ents, which might have been due to

ents, which might have been due to endogenous proteins excretedfrom the yeast cells. The quantity of total proteins was significantlyhigher after bead beating, reaching 2.93 mg/mL after 5 min. Thisincrease in total proteins continued with bead beating for 10 and15 min, reaching 3.09 and 3.13 mg/mL total proteins, respectively.Certain cofactors, including ATP and NAD+, play a vital rolein conventional fermentation processes, and the absence of suchcofactors inhibits process initiation and affects the entire fermen-tation process [30]. The quantitative evaluation of the developedcell-free enzyme system revealed the presence of these cofactorsin reasonable quantities. A total of 1.8 mM ATP and 0.11 mM NAD+were observed in the cell-free proteins solution, concentrationsthat are sufficient for the initiation of cell-free fermentation [31,32].The NAD+concentration in the present study was less than theactual concentration of NAD+in yeast cells, as more than 80% ofthe NAD+fluorescence was in a bound form and could not bedetected in the cell lysate [32]. Nevertheless, this system was effi-cient enough to initiate the metabolism of 3–5% glucose, whichis in agreement with a previously reported reconstituted cell-free enzyme system consisting of 12–15 mg/mL enzymes, 5 mMATP (from potato), and 2 mM NAD+(Sigma Chemical Co.), whichresulted in the metabolism of 18% glucose [12]. As the systemdesigned in the present study is a single-cell-based system con-taining all the required fermentation constituents, our system isadvantageous compared to previously described systems [12].3.2. Determination of glycolytic and fermentation enzymes in thecell-free solutionThe identification of proteins (enzymes) involved in specific bio-logical processes is the first step of any proteomic study. Althoughseveral techniques are available for the differential analysis of pep-tides, gel electrophoresis is currently the most common approachfor routine peptides differentiation based on the particular chargeand mass of the peptide [33]. Among the modern techniques, nano-scale liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry(nano-LC–MS/MS) is considered a robust setup for peptides anal-ysis [34]. The process of cell-free fermentation involves a numberof glycolytic and fermentation enzymes [20], and the identifica-tion of these enzymes is essential to understanding the course ofcell-free fermentation. In addition to total protein quantificationusing a Bradford assay (Table 1 supplementary