The ATP, ADP and AMP contents were measured according to
the method described by Liu, Jiang, Luo, and Jiang (2006) with a
slight modification. Two grams of frozen banana fruit sample
was homogenized in 5 mL of 0.6 M perchloric acid in ice-bath
and centrifuged at 4 C for 20 min at 12,000 g. Three milliliters
of supernatant liquor was neutralized with 1 M KOH to pH 6.5–
6.8 in ice-bath and cenctrifuged at 4 C for 10 min at 10,000 g
after standing for 30 min to remove the potassium perchlorate.
The supernatant liquor was diluted to 4 mL and filtered through
a 0.45 lm filter. The ATP, ADP and AMP were measured using a
high-performance liquid chromatography system (LC-2010A,
Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan), which equipped with a
reverse-phase Luna 5 lm C18 column (4.6 mm 250 mm, Phenomenex,
Torrance, CA) and an ultraviolet detector. Mobile phase
A consisted of 0.04 M KH2PO4 and 0.06 M K2HPO4 and was
adjusted pH to 7.0 with 0.1 M KOH. Mobile phase B was methyl
alcohol. A linear gradient elution program was used as follows:
0 min: 100% A; 7 min: 80% A, 20% B; 9 min: 75% A, 25% B;
10 min: 100% B. The program took a further 5 min to return to
the initial conditions and stabilize. The flow rate was 1.0 mL/min
and the injection volume was 20 lL. The peaks were detected at
254 nm and the contents of ATP, ADP and AMP were determined
by using external standard program. Energy charge (EC) was calculated
according to the following formula:
ATP, ADP และ AMP เนื้อหาถูกวัดตามวิธีการอธิบาย โดย Liu เจียง Luo เจียง (2006) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ตัวอย่างผลไม้แช่แข็งกล้วยสองกรัมแก้ไข homogenized ใน 5 มล.ของดไป็นน้ำแข็งน้ำ 0.6 เมตรและเหวี่ยง 4 c เป็นเวลา 20 นาทีที่ 12,000 g 3 มิลลิลิตรเหล้า supernatant ถูก neutralized 1 เมตรเกาะกับค่า pH 6.5 –6.8 ในน้ำแข็งน้ำและ cenctrifuged 4 c เป็นเวลา 10 นาทีที่ 10,000 gหลังจาก 30 นาทีให้เอาซีโพแทสเซียมเหล้า supernatant ถูกเจือจางไป 4 mL และกรองผ่านกรอง 0.45 lm ATP, ADP และ AMP ถูกวัดค่าโดยใช้การสูงละลายน้ำระบบ (LC 2010AShimadzu Corporation เกียวโต ญี่ปุ่น), ซึ่งมีการคอลัมน์ lm C18 Luna 5 กลับเฟส (4.6 มม. 250 mm, Phenomenexรันซ์ CA) และการตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต ขั้นตอนที่มือถือ0.04 M KH2PO4 และ 0.06 M K2HPO4 และแก้ไขปรับ pH 7.0 ด้วย 0.1 M เกาะ โทรศัพท์มือถือระยะ B คือ methylแอลกอฮอล์ ใช้โปรแกรมเชิงเส้นไล่ระดับชะเป็นดังนี้:0 นาที: 100% A 7 นาที: 80% A, 20% B 9 นาที: 75% A, 25% Bข. 10 นาที: 100% โปรแกรมใช้เวลา 5 นาทีเพิ่มเติมกลับไปการเริ่มต้นเงื่อนไข และความมั่นคง คืออัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร/นาทีและปริมาณการฉีด 20 จะ พบที่ยอดเขา254 nm และเนื้อหาของ ATP, ADP และ AMP ดำเนินการโดยใช้โปรแกรมมาตรฐานภายนอก คำนวณค่าพลังงาน (EC)ตามสูตรต่อไปนี้:
การแปล กรุณารอสักครู่..
เอทีพี ADP และ AMP เนื้อหาถูกวัดตาม
วิธีการที่อธิบายโดยหลิวเจียง Luo และเจียง (2006) ที่มี
การปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สองกรัมของตัวอย่างกล้วยผลไม้แช่แข็ง
ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันใน 5 มิลลิลิตร 0.6 เมตรกรดเปอร์คลอริกในน้ำแข็งอาบน้ำ
และหมุนเหวี่ยงที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีที่ 12,000? ก. สามมิลลิลิตร
ของสุราใสถูกเป็นกลางกับ M 1 KOH ค่า pH 6.5-
6.8 ในน้ำแข็งอาบน้ำและ cenctrifuged ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีที่ 10,000? กรัม
หลังจากที่ยืนเป็นเวลา 30 นาทีเพื่อขจัดโพแทสเซียม perchlorate ได้.
