Both HEK293TEnv cells and HeLaT4Tru

Both HEK293TEnv cells and HeLaT4Tru cells were detached with 0.05% EDTA in
PBS (pH7.4), and co-cultured (3 x 104 cells/well each) in wells of a 96-well plate. Various
concentrations of T20, a known HIV-1 fusion inhibitor, were added. As positive and negative
controls, the wells containing no fusion inhibitor and mock transfected cells, respectively,
were included. Co-cultured cells were incubated for 1-5 days at 37C in 5% CO2. At
indicated time, cell-cell fusions were observed under the inverted fluorescent microscope
(Nikon, Japan). The GFP signals were quantified by using a fluorescent microplate reader
(Wallac 1420-018 Victor 2, Perkin Elmer) with excitation and emission wavelengths at 485
nm and 510 nm, respectively. The data obtained from measurement of copGFP intensity were
analyzed by the program Microsoft Excel to calculate for percent cell-cell fusion and 50%
inhibitory concentration (IC50). GFP generated in wells containing no fusion inhibitor was
set as 100% while those generated by the co-cultured cells of target cells and mock
transfected cells was set as 0%. The percent fusions of each concentration of T20 were
plotted to calculate the IC50 of T20

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์ HEK293TEnv และ HeLaT4Tru เซลล์ถูกแยกออก ด้วย EDTA 0.05% ในPBS (pH7.4), และอ่างร่วม (3 x 104 เซลล์/ดีละ) ในบ่อของจานดี 96 ต่าง ๆมีเพิ่มความเข้มข้นของ T20 การรู้จักเอชไอวี-1 ฟิวชั่นผล เป็นค่าบวก และค่าลบควบคุม บ่อประกอบด้วยไม่ผลผสมผสานและจำลองเซลล์ transfected ตามลำดับได้รวม เซลล์ร่วมอ่างถูก incubated สำหรับวันที่ 1-5 ที่ 37C 5% CO2 ที่ระบุเวลา สุภัค fusions เซลล์เซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสกลับ(Nikon ญี่ปุ่น) สัญญาณ GFP ถูก quantified โดยอ่าน microplate เรืองแสง(1420-018 Wallac วิคเตอร์ 2 เพอร์เอลเมอ) มีความยาวคลื่นในการกระตุ้นและปล่อยก๊าซที่ 485nm และ 510 nm ตามลำดับ มีข้อมูลที่ได้จากการวัดความเข้ม copGFPวิเคราะห์ โดยโปรแกรม Microsoft Excel ในการคำนวณเปอร์เซ็นต์เซลล์เซลล์ฟิวชั่นและ 50%ลิปกลอสไขเข้มข้น (IC50) ถูกสร้างในบ่อที่ประกอบด้วยสารยับยั้งไม่ฟิวชั่น GFPตั้งค่าเป็น 100% ในขณะที่สร้างขึ้น โดยเซลล์ของเซลล์เป้าหมายและ mock อ่างร่วมtransfected เซลล์ถูกตั้งค่าเป็น 0% มี fusions เปอร์เซ็นต์ของแต่ละความเข้มข้นของ T20ลงจุดคำนวณ IC50 T20

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งเซลล์และเซลล์ HEK293TEnv HeLaT4Tru ถูกเดี่ยวพร้อม EDTA 0.05%
ในพีบีเอส(pH7.4) และร่วมเลี้ยง (3 x 104 เซลล์ / กันในแต่ละ) ในหลุมของแผ่น 96 หลุม ต่างมีความเข้มข้นของ T20 ซึ่งเป็นที่รู้จักกัน HIV-1 ยับยั้งฟิวชั่นที่ถูกเพิ่ม
ในฐานะที่เป็นบวกและลบการควบคุมหลุมที่มีสารยับยั้งฟิวชั่นและไม่มีการจำลองเซลล์ transfected ตามลำดับถูกรวม เซลล์ร่วมบ่มเพาะเลี้ยง 1-5 วันที่37Cใน CO2 5% ในเวลาที่ระบุ, การผสมเซลล์เซลล์ถูกตั้งข้อสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงกลับ (Nikon, ญี่ปุ่น) สัญญาณ GFP ถูกวัดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate เรืองแสง(Wallac 1420-018 วิคเตอร์ 2 Perkin Elmer) ที่มีการกระตุ้นและการปล่อยก๊าซเรือนกระจกที่ความยาวคลื่น 485 นาโนเมตรและ 510 นาโนเมตรตามลำดับ ข้อมูลที่ได้จากการวัดความเข้ม copGFP ถูกวิเคราะห์โดยโปรแกรมMicrosoft Excel ในการคำนวณสำหรับฟิวชั่นมือถือมือถือร้อยละ 50% และความเข้มข้นของการยับยั้ง (IC50) GFP สร้างขึ้นในหลุมที่มีสารยับยั้งฟิวชั่นที่ไม่ได้รับการกำหนดให้เป็น100% ในขณะที่ผู้ที่สร้างโดยเซลล์เพาะเลี้ยงร่วมของเซลล์เป้าหมายและจำลองเซลล์transfected ได้รับการตั้งค่าให้เป็น 0% Fusions เปอร์เซ็นต์ของความเข้มข้นของแต่ละ T20 พล็อตในการคำนวณค่า IC50 ของ T20

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้ง hek293tenv เซลล์และเซลล์มี helat4tru เดี่ยวกับ 0.05 % EDTA ใน
PBS ( ph7.4 ) และ CO ( 3 x 104 / เพาะเลี้ยงเซลล์แต่ละ ) ในบ่อของ 96 ครับจาน
ของความเข้มข้นต่างรอดตาย , รู้จักกระบวนการฟิวชั่น ซึ่งมีการเพิ่ม เป็นบวกและลบ
การควบคุมบ่อที่ไม่มีการเยาะเย้ย transfected ยับยั้งเซลล์ตามลำดับ
ถูกรวมเพาะเลี้ยงเซลล์ร่วมถูกบ่ม 1-5 วัน ที่ 37 องศาเซลเซียส ในคาร์บอนไดออกไซด์ 5% ที่
แสดงเวลา , astrocytoma พบภายใต้ fusions กลับหัวกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
( Nikon , ญี่ปุ่น ) ที่สัญญาณถูก quantified GFP โดยใช้หลอดพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน
wallac 1420-018 วิคเตอร์เพอร์กินเอลเมอร์ 2 ) กับความตื่นเต้นและการปล่อยความยาวคลื่นที่ 485
nm และ 510 nm ตามลำดับข้อมูลที่ได้จากการวัดความเข้มของ copgfp ถูก
โดยใช้โปรแกรม Microsoft Excel ในการคำนวณ ฟิวชั่น astrocytoma เปอร์เซ็นต์ และ 50 %
เจริญสมาธิ ( ic50 ) สร้างขึ้นในบ่อที่มี GFP ไม่ฟิวชั่นยับยั้งคือ
ตั้งเป็น 100% ในขณะที่ผู้ที่สร้างขึ้นโดยการเพาะเลี้ยงเซลล์ร่วมเซลล์เป้าหมายและเยาะเย้ย
transfected เซลล์ถูกตั้งค่าเป็น 0 %เปอร์เซ็นต์ fusions ของแต่ละความเข้มข้นของรอดตายถูก
วางแผนที่จะคำนวณ ic50 ของรอดตาย