data), SDS-PAGEand LC–MS/MS Q-TOF analyses were performed to determine theyeast glycolytic and fermentation enzymes expected to be presentin the cell-free solution. Initially, the yeast cell-free solution pro-duced was analyzed by SDS-PAGE after each round of bead beating(Fig. 1). As the bead-beating time increased, the intensity of pro-tein bands increased, with the maximum amount of yeast proteinsbeing extracted after 10–15 min of bead beating. It is well knownthat yeast cells use two types of enzymes (glycolytic and fermen-tation) to convert glucose molecules to bio-ethanol, and, undernormal conditions, ten glycolytic and two fermentation enzymesare involved in glucose fermentation [35]. The partial separation ofenzymes from the cell-free enzyme system during SDS-PAGE anal-ysis produced some clearly defined bands and a number of denseregions (Fig. 1).LC coupled to MS is currently used as an advanced analyticaltechnique for the identification of biological molecules, such asproteins, peptides, and metabolites, in food and pharmaceuticalproducts [36]. Therefore, the enriched cell-free enzymes solutionwas analyzed by LC–MS/MS (Q-TOF) to ensure the existence ofthe respective glycolytic and fermentation enzymes in our cell-freelysate. The tandem mass spectra obtained were then used to searcha yeast protein database to characterize our target proteins. Basedon the molecular weight, accession number, description, molarmass, PI, and score, the yeast glycolytic and fermentation enzymesinvolved in glucose fermentation were identified in the cell-freeenzyme system after resolving the samples on a polyacrylamide gel(Fig. 1 and Table 1). As shown in Table 1, our cell-free enzyme sys-tem contains almost all enzymes involved in glucose fermentationexcept two enzymes (phosphofructokinase and phosphoglyceratekinase). The absence of phosphofructokinase and phosphoglyceratekinase in Table 1 may be attributed to the shortcomings associ-ated with LC–MS/MS (Q-TOF) analysis technique. In the presence ofseveral groups of higher abundance proteins, the detection of low-abundance proteins are quite difficult because the proteins withhigher abundance seriously interfere their detection [37,38].We previously reported the existence of various cell-free fer-mentation and saccharification enzymes (1.7 mg/mL) in WBFBidentified through LC–MS/MS (Q-TOF) analysis; these enzymesFig

