำหนดตำแหน่งของห่วงโซ่ด้านข้างรวมถึง: H111 Hε1 toheme3-CH3
และ F48 HζและHε, ε 'และ H111 Hδ2เพื่อ heme 3 CH3 และด้านข้าง V115
โซ่ methyls ทั้งสอง H111 Hε1และHδ2ได้ใช้ร่วมกัน noes (ที่แข็งแกร่งและ
อ่อนแอตามลำดับ) ในกลุ่มเมธิลที่ 3.39 พีพีเอ็มซึ่งเป็นที่ได้รับมอบหมาย
ในการแก้ไข heme 4 CβH3กลุ่ม ดังนั้นการเชื่อมต่อสเกลาร์
เป็นที่สังเกตระหว่าง 4 CβH3และโปรตอนเดียวที่ 6.15 พีพีเอ็ม
(สนับสนุนข้อมูลรูป. S17) ที่สอดคล้องกับการปรับเปลี่ยน
heme 4 CαH โปรตอนนี้เช่น 4 CβH3อยู่ในการติดต่อกับ dipolar
H111 Hε1 แม้ว่า JHN-การมีเพศสัมพันธ์ระหว่าง H111 15Nε2และเพิ่ง
ผลิต 4 CβH3หรือ 4 CαHไม่พบในข้อมูลระยะยาว
noes สังเกต, heme เมทิล 1H เคมีรูปแบบการกระจายตัวกะ
[53] กะ propionate และ H111 15N ผิดปกติ กะมีทั้งหมดสอดคล้อง
กับการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นใน H111 และ heme 4 แทนที่
(สนับสนุนข้อมูลรูป. S20A)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ t111h ctrhb สเปกตรัมที่เกิดจากการรักษา ( รูปที่ 3 ) มีความหลากหลายของ hyperfine

เปลี่ยนเส้นเข้มแนะนำส่วนผสมของอย่างน้อยสามชนิด ชุดเด่นใหม่
resonances กับบัญชีผลิตภัณฑ์หลักสำหรับ ~ 60% ของ
ตัวอย่าง ไม่สามารถเปลี่ยนเพื่อลด cyanomet t111h ctrhb อย่างสมบูรณ์
ภายใต้เงื่อนไขที่คุณเหล่านี้สามารถเห็นได้จากการสนับสนุน
ข้อมูลรูป S15 และอธิบายชุดสองยอดซึ่ง
สอดคล้องกับ cyanomet สาขานี่ orientational ไอโซเมอร์ของ
วัสดุเริ่มต้น ( ~ 25 % ) ในที่สุด ชุดสาม สอดคล้องกับผลิตภัณฑ์เล็กน้อย
ที่อาจจะเกิดจากการเปลี่ยนแปลงที่แตกต่างกันของ heme หรือ
DT ทำลายโปรตีน อย่างไรก็ตาม หลังจากการรักษายอดเป็นของ
ไอโซเมอร์ cyanomet เล็กน้อยของวัสดุ t111h เริ่มหายไป เราจึงพบว่า

ผลิตภัณฑ์หลักมีการเชื่อมโยงระหว่างการ h111 และท่าน 4-substituent ในปฐมนิเทศ
คล้ายคลึงกับผู้เยาว์เซ็นเตอร์ตั้งแต่วัสดุ เราอ้างถึง
ผลิตภัณฑ์นี้เป็น t111h ctrhb-a4 ( สนับสนุนข้อมูลรูป s20a ) .
สัญญาณที่สอดคล้องกับกลุ่ม ctrhb-a4
t111h ฮีมเมทิลจะถูกกำหนดบนพื้นฐานของความเข้มสูงและ 1H และ 13C ร่นพาราแมกเนติกลักษณะ
upfield กะของพวกเขา dqf-cosy Spectra
เปิดเผยหนึ่งไวนิลและทั้ง propionate หมุนระบบ ภายในและระหว่าง 1-ch3 ฮีม noes
8-ch3 พร้อมกับการติดต่อระหว่างฮีม
1 - 2-substituents บ่งชี้ว่าท่าน 2-vinyl กลุ่ม
ยังคงเหมือนเดิม ( สนับสนุนข้อมูลรูป s17 ) cyanomet t111h
ctrhb 1h-15n LR ได้เก็บรวบรวมข้อมูล ก่อนและหลังการรักษาและ DT
เมื่อเทียบกับ WT ข้อมูลบ่งชี้ของประหลาด
อิมิดาโซลระบบ [ 52 ] ใน t111h ctrhb-a4 ผลิตภัณฑ์ , exhibiting สอง
ร่นขยับสัญญาณ 15 ( และที่ 250.6 220.7 ppm ) j-coupled กับ
โปรตอนที่ 8.36 ppm , ตัวเอง j-connected ผ่าน tocsy ไปโปรตอนที่
6.48 ppm เฮิรตซ์เหล่านี้เกิดจาก h111 ( ตารางที่ 2 )เสพ
กำหนดตำแหน่งด้านโซ่ ได้แก่ h111 H ε 1 toheme3-ch3
f48 H และ H และζεε ' , และ h111 H δ 2 กับฮีมและด้าน 3-ch3 v115
โซ่ methyls . ทั้ง h111 H ε 1 และ h δ 2 ได้ร่วมกัน ( และไม่แข็งแรง
อ่อนแอตามลำดับ ) ในกลุ่มเมทิลที่ 3.39 ppm ซึ่งได้รับการดัดแปลง
ฮีม 4-C บีตา H3 กลุ่ม ตาม , การเชื่อมต่อ
สเกลาร์เป็นที่สังเกตระหว่าง 4-C บีตา H3 และโปรตอนเดียวที่ 6.15 ppm
( สนับสนุนข้อมูลรูป s17 ) ที่สอดคล้องกับการแก้ไข
ฮีม 4-C α H . นี้โปรตอนเช่น 4-C บีตา H3 อยู่ใน dipolar ติดต่อกับ
h111 H ε 1 แม้ว่า jhn coupling ระหว่าง 2 และ 15 h111 εใหม่
ผลิต 4-C บีตา H3 หรือ 4-C α H ไม่พบในข้อมูลระยะไกล ,
ไม่พบ ,ฮีมเมทิล 1 กะเคมีกระจายรูปแบบ
[ 53 ] , propionate กะ และผิดปกติ h111 15 กะจะสอดคล้องกับการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นใน h111
และนี่ 4-substituent
( สนับสนุนข้อมูลรูป s20a )