2.9. Determination of Metallothionein Amount
The pellet of 1 ml of S. aureus incubated for 24 hours at 37◦C inLB medium was resuspended in 1 ml of phosphate buffer (pH 7),after that the sample was denaturated in thermoblock at 99◦C for20 minutes and centrifuged for 20 minutes at 25 000 rpm. Super-natant from the sample was used for electrochemical detection. Electrochemical detection was carried out using the method of differential pulse voltammetry (Raspor et al., 2001; Sevcikova et al.,2013) (three electrodes consisted of working mercury drop elec-trode (HMDE), reference silver-chloride electrode Ag/AgCl/3 M KCland auxiliary carbon electrode). The analysed samples were deoxi-dized by argon for 120 seconds. As a supporting electrolyte, Brdickasolution, which contained 1 mM [Co(NH3)6]Cl3and 1 M ammo-nium buffer (NH3(aq) + NH4Cl, pH 9.6), was used as a supporting electrolyte. This electrolyte was changed after each analysis ofsample. The parameters for measurements were following: initialpotential -0.7 V, final potential -1.75 V, the time interval 0.2 s, steppotential 2 mV, amplitude -250 mV.
2.9 การกำหนดจำนวน Metallothioneinเม็ดของ ml 1 ของหมอเทศข้างลาย S. incubated ตลอด 24 ชั่วโมงที่ 37◦C inLB กลางถูก resuspended ใน 1 ml ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7), หลังจากตัวอย่างถูก denaturated ใน thermoblock 99◦C for20 นาที และ centrifuged 20 นาทีที่ 25 000 รอบต่อนาที เตอร์รุ่น natant จากตัวอย่างที่ใช้ตรวจทางเคมีไฟฟ้า ตรวจไฟฟ้าถูกดำเนินการโดยใช้วิธีของชีพจรส่วน voltammetry (Raspor และ al., 2001 Sevcikova et al., 2013) (หุงตสามประกอบด้วยปรอทหล่น elec-trode (HMDE), อ้างอิงอิเล็กโทรดคลอไรด์ซิลเวอร์ Ag/AgCl/3 M KCland เสริมคาร์บอนอิเล็กโทรดทำงาน) ตัวอย่าง analysed ได้ deoxi-dized โดยอาร์กอน 120 วินาที เป็นแบบอิเล็กโทรสนับสนุน Brdickasolution ซึ่งมีอยู่ 1 มม. [Co (NH3) 6] Cl3and 1 M กระสุน-nium บัฟเฟอร์ (NH3(aq) + NH4Cl, pH 9.6), ใช้เป็นอิเล็กโทรสนับสนุน อิเล็กโทรนี้ถูกเปลี่ยนแปลงหลังจาก ofsample แต่ละการวิเคราะห์ พารามิเตอร์สำหรับการประเมินได้ดังต่อไปนี้: initialpotential-0.7 V สุดท้ายเป็น-1.75 V เวลาช่วง 0.2 s, steppotential 2 mV, mV คลื่น-250
การแปล กรุณารอสักครู่..
