Cholesterol uptake was assayed acco

Cholesterol uptake was assayed according to previously published methods with minor modifications (Wang et al., 2014; Yao et al., 2013). Caco-2 cells were grown in Dulbecco Minimum Essential Medium (DMEM) supplemented with 1% penicillin and streptomycin and 15% FBS. Cells were seeded onto 96-well plates (5 × 105 cells/cm2). After 20 days of incubation, cells were treated with various concentrations of TJS for 24 h. Then, fluorescent 22-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-23,24-bisnor-5-cholen-3β-ol (NBD-cholesterol; Life Technologies, Burlington,
VT) was added and incubated for an additional 2 h. Then, cells were washed twice with cold PBS to stop cholesterol uptake and fluorescence was read at Ex/Em = 470/535 nm on a 96-well plate reader (Tecan, Mannedorf, Switzerland). Protein was
measured using a bicinchoninic acid kit (Pierce, Rockford, IL).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การดูดซึมคอเลสเตอรถูก assayed ตามวิธีเผยแพร่ก่อนหน้านี้มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (Wang et al. 2014 ยาว et al. 2013) Caco 2 เซลล์ที่ปลูกใน Dulbecco ต่ำสุดจำเป็นปานกลาง (DMEM) เสริม ด้วย 1% ยาเพนนิซิลลิน และ streptomycin และ 15% FBS เซลล์ที่เตรียมลงบนจาน 96 หลุม (5 × 105 เซลล์/cm2) หลังจาก 20 วัน เซลล์ได้รับการรักษา ด้วยความเข้มข้นต่าง ๆ ของทีเจเอสใน 24 ชม แล้ว ฟลูออเรสเซนต์ 22-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-23,24-bisnor-5-cholen-3β-ol (NBD อร เทคโนโลยีชีวิต เบอร์ลิงตันVT) ถูกเพิ่ม และรับการกก 2 ชม.เพิ่มเติม เซลล์ถูกล้าง ด้วย PBS เย็นเพื่อหยุดการดูดซึมคอเลสเตอรสองครั้ง แล้วเรืองแสงถูกอ่านที่ Ex / Em = 470/535 นาโนเมตรบนเครื่องอ่านแผ่น 96 หลุม (Tecan, Mannedorf สวิตเซอร์แลนด์) คือโปรตีนวัดโดยใช้กรดชุด bicinchoninic (Pierce ร็อคฟอร์ด IL)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การดูดซึมคอเลสเตอรอลได้รับการวิเคราะห์ตามวิธีการเผยแพร่ก่อนหน้านี้มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (Wang et al, 2014;.. ยาว et al, 2013) Caco-2 เซลล์ที่ถูกปลูกใน Dulbecco ขั้นต่ำที่จำเป็นปานกลาง (DMEM) เสริมด้วยยาปฏิชีวนะ 1% และ streptomycin และ 15% FBS เซลล์ที่ถูกเมล็ดลงบนแผ่น 96 หลุม (5 × 105 เซลล์ / cm2) หลังจาก 20 วันของการบ่มเซลล์ได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นต่างๆของ TJS เป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นเรืองแสง 22- (N- (7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-YL) อะมิโน) -23,24-bisnor-5-cholen-3β-OL (NBD คอเลสเตอรอล; ไลฟ์เทคโนโลยี เบอร์ลิงตัน,
VT) ถูกบันทึกและบ่มสำหรับอีก 2 ชั่วโมง จากนั้นเซลล์ถูกล้างครั้งที่สองกับพีบีเอสเย็นที่จะหยุดการดูดซึมคอเลสเตอรอลและเรืองแสงได้อ่านในอดีต / em = 470/535 นาโนเมตรบนเครื่องอ่านแผ่น 96 หลุม (Tecan, Mannedorf วิตเซอร์แลนด์) โปรตีนถูก
วัดโดยใช้ชุดกรด bicinchoninic (เพียร์ซ, ฟอร์ด, IL)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คอเลสเตอรอลการใช้ซีรั่มตามเผยแพร่ก่อนหน้านี้วิธีกับการแก้ไขเล็กน้อย ( Wang et al . , 2014 ; ยาว et al . , 2013 ) caco-2 เซลล์เติบโตในดัลเบโค่ต่ำสุดที่จำเป็นขนาดกลาง ( dmem ) เสริมด้วยยา 1% และ streptomycin 15 % FBS เซลล์มีเมล็ดลงบนแผ่น ( 96 ดี 5 × 105 เซลล์ / cm2 ) หลังจาก 20 วันของระยะเวลาการเก็บรักษาเซลล์ความเข้มข้นต่างๆเป็นเวลา 24 ชั่วโมง . แล้วเรืองแสง , 22 - ( - ( 7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl ) อะมิโน ) - 23,24-bisnor-5-cholen-3 บีตา - ol ( ไม่สำคัญคอเลสเตอรอล ; ชีวิตเทคโนโลยี เบอร์ลิงตันVT ) คือการเพิ่มและบ่มเพื่อเพิ่มอีก 2 ชั่วโมง แล้วเซลล์ก็ล้างสองครั้งกับ PBS เย็นเพื่อหยุดการดูดซึมคอเลสเตอรอลและเรืองแสงได้อ่านที่แฟนเก่า / em = 470 / 535 นาโนเมตรในแผ่น ( อ่าน 96 ดีทีแคน mannedorf , สวิตเซอร์แลนด์ ) โปรตีนคือวัดโดยใช้ชุดกรด bicinchoninic ( เพียซ ร็อกฟอร์ด , อิลลินอยส์ )