Partial CytB primers; CytB.S.A3 F:

Partial CytB primers; CytB.S.A3 F: TGCCTGTTCCTACACGT and CytB.S.A3 R: AGTTAGTGATTACGGTTG, were developed based on aligned sequences of the cape clawless and spotted necked otter tissue samples generated above. Primers were positioned in areas flanking inter-specific sequence differences and were designed using OligoAnalyzer3.1(IntegratedDNA technologies) with the aim of amplifying a 130 bp fragment of the CytB gene. Additionally, a tissue sample of Eurasian otter (Lutra lutra) from Hungary was analysed to determine the amplification success of these primers on related otter species. Amplicons for sequencing were generated using the above mentioned Dreamtaq PCR mastermix protocol.ThePCR conditions for the partial CytB primers were as follows:one cycle of 94 for 5 min then 10 cycles of 94 °C for 30s,55 °C for 50s and 72 °C for 1 min; 15 cycles of 94 °C for 30s,50 °C for 50s and72 °C for 1min; and lastly 20 cycles of 94 °C for 30s, 45 °C for 50s and72 °C for 1 min and finally one cycle at 72 °C for 10min. Purification,sequencing and sequence analysis was performed as discussed above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์บางส่วน CytB CytB.S.A3 F: TGCCTGTTCCTACACGT และ CytB.S.A3 R: AGTTAGTGATTACGGTTG ได้รับการพัฒนาตามลำดับวางตัวอย่างเนื้อเยื่อ clawless และด่างคอนากแหลมที่สร้างเหนือ ไพรเมอร์ถูกวางในพื้นที่ flanking ลำดับเฉพาะระหว่างความแตกต่าง และถูกออกแบบโดยใช้ OligoAnalyzer3.1 (IntegratedDNA เทคโนโลยี) ด้วยจุดมุ่งหมายของมือส่วน bp 130 ของยีน CytB นอกจากนี้ ตัวอย่างเนื้อเยื่อของนกนาก (Lutra lutra) จากฮังการีที่ analysed เพื่อพิจารณาขยายความสำเร็จของไพรเมอร์เหล่านี้ในพันธุ์นากที่เกี่ยวข้อง Amplicons สำหรับลำดับถูกสร้างโดยใช้โพรโทคอล mastermix Dreamtaq PCR กล่าว ThePCR เงื่อนไขสำหรับไพรเมอร์ CytB บางส่วนได้เป็นดังนี้: หนึ่งรอบของ 94 สำหรับ 5 นาทีแล้วรอบ 10 ของ 94 ° C สำหรับ 30s, 55 ° C สำหรับผสมและ 72 ° C สำหรับ 1 นาที รอบ 15 ของ 94 ° C สำหรับ 30s, 50 ° C สำหรับผสม and72 ° C สำหรับ 1 นาที และรอบสุดท้าย 20 ของ 94 ° C สำหรับ 30s, 45 ° C สำหรับผสมทำ and72 ° C 1 นาทีและรอบสุดท้ายหนึ่งที่ 72 ° C สำหรับ 10 นาทีวิเคราะห์ฟอก ลำดับ และลำดับดังที่กล่าวไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไพรเมอร์บางส่วน CytB; CytB.S.A3 F: TGCCTGTTCCTACACGT และ CytB.S.A3 R: AGTTAGTGATTACGGTTG ถูกพัฒนาบนพื้นฐานของลำดับสอดคล้องของแหลม clawless และเห็นตัวอย่างเนื้อเยื่อคอนากสร้างขึ้นดังกล่าวข้างต้น ไพรเมอร์อยู่ในตำแหน่งในพื้นที่ขนาบลำดับความแตกต่างระหว่างที่เฉพาะเจาะจงและได้รับการออกแบบโดยใช้ OligoAnalyzer3.1 (เทคโนโลยี IntegratedDNA) มีวัตถุประสงค์ของการขยายส่วน 130 bp ของยีน CytB นอกจากนี้กลุ่มตัวอย่างเนื้อเยื่อของนากเอเชีย (Lutra Lutra) จากฮังการีได้รับการวิเคราะห์เพื่อกำหนดความสำเร็จการขยายของไพรเมอร์สายพันธุ์เหล่านี้บนนากที่เกี่ยวข้อง amplicons สำหรับลำดับที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ดังกล่าวข้างต้น Dreamtaq PCR mastermix เงื่อนไข protocol.ThePCR สำหรับไพรเมอร์ CytB บางส่วนมีดังนี้หนึ่งรอบ 94 เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว 10 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30, 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 50 และ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที; 15 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30, 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 50 and72 ° C เป็นเวลา 1 นาที; และสุดท้าย 20 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30, 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 50 and72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีและในที่สุดก็หนึ่งรอบที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที การทำให้บริสุทธิ์ลำดับและการวิเคราะห์ลำดับได้ดำเนินการตามที่กล่าวข้างต้น