สุราสารละลายเจือจาง 4 มิลลิลิตรและกรองผ่าน
ตัวกรอง 0.45 LM เอทีพี ADP และแอมป์ถูกวัดโดยใช้
ที่มีประสิทธิภาพสูงระบบของเหลว chromatography (LC-2010A,
Shimadzu คอร์ปอเรชั่นเกียวโตประเทศญี่ปุ่น) ซึ่งมาพร้อมกับ
ย้อนกลับเฟสคอลัมน์ Luna 5 LM C18 (4.6 มม? 250 มม Phenomenex,
Torrance, CA) และเครื่องตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต เฟสเคลื่อนที่
ประกอบด้วย 0.04 M KH2PO4 และ 0.06 M K2HPO4 และได้รับการ
ปรับค่า pH 7.0 กับ 0.1 M KOH มือถือเฟส B เป็นเมธิล
แอลกอฮอล์ โปรแกรมลาดชะเชิงเส้นได้ถูกใช้เป็นดังนี้:
0 นาที: ผล 100%; 7 นาที: 80% A, B 20%; 9 นาที: 75% จาก 25% B;
10 นาที: 100% B. โปรแกรมเอาอีก 5 นาทีเพื่อกลับไปที่
เงื่อนไขเริ่มต้นและความมั่นคง อัตราการไหลเป็น 1.0 มิลลิลิตร / นาที
และปริมาณการฉีดเป็น 20 LL ยอดเขาที่ถูกตรวจพบที่
254 นาโนเมตรและเนื้อหาของเอทีพี ADP และแอมป์ได้รับการพิจารณา
โดยใช้โปรแกรมมาตรฐานภายนอก ค่าใช้จ่ายพลังงาน (EC) ที่คำนวณ
ตามสูตรต่อไปนี้:
การแปล กรุณารอสักครู่..
ATP ADP และแอมป์วัด , เนื้อหาตามวิธีที่อธิบายโดยหลิวเจียง หลัว และเจียง ( 2006 ) กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สองกรัมของผลไม้อย่างกล้วยแช่แข็งมันบดใน 5 ml 0.6 M เปอร์คลอริกแอซิดในน้ำแข็งอาบไฟฟ้าที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีที่ 12 , 000 กรัม 3 มิลลิลิตรเหล้าที่นำคือเป็นกลาง 1 M pH 6.5 –เกาะ6.8 น้ำแข็งในอ่าง และ cenctrifuged ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีที่ 10 ก.หลังจากยืนรอ 30 นาทีเพื่อเอาโพแทสเซียม Perchlorate .นำเหล้าเจือจาง 4 มิลลิลิตร กรองผ่านตัวกรอง 0.45 ไมโครเมตร ATP ADP และแอมป์ , ถูกวัดโดยใช้วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( lc-2010a ระบบ ,Shimadzu Corporation , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) ซึ่ง พร้อมคอลัมน์กลับเฟสลูน่า 5 อิม c18 ( 4.6 มม. phenomenex 250 มม. ,Torrance , CA ) รังสีอัลตราไวโอเลตและเครื่องตรวจจับ เฟสเคลื่อนที่เป็นจำนวน 0.04 M kh2po4 0.06 เมตร k2hpo4 และปรับ pH 7.0 ด้วย 0.1 M โค มือถือเฟส B เมทิลแอลกอฮอล์ การใช้โปรแกรมเชิงเส้นชนิด ดังนี้0 นาที : 100% ; 7 นาที 80 % เป็น 20 % B ; 9 นาที 75 % เป็น 25 % B ;10 นาที 100 % B . โปรแกรมได้อีก 5 นาที เพื่อกลับไปเงื่อนไขเริ่มต้นและความมั่นคง อัตราการไหลเท่ากับ 1.0 มล. / นาทีและปริมาณการฉีด 20 จะ พบว่ามียอดที่254 nm และปริมาณ ATP ADP และแอมป์ , สารละลายโดยใช้โปรแกรมมาตรฐานภายนอก ประจุพลังงาน ( EC ) คือ การคำนวณตามสูตรต่อไปนี้ :
การแปล กรุณารอสักครู่..