Intracellular IFN- staining. Intra

Intracellular IFN- staining. Intracellular IFN- expression in response to
peptide stimulation was performed as previously described (19, 25). A total of
106 brain-derived monocytes or splenocytes per well were cultured for 5 h at 37°C
in 200 l of RPMI 1640 medium, supplemented with 5% fetal calf serum, 10 U
of human recombinant interleukin-2, and brefeldin A (Golgiplug [1 l/ml];
PharMingen) either with or without peptides. The peptides were used at a
concentration of 1 g/ml. Cells were then stained as described above for surface
expression of CD8 and incubated overnight at 4°C. For intracellular IFN-
staining, cells were then fixed and permeabilized using the Cytofix/Cytosperm kit
(PharMingen) and stained with a fluorescein isothiocyanate-conjugated monoclonal
rat anti-mouse IFN- antibody (clone XMG 1.2; PharMingen). Cells were
washed and then suspended in PBS containing 2% paraformaldehyde and analyzed
by FACSan flow cytometry

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Intracellular IFN - ย้อมสี IFN intracellular นิพจน์เพื่อตอบสนองเพปไทด์กระตุ้นทำอธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น (19, 25) ผลรวมของ106 monocytes สมองมาหรือ splenocytes ต่อดีมีอ่างสำหรับ h 5 ที่ 37° Cในขนาด 200 ลิตรของกลาง RPMI 1640 เสริม ด้วยเซรั่มลูกครรภ์ 5%, 10 Uมนุษย์ recombinant interleukin-2 และ brefeldin การ (Golgiplug [1 l/ml];PharMingen) อาจมี หรือไม่ มีเปปไทด์ เปปไทด์จะถูกใช้ในการความเข้มข้นของ 1 g / ml. เซลล์แล้วได้สีตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับผิวนิพจน์ของ CD8 และ incubated ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส สำหรับ intracellular IFN-ย้อมสี เซลล์ได้ถาวร แล้วใช้ชุด Cytofix/Cytosperm permeabilized(PharMingen) และสีกับการ fluorescein isothiocyanate กลวงโมโนหนูป้องกันเมาส์ IFN-แอนติบอดี (โคลน XMG 1.2 PharMingen) เซลล์ได้ล้างแล้วถูกระงับใน PBS ประกอบด้วย paraformaldehyde 2% และวิเคราะห์โดยเซลล์ไหล FACSan

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ IFN-? การย้อมสี เซลล์ IFN-? การแสดงออกในการตอบสนองต่อการกระตุ้นเปปไทด์ที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (19, 25)
รวม
106 monocytes สมองที่ได้มาหรือ splenocytes ต่อกันมาเลี้ยงเป็นเวลา 5 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37
องศาเซลเซียสใน200 ลิตร RPMI 1640 กลางเสริมด้วย 5% ซีรั่มน่องทารกในครรภ์ 10 U
ของ recombinant มนุษย์ interleukin-2 และ brefeldin (Golgiplug [? 1 ลิตร / ml];
PharMingen) ทั้งที่มีหรือไม่มีเปปไทด์ เปปไทด์ถูกนำมาใช้ในความเข้มข้น 1? g / ml
เซลล์ที่ถูกย้อมสีแล้วตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับพื้นผิวการแสดงออกของ CD8 และบ่มค้างคืนที่ 4 ° C
สำหรับเซลล์ IFN-?
ย้อมสีเซลล์ได้รับการแก้ไขแล้วและ permeabilized ใช้ Cytofix / Cytosperm ชุด
(PharMingen) และสีที่มี fluorescein isothiocyanate-ผันโมโนโคลนอลหนูต่อต้านเมาส์ IFN-?
แอนติบอดี (โคลน XMG 1.2; PharMingen) เซลล์ที่ถูกล้างและระงับแล้วในพีบีเอสที่มี paraformaldehyde 2% และวิเคราะห์โดยโฟFACSan

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

I don't have the disease.I don't have the disease.I don't have the disease.