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ents อาจได้เนื่องจากโปรตีน endogenous excretedfrom เซลล์ยีสต์ ปริมาณของโปรตีนทั้งหมด significantlyhigher หลังจากลูกปัดตี ถึง 2.93 mg/mL หลังจาก 5 นาที Thisincrease ในโปรตีนรวมต่อ ด้วยลูกปัดตีสำหรับ 10 นาที and15 ถึง 3.09 และ 3.13 mg/mL รวมโปรตีน ตามลำดับบางอย่างใช้โคแฟกเตอร์ ATP และและ + เล่น rolein ที่สำคัญกระบวนการหมักแบบดั้งเดิม และยับยั้งกระบวนการเริ่มต้นการขาดงานของ suchcofactors และมีผลต่อกระบวนการทั้งหมด fermen-tation [30] การประเมินเชิงปริมาณของเอนไซม์ developedcell ฟรีระบบเปิดเผยสถานะของปริมาณเหล่านี้เหมาะสม cofactorsin A รวม 1.8 มม. ATP และ 0.11 mM และ + ถูกพบในโซลูชั่นฟรีเซลล์โปรตีน concentrationsthat มีเพียงพอสำหรับการเริ่มต้นของการหมักเซลล์ฟรี [31,32]และ + ความเข้มข้นในการศึกษาปัจจุบันได้น้อยกว่าความเข้มข้น theactual ของและ + ใน เซลล์ยีสต์ กว่า 80% และ + fluorescence ในฟอร์มที่ถูกผูกไว้ และอาจไม่ bedetected ในเซลล์ lysate [32] อย่างไรก็ตาม ระบบนี้ถูก effi-cient พอเริ่มเผาผลาญกลูโคส 3 – 5%, whichis ยังคงระบบรายงานก่อนหน้านี้เอนไซม์เซลล์ฟรี reconstituted ประกอบด้วยเอนไซม์ 12 – 15 mg/mL, mMATP 5 (จากมันฝรั่ง), และ 2 มม.และ + (ซิกเคมี จำกัด), whichresulted ในการเผาผลาญกลูโคส 18% [12] เป็น systemdesigned ในการศึกษาปัจจุบัน ที่เดียวเซลล์ใช้ระบบแอร์-taining ทั้งหมดที่ต้องหมัก constituents, isadvantageous ระบบของเราเมื่อเทียบกับก่อนหน้านี้อธิบายระบบ [12] .3.2 กำหนด glycolytic และหมักเอนไซม์ในรหัส thecell ฟรี solutionThe ของโปรตีน (เอนไซม์) ที่เกี่ยวข้องในกระบวนการทางชีวภาพตรรกะเฉพาะ ขั้นตอนแรกของการศึกษา proteomic เทคนิค Althoughseveral มีการวิเคราะห์ที่แตกต่างของ pep-น้ำ electrophoresis เจอยู่ที่ทั่ว approachfor เปปไทด์เป็นประจำสร้างความแตกต่างขึ้นอยู่กับมวล chargeand เฉพาะของเพปไทด์ [33] ระหว่างเทคโนโลยีสมัยใหม่ นาโนสเกล chromatography เหลวควบคู่กับ spectrometry(nano-LC–MS/MS) โดยรวมตัวตามกันไปจะถือว่าการตั้งค่าประสิทธิภาพของเปปไทด์ทางทวารหนัก-ysis [34] กระบวนการหมักที่ปราศจากเซลล์เกี่ยวข้องกับการหมักเอนไซม์ [20] และ numberof แบบ glycolytic และ identifica-สเตรชันของเอนไซม์เหล่านี้เป็นสิ่งสำคัญเพื่อทำความเข้าใจเกี่ยวกับหลักสูตรฟรี ofcell หมัก นอกจากโปรตีนรวม quantificationusing วิเคราะห์แบรดฟอร์ด (ตารางที่ 1 ข้อมูลเสริม), SDS PAGEand LC – MS/MS Q-TOF วิเคราะห์ดำเนินการกำหนด theyeast glycolytic และหมักเอนไซม์ที่คาดว่าจะมี presentin โซลูชั่นฟรีเซลล์ เริ่มแรก ยีสต์เซลล์ฟรีโซลูชั่นโป duced ถูกวิเคราะห์ โดย SDS-หน้าหลังจากแต่ละรอบปัดตี (Fig. 1) เป็นเวลาเต้นลูกปัดเพิ่มขึ้น ความเข้มของแถบนี้โปรเพิ่มขึ้น มีจำนวน proteinsbeing ยีสต์สกัดหลัง 10 – 15 นาทีของลูกปัดเต้น ก็ดี knownthat ยีสต์เซลล์ใช้เอนไซม์สองชนิด (glycolytic และ fermen-tation) การแปลงโมเลกุลกลูโคสไบโอเอทานอล และ เงื่อนไข undernormal สิบ glycolytic และ enzymesare หมักสองเกี่ยวข้องกับการหมักกลูโคส [35] Ofenzymes