3.1.3. Extraction and clean-upErgot

3.1.3. Extraction and clean-up

Ergot alkaloids (pKa 4.8–6.2) are positively charged at N-6 in acidic solutions and neutral at higher pH. They can therefore be extracted either with non-polar organic solvents under alkaline conditions or with polar solvents under acidic conditions. In this work, different alkaline extraction solvents namely an acetonitrile/ammonium carbonate buffer mixture ( Krska et al., 2008) and an ethyl acetate/methanol/ammonium bicarbonate buffer mixture ( Diana Di Mavungu et al., 2009 and Müller et al., 2009), as well as an acidic solvent i.e. a methanol/0.25% H3PO4 mixture were evaluated. Blank rye samples spiked with ergot alkaloids at a concentration of 250 μg/kg were used. To adequately compare the different extraction solvents, no clean-up was performed prior to LC–MS/MS analysis; the extracts were simply diluted (1:10) and filter-centrifuged in an Ultrafree®-MC centrifugal device. The highest SRM responses of the ergot alkaloids were obtained after extraction with acetonitrile/3 mM ammonium carbonate (84/16, v/v) or ethyl acetate/methanol/0.2 M ammonium bicarbonate pH 8.5 (62.5/25/12.5, v/v/v) ( Supplemental Fig. S3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.1.3 การสกัดและการทำความสะอาดลคาลอยด์ ergot (pKa 4.8-6.2) จะมีประจุบวกที่ N-6 ในการแก้ปัญหาที่เป็นกรดและเป็นกลางที่ pH สูงขึ้น พวกเขาจึงสามารถสกัดได้ทั้งที่มีตัวทำละลายอินทรีย์ที่ไม่มีขั้วภายใต้เงื่อนไขที่อัลคาไลน์หรือขั้วโลกละลายภายใต้เงื่อนไขที่เป็นกรด ในงานนี้ตัวทำละลายสกัดอัลคาไลน์ที่แตกต่างกันคือ acetonitrile / แอมโมเนียผสมบัฟเฟอร์คาร์บอเนต (Krska et al., 2008) และเอทิลอะซิเต / เมทานอล / แอมโมเนียผสมบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนต (ไดอาน่าดิ Mavungu et al., 2009 และMüller et al., 2009) เช่นเดียวกับตัวทำละลายที่เป็นกรดเช่นเมทานอล / 0.25% ส่วนผสม H3PO4 ได้รับการประเมิน ตัวอย่างข้าวที่ว่างเปล่าถูกแทงด้วย ergot ลคาลอยด์ที่ความเข้มข้น 250 ไมโครกรัมของ / กกถูกนำมาใช้ เพียงพอที่จะเปรียบเทียบตัวทำละลายในการสกัดที่แตกต่างกันไม่สะอาดขึ้นได้ดำเนินการก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ LC-MS / MS; สารสกัดถูกปรับลดเพียง (01:10) และกรองหมุนเหวี่ยงในอุปกรณ์แรงเหวี่ยงUltrafree® MC- การตอบสนองสูงสุดของ SRM ลคาลอยด์ ergot ที่ได้รับหลังจากการสกัดด้วย acetonitrile / 3 มิลลิแอมโมเนียมคาร์บอเนต (84/16, v / v) หรือเอทิลอะซิเต / เมทานอล / 0.2 M pH แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 8.5 (62.5 / 25 / 12.5 ปริมาตร / ปริมาตร / v) (เพิ่มเติมรูป. S3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.1.3 . การสกัดและการทำความสะอาด

ด้านอัลคาลอยด์ ( pKa 4.8 ( 6.2 ) มีประจุบวกอยู่ในโซลูชั่นไร้กรดและเป็นกลาง pH สูง พวกเขาจึงสามารถสกัดด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่มีขั้วด่างหรือตัวทำละลายที่มีขั้วภายใต้สภาวะที่เป็นกรด ในงานนี้สารละลายด่างตัวทำละลายแตกต่างกันคือเป็นไนไตรล์ / แอมโมเนียมคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ผสม ( krska et al . , 2008 ) และเอทิลอะซิเตท / เมทานอลผสมแอมโมเนียมไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ ( ไดอาน่า ดิ mavungu et al . , 2009 และ M ü ller et al . , 2009 ) , เช่นเดียวกับตัวทำละลายที่เป็นกรดเช่นเมทานอล / 0.25 % H3PO4 ส่วนผสมที่ถูกประเมินตัวอย่างข้าวเปล่ากับอัลคาลอยด์ spiked ด้านความเข้มข้น 250 μกรัม / กิโลกรัมใช้ สามารถเปรียบเทียบตัวทำละลายการสกัดที่แตกต่างกันไม่สะอาดขึ้นแสดงก่อน LC MS / MS และการวิเคราะห์สารสกัดก็เจือจาง ( 1 : 10 ) และตัวกรองไฟฟ้าใน ultrafree ® - พิธีกร พัดลมดูดอากาศ เครื่องสำหรับในด้านการตอบสนองสูงสุดของอัลคาลอยด์ได้หลังจากการสกัดด้วยไน / 3 มม. แอมโมเนียมคาร์บอเนต ( 84 / 16 v / v ) หรือเอทิลอะซิเตท / เมทานอล / 0.2 M แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต pH 8.5 ( 62.5 / 25 / 12 V / V / V ) ( เพิ่มเติมรูป S3 )