Analysis of the SIase reaction prod

Analysis of the SIase reaction products was performed by highperformance anion exchange chromatography (HPAEC), high-performance liquid chromatography (HPLC), and thin layer chromatography (TLC). A Dionex DX500 (Dionex Co., Sunnyvale, CA,USA) system equipped with a carbohydrate column (CarboPacPA1, Dionex Co.) and a pulsed amperometric detector (ED40, DionexCo.) was used for HPAEC analysis. Separation of the reaction samples was achieved isocratically using 16 mM NaOH (0–10 min), followed by a linear gradient with 200 mM NaOH (10–40 min) at 1 mL/min. HPLC analysis was performed using a Shimadzu SCL-10A vp (Shimadzu, Tokyo, Japan) loaded with a carbohydrate analysis column (Waters, Milford, MA, USA), and RI Detector (RID 10A, Shimadzu). The mobile phase was acetonitrile:water (88:12) with the flow rate of 1.5 mL/min at 30 C. For TLC analysis, the reaction samples were loaded onto silica gel K5F plates (Whatman, Kent, UK) and developed with isopropyl alcohol/ethyl acetate/water (4:3:0.8, v/v/v). The plates were allowed
to hot-air dry in an oven and then developed by soaking rapidly into 0.3% (w/v) 1-napthiol and 5% (v/v) H2SO4 in methanol. The plate was dried and placed in a 110 C oven for 10 min to enable visualization of the reaction spots. The samples for the assay were obtained by centrifugation (10,000 g, 10 min) of the supernatants of the cell cultures. Presence of enzyme activity in the supernatant was eliminated by boiling the sample for 10 min followed by filtration
(0.45 lm syringe filter, Whatman Inc., Florham Park, NJ, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดำเนินการวิเคราะห์ของผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยา SIase highperformance ไอออน exchange chromatography (HPAEC), ประสิทธิภาพของเหลว chromatography (HPLC), และ chromatography ชั้นบาง (TLC) การ Dionex DX500 (บริษัท Dionex, Sunnyvale, CA, USA) ระบบคอลัมน์คาร์โบไฮเดรต (Dionex CarboPacPA1, Co.) และเครื่องตรวจจับพัลเมตริก (ED40, DionexCo.) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ HPAEC ตัวอย่างปฏิกิริยาการแบ่งแยกคือ ทำได้ isocratically ใช้ 16 มม. NaOH (0-10 นาที), ตาม ด้วยการไล่ระดับสีเชิงเส้นกับ NaOH (10-40 นาที) 200 มม.ที่ 1 มิลลิลิตร/นาที HPLC วิเคราะห์ดำเนินการใช้เป็น SCL Shimadzu 10A vp (Shimadzu โตเกียว ญี่ปุ่น) ด้วยคอลัมน์วิเคราะห์คาร์โบไฮเดรต (น้ำ ลฟอร์ด MA, USA), และเครื่องตรวจจับ RI (RID 10A, Shimadzu) เฟสเคลื่อนคือ acetonitrile:water (88:12) ด้วยอัตราการไหลของ 1.5 mL/min ที่ 30 c สำหรับการวิเคราะห์ TLC ตัวอย่างปฏิกิริยาถูกโหลดลงบนแผ่นซิลิกาเจล K5F (Whatman เคนท์ UK) และพัฒนา ด้วย isopropyl แอลกอฮอล์เอทิลอะซิเตท/น้ำ (4:3:0.8, v/v/v) แผ่นที่ได้รับอนุญาตกับลมร้อนแห้งในเตาอบ และพัฒนาแล้ว โดยการแช่เป็น 0.3% (w/v) 1-napthiol และ 5% (v/v) H2SO4 ในเมทานอลอย่างรวดเร็ว แผ่นแห้ง และวางไว้ในเตาอบ 10 นาทีเพื่อให้ภาพแสดงจุดปฏิกิริยา 110 C ตัวอย่างสำหรับการทดสอบได้รับ โดยการหมุนเหวี่ยง (10,000 g, 10 นาที) ของ supernatants ของวัฒนธรรมเซลล์ ของเอนไซม์ใน supernatant ถูกกำจัด ด้วยการต้มตัวอย่าง 10 นาทีตาม ด้วยการกรอง(0.45 lm เข็มตัวกรอง Whatman Inc., Florham Park นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ของ SIase ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาได้ดำเนินการโดย highperformance แลกเปลี่ยนไอออนโครมาโต (HPAEC) ที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) และชั้นบางโค (TLC) Dionex DX500 (Dionex Co. , ซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ระบบพร้อมกับคอลัมน์คาร์โบไฮเดรต (CarboPacPA1, Dionex จำกัด ) และเครื่องตรวจจับชีพจร amperometric (ED40, DionexCo.) ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ HPAEC การแยกตัวอย่างปฏิกิริยาก็ประสบความสำเร็จโดยใช้ isocratically 16 มิลลิ NaOH (0-10 นาที) ตามด้วยการไล่ระดับสีเชิงเส้นที่มี 200 มิลลิ NaOH (10-40 นาที) ณ วันที่ 1 มิลลิลิตร / นาที วิเคราะห์ HPLC ถูกดำเนินการโดยใช้ Shimadzu SCL-10A VP (Shimadzu, Tokyo, ญี่ปุ่น) เต็มไปด้วยคอลัมน์วิเคราะห์คาร์โบไฮเดรต (Waters, ฟอร์ด, MA, USA) และ RI ตรวจจับ (RID 10A, Shimadzu) เฟสเคลื่อนที่เป็น acetonitrile: น้ำ (88:12) โดยมีอัตราการไหล 1.5 มิลลิลิตร / นาทีวันที่ 30 องศาเซลเซียส สำหรับการวิเคราะห์ TLC ตัวอย่างปฏิกิริยาถูกโหลดลงบนแผ่นซิลิกาเจล K5F (Whatman, Kent, UK) และการพัฒนาที่มีเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl / เอทิลอะซิเตท / น้ำ (4: 3: 0.8 v / v / v) แผ่นได้รับอนุญาต
ที่จะร้อนอากาศแห้งในเตาอบและจากนั้นได้รับการพัฒนาโดยการแช่อย่างรวดเร็วใน 0.3% (w / v) H2SO4 1 napthiol และ 5% (v / v) ในเมทานอล แผ่นแห้งและวางไว้ใน 110? C เตาอบเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อเปิดใช้งานการสร้างภาพของจุดเกิดปฏิกิริยา กลุ่มตัวอย่างที่ใช้สำหรับการทดสอบได้ที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยง (10,000 กรัม 10 นาที) ของ supernatants วัฒนธรรมเซลล์ การปรากฏตัวของเอนไซม์ในสารละลายถูกกำจัดโดยการต้มตัวอย่างเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการกรอง
(0.45 LM กรองเข็ม Whatman อิงค์ฟลอร์แฮมพาร์ค, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ siase ปฏิกิริยาผลิตภัณฑ์โดยใช้ highperformance แลกเปลี่ยนไอออน chromatography ( hpaec ) วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) และ Thin layer chromatography ( TLC ) เป็น DIONEX dx500 ( DIONEX Co . , Sunnyvale , CA , USA ) ระบบพร้อมกับคาร์โบไฮเดรตคอลัมน์ ( carbopacpa1 DIONEX Co . , ) และเครื่องตรวจจับชีพจรสำคัญ ( ed40 dionexco , . ) สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ hpaec . การแยกของปฏิกิริยาตัวอย่างมีความ isocratically โดยใช้ NaOH 16 มม. ( 0 – 10 นาที ) ตามลาดเชิงเส้นกับ 200 มม. NaOH ( 10 – 40 นาที ) ที่ 1 มิลลิลิตร / นาที และทำการวิเคราะห์โดยใช้ Shimadzu scl-10a VP ( Shimadzu , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) เต็มไปด้วยการวิเคราะห์คาร์โบไฮเดรตคอลัมน์ ( น้ำ มิลฟอร์ด , MA , USA ) , และเครื่องตรวจจับริ ( กำจัด 10A Shimadzu , ) ระยะที่เคลื่อนที่อยู่ไนน้ำ ( 88:12 ) ด้วยอัตราการไหล 1.5 มิลลิลิตร / นาทีที่ 30 องศาเซลเซียสสำหรับ TLC การวิเคราะห์ปฏิกิริยาจำนวนโหลดลงบนซิลิกาเจล k5f แผ่น ( whatman เคนท์ , อังกฤษ ) และพัฒนากับ isopropyl แอลกอฮอล์ ethyl acetate / / น้ำ ( 4:3:0.8 , V / V / V ) จานที่ได้รับอนุญาตให้อากาศร้อนแห้งในเตาอบที่พัฒนาแล้วโดยการแช่อย่างรวดเร็วลง 0.3% ( w / v ) 1-napthiol และ 5% ( v / v ) กรดซัลฟิวริกในเมทานอล จานแห้งและวางไว้ในเตาอบเป็นเวลา 10 นาที 110 C เพื่อเปิดการแสดงปฏิกิริยาของจุด ตัวอย่างสำหรับทดสอบได้โดยการเหวี่ยงแยก ( 10 , 000 G 10 นาที ) ของ supernatants ของเซลล์วัฒนธรรม มีกิจกรรมของเอนไซม์ในน่านถูกต้ม 10 นาที ตามด้วยน้ำตัวอย่าง( 0.45 LM เข็มตัวกรอง whatman อิงค์ florham Park , NJ , USA )