แยกบางส่วนจากระบบเอนไซม์เซลล์ฟรีระหว่างหน้า SDS ทางทวารหนัก-ysis ผลิตบางวงอย่างชัดเจนและหมายเลข denseregions (Fig. 1)ปัจจุบันได้ใช้เป็น analyticaltechnique ขั้นสูงการ LC ควบคู่กับ MS สำหรับรหัสของโมเลกุลชีวภาพ เช่น asproteins เปปไทด์ และ metabolites อาหารและ pharmaceuticalproducts [36] ดังนั้น ที่อุดมฟรีเซลล์เอนไซม์ solutionwas วิเคราะห์ทาง LC – MS/MS (Q-TOF) เพื่อให้การดำรงอยู่ของการเกี่ยวข้อง glycolytic หมักเอนไซม์ในเซลล์-freelysate ของเรา ตัวตามกันไปโดยรวมแรมสเป็คตรารับได้แล้วใช้ฐานข้อมูล searcha ยีสต์โปรตีนลักษณะโปรตีนเป้าหมายของเรา ทะเบียน Basedon น้ำหนักโมเลกุล หมายเลข คำอธิบาย molarmass, PI และคะแนน glycolytic ยีสต์ และ enzymesinvolved หมักในการหมักน้ำตาลกลูโคสได้ถูกระบุไว้ในระบบ freeenzyme เซลล์หลังจากแก้ไขตัวอย่างบนเจ polyacrylamide (Fig. 1 และตารางที่ 1) ดังแสดงในตารางที่ 1, sys-ยการของเราฟรีเซลล์เอนไซม์ประกอบด้วยเอนไซม์เกือบทั้งหมดที่เกี่ยวข้องกับกลูโคส fermentationexcept สองเอนไซม์ (phosphofructokinase และ phosphoglyceratekinase) การขาดงานของ phosphofructokinase และ phosphoglyceratekinase ในตารางที่ 1 อาจเกิดจาก associ-เส้นแสดงด้วยเทคนิค LC – MS/MS (Q-TOF) ในกลุ่มของหลายสถานะของโปรตีนมากขึ้น การตรวจพบโปรตีนความอุดมสมบูรณ์ต่ำได้ค่อนข้างยากเนื่องจากอุดมสมบูรณ์ withhigher โปรตีนแทรกแซง [37,38] การตรวจอย่างจริงจังเราเคยรายงานการดำรงอยู่ของเซลล์ฟรี fer-เอกสารต่าง ๆ และ saccharification เอนไซม์ (1.7 mg/mL) ใน WBFBidentified ผ่านการวิเคราะห์ LC – MS/MS (Q-TOF) enzymesFig เหล่านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บิดาซึ่งอาจจะเป็นเพราะโปรตีนภายนอก excretedfrom เซลล์ยีสต์ ปริมาณของโปรตีนทั้งหมดเป็น significantlyhigher หลังจากลูกปัดเต้นถึง 2.93 mg / ml หลังจาก 5 นาที Thisincrease โปรตีนทั้งหมดอย่างต่อเนื่องกับการเต้นลูกปัด 10 and15 นาทีถึง 3.09 และ 3.13 mg / ml โปรตีนรวมปัจจัย respectively.Certain รวมทั้งเอทีพีและ NAD + เล่น rolein สำคัญกระบวนการหมักธรรมดาและไม่มี suchcofactors ยับยั้งการเริ่มต้นของกระบวนการและ ส่งผลกระทบต่อทั้งกระบวนการ fermen-tation [30] การประเมินผลเชิงปริมาณของระบบเอนไซม์ developedcell ฟรีเปิดเผยปรากฏตัวของเหล่านี้ cofactorsin ปริมาณที่เหมาะสม รวม 1.8 มิลลิเอทีพีและ 0.11 มิลลิ NAD + ถูกตั้งข้อสังเกตในสารละลายโปรตีนเซลล์ฟรี concentrationsthat มีเพียงพอสำหรับการเริ่มต้นของการหมักเซลล์ฟรี [31,32] ได้โดยง่าย NAD + ความเข้มข้นในการศึกษาในปัจจุบันน้อยกว่า theactual ความเข้มข้นของ NAD + ในเซลล์ยีสต์เป็นมากกว่า 80% ofthe เรืองแสง NAD + เป็นในรูปแบบที่ถูกผูกไว้และไม่สามารถ bedetected ใน lysate เซลล์ [32] อย่างไรก็ตามระบบนี้เป็น Effi-เพียงพอพอที่จะเริ่มต้นการเผาผลาญกลูโคส 3-5%, whichis ในข้อตกลงกับรายงานก่อนหน้านี้สร้างระบบเอนไซม์เซลล์ฟรีประกอบด้วย 12-15 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรเอนไซม์ 