A combined enrichment/real-time PCR

A combined enrichment/real-time PCR method for the detection of Listeria monocytogenes is presented. The method is based on a conventional PCR assay targeting the prfA gene, which has been validated and suggested as an international standard PCR method for identifying L. monocytogenes in food. This real-time PCR assay includes an internal amplification control. Inclusivity and exclusivity were 100% each when testing 100 L. monocytogenes isolates, 30 Listeria spp. isolates other than L. monocytogenes, and 29 non-Listeria isolates. The theoretical detection limit was one copy of the target gene per PCR reaction and the practical detection limit was about 5 copies per PCR. Using the combined enrichment/real-time PCR method, 7.5 CFU/25 ml of artificially contaminated raw milk, and 9, 1, and 1 CFU/15 g of artificially contaminated salmon, pâté, and green-veined cheese, respectively, were detected. When analyzing 76 naturally contaminated food samples of various types and comparing the results with the ISO 11290-1 standard method, the relative accuracy was 96%, the relative specificity 100%, and the relative sensitivity, 76.9%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การนำเสนอรวมใน บ่อ/real-time PCR วิธีตรวจออลิ monocytogenes วิธีการยึดตามทดสอบ PCR แบบเดิมที่กำหนดเป้าหมายยีน prfA ซึ่งได้รับการตรวจสอบ และแนะนำเป็นวิธี PCR มาตรฐานสากลสำหรับการระบุ L. monocytogenes ในอาหาร ทดสอบนี้ PCR แบบเรียลไทม์รวมถึงขยายภายในตัวควบคุม Inclusivity และบ้านได้ 100% แต่ละเมื่อทดสอบ 100 L. monocytogenes ล 30 ออลิโอแยกใช่ L. monocytogenes และแยกไม่ออลิ 29 ขีดจำกัดการตรวจสอบทฤษฎีมีสำเนาของยีนเป้าหมายต่อปฏิกิริยา PCR และสำเนาประมาณ 5 ต่อ PCR ถูกจำกัดตรวจปฏิบัติ โดยรวมใน บ่อ/real-time PCR วิธี 7.5 CFU/25 ml นมดิบปนเปื้อนเหือด 9, 1 และ 1 CFU/15 g ของปลาแซลมอนเหือดปนเปื้อน pâté และกรี veined ชี ตามลำดับ พบ เมื่อวิเคราะห์ 76 ธรรมชาติปนเปื้อนตัวอย่างอาหารชนิดต่าง ๆ และเปรียบเทียบผลกับวิธีมาตรฐาน 11290-1 ISO ความสัมพันธ์ได้ 96% ญาติ specificity 100% และระดับความ ลับญาติ 76.9%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตกแต่งรวม / real-time PCR วิธีการตรวจหาเชื้อ Listeria monocytogenes จะนำเสนอ วิธีการจะขึ้นอยู่กับการทดสอบ PCR แบบเดิมกำหนดเป้​​าหมายยีน prfA ซึ่งได้รับการตรวจสอบและแนะนำเป็นวิธี PCR มาตรฐานสากลสำหรับการระบุ L. monocytogenes ในอาหาร นี้แบบ real-time PCR ทดสอบรวม​​ถึงการควบคุมการขยายภายใน inclusivity และความพิเศษอยู่ที่ 100% ในแต่ละเมื่อการทดสอบ 100 L. monocytogenes แยก 30 Listeria spp แยกอื่น ๆ กว่า monocytogenes ลิตรและ 29 ที่ไม่ Listeria แยก ขีด จำกัด ของการตรวจสอบทางทฤษฎีเป็นหนึ่งสำเนาของยีนเป้าหมายต่อปฏิกิริยา PCR และขีด จำกัด ของการตรวจสอบการปฏิบัติเป็นประมาณ 5 ชุดต่อ PCR ใช้การตกแต่งรวม / real-time PCR วิธี 7.5 CFU / 25 มล. ของนมปนเปื้อนดิบและ 9, 1, และ 1 CFU / 15 กรัมของปลาแซลมอนปนเปื้อน, หัวและชีสสีเขียวเส้นเลือดตามลำดับตรวจพบ . เมื่อวิเคราะห์การปนเปื้อน 76 ตัวอย่างอาหารธรรมชาติประเภทต่างๆและเปรียบเทียบผลกับมาตรฐาน ISO 11290-1 วิธีมาตรฐานที่ถูกต้องเป็น 96% ความจำเพาะญาติ 100% และความไวญาติ, 76.9%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รวมเวลาจริงการ / วิธี PCR เพื่อตรวจหาวงแหวนแวนอัลเลนคือแสดง โดยอาศัยแบบ PCR assay เป้าหมาย prfa ยีน ซึ่งได้รับการตรวจสอบและเสนอเป็นมาตรฐานระหว่างประเทศสำหรับการระบุวิธีพีซีอาร์ . monocytogenes ในอาหาร เรียลไทม์ PCR assay รวมถึงการขยายการควบคุมภายในinclusivity และความพิเศษ 100% เมื่อทดสอบ 100 ลิตร แต่ละ monocytogenes เชื้อ Listeria spp . สายพันธุ์อื่น ๆ กว่า 30 ลิตร monocytogenes และ Listeria 29 ปลอดเชื้อ ขอบเขตการตรวจสอบทฤษฎีหนึ่งสำเนาของยีนเป้าหมายต่อปฏิกิริยา PCR และยักท่าจริงประมาณ 5 เล่มต่อ PCR รวมเวลาจริงการใช้ / วิธีพีซีอาร์ , 7 .5 CFU / 25 ml เทียมปนเปื้อนนมดิบ และ 9 , 1 และ 1 CFU / 15 กรัมเทียมปนเปื้อนปลาแซลมอน ปาเตและสีเขียว veined ชีสตามลำดับ ถูกตรวจพบ เมื่อวิเคราะห์ตัวอย่างอาหารปนเปื้อน 76 ธรรมชาติชนิดต่างๆ และเปรียบเทียบผลลัพธ์ที่ได้กับมาตรฐาน ISO 11290-1 วิธี ความถูกต้อง ญาติก็ญาติ 96% , ความจำเพาะ 100% และความไวของญาติ76.9 %