5. Transfer cells immediately to -2

5. Transfer cells immediately to -20°C for one hour, followed by -80°C overnight before permanent storage in liquid
nitrogen.
This step must be done as soon as the cells are in freezing media. DMSO and some other
cryoprotectants are toxic to cells and so should not be exposed to the cells at room temperature
for any longer than necessary. Thawing of the vials and placing of the cell suspension back into
culture media should also be done very quickly for the same reasons.
6. Thawing and recovery of cells from liquid nitrogen must be done quickly. Prepare pre-warmed medium in advance.
Remove cryovials from liquid nitrogen and immediately place in 37°C water bath and quickly shake until about 80% has thawed. This should not take more than a minute. Quickly pipette out into a flask, add the appropriate amount of medium and place in incubator.
7. After 24 hours, ensure cells are attached. Change culture media to remove non-adherent cells and replenish nutrients.
Changing the culture media will also remove any DMSO residues.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5. ถ่ายโอนเซลล์ทันทีถึง-20 ° C สำหรับหนึ่งชั่วโมง ตาม ด้วย 80 ° C ค้างคืนก่อนที่จะเก็บถาวรในของเหลวไนโตรเจนต้องทำขั้นตอนนี้เป็นเซลล์อยู่ในสื่อการแช่แข็ง DMSO และอื่น ๆcryoprotectants จะเป็นพิษต่อเซลล์ และไม่ควรถูกเปิดเผยไปยังเซลล์ที่อุณหภูมิห้องอีกต่อไปเกินความจำเป็น ละลายของขวด และวางระงับเซลล์กลับเข้าไปในสื่อวัฒนธรรมยังจะทำได้อย่างรวดเร็วสำหรับเหตุผลเดียวกัน6. ละลาย และต้องทำการกู้คืนของเซลล์จากไนโตรเจนเหลวได้รวดเร็วขึ้น เตรียมความพร้อมปานกลางอุ่นก่อนล่วงหน้าเอา cryovials จากไนโตรเจนเหลวทันทีวางในอ่างน้ำ 37° C และสั่นอย่างรวดเร็วจนมีขับประมาณ 80% นอกจากนี้นี้ไม่ควรใช้มากกว่าหนึ่งนาที รวดเร็วปิเปตออกลงในขวดระเหย เพิ่มจำนวนเหมาะสมของสื่อและสถานที่ในตู้อบ7. หลังจาก 24 ชั่วโมง สิ่งที่แนบเซลล์ เปลี่ยนสื่อวัฒนธรรมการเอาเซลล์ไม่ใช่มติ และเติมสารอาหารการเปลี่ยนแปลงสื่อวัฒนธรรมจะเป็นลบใด ๆ ตกค้าง DMSO

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5. เซลล์โอนชำระทันทีถึง -20 ° C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงตามด้วย -80 ° C ค้างคืนก่อนที่จะจัดเก็บข้อมูลอย่างถาวรในของเหลว
ไนโตรเจน.
ขั้นตอนนี้จะต้องทำเร็วที่สุดเท่าที่เซลล์ที่อยู่ในสื่อการแช่แข็ง DMSO และอื่น ๆ บาง
cryoprotectants เป็นพิษต่อเซลล์และอื่น ๆ ไม่ควรสัมผัสกับเซลล์ที่อุณหภูมิห้อง
สำหรับการใด ๆ นานเกินความจำเป็น การละลายของขวดและวางของเซลล์แขวนลอยกลับเข้ามาใน
สื่อวัฒนธรรมนอกจากนี้ยังควรจะทำอย่างรวดเร็วด้วยเหตุผลเดียวกัน.
6 การละลายและการฟื้นตัวของเซลล์จากไนโตรเจนเหลวที่จะต้องทำอย่างรวดเร็ว เตรียมความพร้อมก่อนกลางอุ่นล่วงหน้า.
นำ cryovials จากไนโตรเจนเหลวและเกิดขึ้นทันทีใน 37 ° C อ่างน้ำได้อย่างรวดเร็วและเขย่าจนประมาณ 80% ได้ละลาย นี้ไม่ควรใช้เวลานานกว่าหนึ่งนาที ได้อย่างรวดเร็วเปตออกไปในขวดเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของสื่อและสถานที่ในศูนย์บ่มเพาะ.
7 หลังจาก 24 ชั่วโมงให้แน่ใจว่าเซลล์ที่แนบมา สื่อการเปลี่ยนแปลงทางวัฒนธรรมเพื่อขจัดเซลล์ที่ไม่ใช่พรรคพวกและเติมเต็มสารอาหาร.
การเปลี่ยนสื่อวัฒนธรรมยังจะลบตกค้าง DMSO ใด ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5 . โอนเซลล์ทันที ถึง - 20 องศา C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง แล้วตามด้วย - 80 องศา C ข้ามคืนก่อนจัดเก็บถาวร ในของเหลวไนโตรเจนขั้นตอนนี้จะต้องทำทันทีที่มีการแช่แข็งเซลล์สื่อ DMSO และบางอื่น ๆสารป้องกันโปรตีนเสียสภาพเนื่องจากเป็นพิษต่อเซลล์ และไม่ควรสัมผัสกับเซลล์ที่อุณหภูมิห้องสำหรับการใด ๆนานเกินความจำเป็น การละลายของ vials และการวางของด้านหลังเข้าไปในเซลล์แขวนลอยวัฒนธรรมสื่อควรทำอย่างรวดเร็วด้วยเหตุผลเดียวกัน6 . ละลายและการฟื้นตัวของเซลล์จากไนโตรเจนเหลวจะต้องทำอย่างรวดเร็ว เตรียมความพร้อมก่อนออกสื่อล่วงหน้าลบ cryovials จากไนโตรเจนเหลว และทันทีที่ 37 องศา C น้ำอาบน้ำได้อย่างรวดเร็วและเขย่าจนประมาณ 80% ได้ละลาย . นี้ไม่ควรใช้เวลามากกว่า 1 นาที รวดเร็วเปตออกเป็นขวดเพิ่มปริมาณที่เหมาะสมของอาหารและสถานที่ในศูนย์บ่มเพาะ7 . หลังจาก 24 ชั่วโมง , ให้แน่ใจว่าเซลล์จะแนบ เปลี่ยนวัฒนธรรมสื่อที่จะลบไม่ติดเซลล์และเติมเต็มสารอาหารการเปลี่ยนแปลงวัฒนธรรมสื่อจะยังเอา DMSO ที่ตกค้าง