5 mMATP (จากมันฝ​​รั่ง) และ 2 มิลลิ NAD + (Sigma เคมี จำกัด ) whichresulted ในการเผาผลาญกลูโคส 18% [12] ในฐานะที่เป็น systemdesigned ในการศึกษาในปัจจุบันเป็นระบบเซลล์เดียวที่ใช้ Con-ในประเด็นทุกองค์ประกอบการหมักต้องใช้ระบบของเรา isadvantageous เมื่อเทียบกับระบบที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [12] .3.2 การกำหนด glycolytic และเอนไซม์ในการระบุการหมักแบบเท thecell ฟรีของโปรตีน (เอนไซม์) มีส่วนร่วมในกระบวนการทางชีวภาพตรรกะที่เฉพาะเจาะจงเป็นขั้นตอนแรกของการศึกษาโปรตีนใด ๆ เทคนิค Althoughseveral ที่มีอยู่สำหรับการวิเคราะห์ความแตกต่างของความห้าวหาญ-กระแสน้ำเจลอิเล็กในปัจจุบันคือเปปไทด์ที่พบมากที่สุดประจำ approachfor แตกต่างกันขึ้นอยู่กับมวล chargeand เฉพาะของเปปไทด์ [33] ในบรรดาเทคนิคที่ทันสมัย​​, ระดับนาโนของเหลว chromatography คู่กับตีคู่มวลสาร (นาโน LC-MS / MS) จะพิจารณาการติดตั้งที่แข็งแกร่งสำหรับเปปไทด์ทางทวารหนั​​ก ysis [34] กระบวนการของการหมักปราศจากเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับการจํานวน glycolytic และเอนไซม์หมัก [20] และ identifica-การของเอนไซม์เหล่านี้เป็นสิ่งจำเป็นในการทำความเข้าใจหลักสูตรการหมัก ofcell ฟรี นอกเหนือจากโปรตีนรวม quantificationusing ทดสอบ Bradford (ตารางที่ 1 ข้อมูลเพิ่มเติม) SDS-PAGEand LC-MS / MS วิเคราะห์ Q-TOF ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบ theyeast glycolytic เอนไซม์และการหมักคาดว่าจะ presentin แก้ปัญหามือถือฟรี ในขั้นต้นการแก้ปัญหาปราศจากเซลล์ยีสต์โปรสงได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี SDS-PAGE หลังจากที่แต่ละรอบของลูกปัดเต้น (รูปที่ 1). เมื่อเวลาลูกปัดตีเพิ่มความเข้มของวงโปรโปรตีนที่เพิ่มขึ้นด้วยจำนวนเงินสูงสุดของ proteinsbeing ยีสต์สกัดหลังจาก 10-15 นาทีของลูกปัดเต้น มันเป็นอย่างดี knownthat เซลล์ยีสต์ใช้ทั้งสองประเภทของเอนไซม์ (glycolytic และ fermen-tation) เพื่อแปลงโมเลกุลของน้ำตาลกลูโคสที่จะไบโอเอทานอลและเงื่อนไข undernormal สิบ glycolytic และสอง enzymesare หมักมีส่วนร่วมในการหมักน้ำตาลกลูโคส [35] ofenzymes แยกบางส่วนจากระบบเอนไซม์เซลล์ฟรีในช่วง SDS-PAGE ทางทวารหนั​​ก ysis ผลิตบางวงกำหนดไว้อย่างชัดเจนและจำนวน denseregions (รูปที่ 1). .lc ควบคู่ไปยัง MS ปัจจุบันใช้เป็น analyticaltechnique ขั้นสูงสำหรับบัตรประจำตัวของทางชีวภาพ โมเลกุล asproteins เช่นเปปไทด์และสารในอาหารและ pharmaceuticalproducts [36] ดังนั้นเอนไซม์เซลล์ฟรีอุดม solutionwas วิเคราะห์โดย LC-MS / MS (Q-TOF) เพื่อให้แน่ใจว่าการดำรงอยู่ ofthe glycolytic เอนไซม์และการหมักที่เกี่ยวข้องในเซลล์ freelysate ของเรา สเปกตรัมมวลควบคู่ได้แล้วถูกนำมาใช้ฐานข้อมูล searcha โปรตีนยีสต์ลักษณะโปรตีนเป้าหมายของเรา ปฏิกิริยาลูกน้ำหนักโมเลกุลจำนวนภาคยานุวัติคำอธิบาย molarmass, PI และคะแนนยีสต์ glycolytic และหมัก enzymesinvolved ในการหมักน้ำตาลกลูโคสถูกระบุอยู่ในระบบเซลล์ freeenzyme หลังจากการแก้ไขตัวอย่างในเจลอะคริเลต (รูป. 1 และตารางที่ 1) . ดังแสดงในตารางที่ 1 มือถือฟรีเอนไซม์ SYS-Tem ของเรามีเอนไซม์เกือบทุกคนที่เกี่ยวข้องใน fermentationexcept กลูโคสสองเอนไซม์ (phosphofructokinase และ phosphoglyceratekinase) กรณีที่ไม่มีการ phosphofructokinase และ phosphoglyceratekinase ในตารางที่ 1 อาจจะประกอบกับข้อบกพร่อง Associ-ated กับ LC-MS / MS (Q-TOF) เทคนิคการวิเคราะห์ ในการปรากฏตัว ofseveral กลุ่มของโปรตีนที่อุดมสมบูรณ์สูง, การตรวจหาโปรตีนต่ำอุดมสมบูรณ์เป็นเรื่องยากมากเพราะโปรตีน withhigher อุดมสมบูรณ์อย่างจริงจังรบกวนการตรวจสอบของพวกเขา [37,38] เราก่อนหน้านี้รายงานการดำรงอยู่ของเซลล์ต่างๆฟรี FER-mentation และ saccharification เอนไซม์ (1.7 mg / ml) ใน WBFBidentified ผ่าน LC-MS / MS (Q-TOF) การวิเคราะห์; เหล่านี้ enzymesFig

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอกสารซึ่งอาจได้รับเนื่องจาก excretedfrom โปรตีนภายในเซลล์ยีสต์ ปริมาณของโปรตีนทั้งหมด significantlyhigher หลังจากลูกแก้วเต้นถึง 2.93 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร หลังจาก 5 นาที thisincrease โปรตีนรวมต่อเนื่องกับลูกปัดตี 10 and15 มินถึง 3.09 และ 3.13 mg / ml รวมโปรตีน ตามลำดับ บางปัจจัย ได้แก่ เอทีพี และ สตี ,เล่นชีพปกติการหมักกระบวนการถ่ายทอด และการขาดของการ suchcofactors ยับยั้งกระบวนการและมีผลต่อกระบวนการ tation fermen ทั้งหมด [ 30 ] การประเมินเชิงปริมาณของ developedcell ฟรีระบบเอนไซม์ที่พบว่ามีปริมาณที่เหมาะสมของเหล่านี้ cofactorsin . ทั้งหมดของ ATP และ 0.11 มิลลิเมตร 1.8 มม. และพบในโปรตีนในการสังเคราะห์สารละลายconcentrationsthat มีเพียงพอสำหรับการเริ่มต้นของการสังเคราะห์กระบวนการหมัก [ 31,32 ] . และสมาธิในการศึกษาน้อยกว่าถึงความเข้มข้นของ NAD ในเซลล์ยีสต์ เป็นมากกว่า 80% ของ NAD เรืองแสงอยู่ในขอบเขตรูปแบบและไม่สามารถตรวจพบเซลล์ lysate [ 32 ] อย่างไรก็ตาม ระบบนี้ถูก effi cient พอเริ่มการเผาผลาญกลูโคส 5% และ 3 ,ซึ่งสอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้สร้างการสังเคราะห์เอนไซม์ระบบซึ่งประกอบด้วย 12 – 15 mg / ml เอนไซม์ 5 mmatp ( มันฝรั่ง ) , 2 มม. และ NAD ( Sigma Chemical Co . ) , whichresulted ในการเผาผลาญกลูโคสร้อยละ 18 [ 12 ] ที่ได้ในการศึกษาเป็นเซลล์เดียวระบบ con สีย้อมทั้งหมดต้องหมักองค์ประกอบตามisadvantageous ระบบของเราเมื่อเทียบกับก่อนหน้านี้ที่อธิบายระบบ [ 12 ] . . . การกำหนด glycolytic และการหมักเอนไซม์ใน thecell ฟรี solutionthe รหัสของโปรตีน ( เอนไซม์ ) ที่เกี่ยวข้องในทางตรรกะเฉพาะกระบวนการเป็นขั้นตอนแรกของการศึกษาโปรตีนใด ๆ เทคนิค althoughseveral มีความแตกต่างกัน การวิเคราะห์กระแสเจลในปัจจุบันที่พบมากที่สุด approachfor รูทีนเปปไทด์ความแตกต่างขึ้นอยู่กับเฉพาะ chargeand มวลของเปปไทด์ [ 33 ] ในบรรดาเทคนิคสมัยใหม่วิธีโครมาโทกราฟีของเหลว นาโน ขนาดคู่กับตีคู่มวลสาร ( นาโน LC MS / MS ) ) ถือเป็นการตั้งค่าประสิทธิภาพสำหรับเปปไทด์ทวารหนัก ysis [ 34 ]กระบวนการหมักที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์จำนวน glycolytic และการหมักเอนไซม์ [ 20 ] และ identifica tion ของเอนไซม์เหล่านี้เป็นสิ่งสำคัญที่จะเข้าใจ ofcell แน่นอนฟรี การหมัก นอกจากการรวมโปรตีน quantificationusing เป็น Bradford assay ( ตารางที่ 1 เพิ่มเติมข้อมูล )SDS pageand LC MS / MS และการวิเคราะห์ q-tof ยังได้ theyeast glycolytic หมักเอนไซม์และคาดว่าจะ presentin การสังเคราะห์สารละลาย ในการสังเคราะห์สารละลายยีสต์โปร duced วิเคราะห์โดย SDS-PAGE หลังจากแต่ละรอบลูกแก้วเต้น ( รูปที่ 1 ) เป็นลูกปัดเต้นเวลา เพิ่มความเข้มของเตียนโปรวงเพิ่มขึ้นกับจำนวนเงินสูงสุดของ proteinsbeing ยีสต์สกัดหลังจาก 10 – 15 นาทีลูกแก้วเต้น มันจะดี knownthat ยีสต์เซลล์ใช้สองชนิดของเอนไซม์ ( glycolytic และ fermen tation ) เพื่อแปลงโมเลกุลกลูโคสไบโอ เอทานอล และ undernormal เงื่อนไข 10 glycolytic และสอง enzymesare เกี่ยวข้องในการหมักการหมักกลูโคส [ 35 ]ส่วนการแยก ofenzymes จากระบบการสังเคราะห์เอนไซม์เอนไซม์ในทวารหนัก ysis ผลิตบางอย่างชัดเจนวงและจำนวน denseregions ( รูปที่ 1 ) LC คู่กับนางสาว ปัจจุบันใช้เป็น analyticaltechnique ขั้นสูงสำหรับการระบุโมเลกุลทางชีวภาพ เช่น asproteins ไทด์ และสารในอาหารและ pharmaceuticalproducts [ 36 ] ดังนั้นการสังเคราะห์เอนไซม์ที่อุดม solutionwas โดยใช้ LC MS / MS ) ( q-tof ) เพื่อให้แน่ใจว่าตัวตนของตน glycolytic หมักและ freelysate เอนไซม์ในเซลล์ของเรา การตีคู่มวลจะมีค่าแล้วใช้ searcha ยีสต์โปรตีนฐานข้อมูลในลักษณะของโปรตีนเป้าหมายของเรา จากโมเลกุล ความสนใจจำนวนรายละเอียด molarmass , PI และคะแนนยีสต์หมักและ glycolytic enzymesinvolved ในการหมักกลูโคสมีการระบุในระบบ freeenzyme เซลล์หลังการแก้ไขตัวอย่างบนโพลีอะคริลาไมด์เจล ( รูปที่ 1 และตารางที่ 1 ) ดังแสดงในตารางที่ 1 ของเราการสังเคราะห์เอนไซม์ sys tem ประกอบด้วยเกือบทั้งหมดของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องใน fermentationexcept กลูโคสเอนไซม์ทั้งสอง ( phosphofructokinase และ phosphoglyceratekinase )ไม่มี phosphofructokinase phosphoglyceratekinase และตารางที่ 1 อาจจะเกิดจากข้อบกพร่อง ( พ่อพันธุ์ ated กับ LC MS / MS ) ( q-tof ) เทคนิคการวิเคราะห์ ในกลุ่มของตน ofseveral ที่สูงมากมาย โปรตีน การตรวจหาโปรตีนอุดมสมบูรณ์ต่ำ จะค่อนข้างยากเพราะมีความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนอย่างจริงจังรบกวนตรวจสอบ [ 37,38 ]เรารายงานว่า ก่อนหน้านี้มี mentation เพื่อการสังเคราะห์เอนไซม์ต่าง ๆและเส้น ( 1.7 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ) ใน wbfbidentified ผ่าน LC MS / MS ) ( q-tof ) การวิเคราะห์ enzymesfig เหล่านี้