20 Example 5 – Controlling the cont

20 Example 5 – Controlling the contaminations with the help of สารประกอบฟีโนลิก and quick heat treatment
The experiments were done using a ไลปิด producing fungal strain A.oryzae. From the sporulating fungus grown on PDA-plates a spore สารแขวนลอย was made by adding
12 ml of sterile water and the spores were scraped off with การปลูกเชื้อ loop to the

25 liquid. 0,5 ml of the spore สารแขวนลอย was used for each flask การปลูกเชื้อ. The medium composition is presented in table 9.
The ฟีโนลิก containing liquid from ออโตไฮโดรไลซิส, ออโตไฮโดรไลซิส liquid A (hemicellulose สารละลาย), was added so that the final concentration in the media was
3,5 g/l. After this the pH of the media was adjusted to 6.5 using 3 M NaOH. The

30 medium was distributed to 50 ml batches into 250 ml erlenmayer flasks. The yeast extract here was used as a source for usual contaminating microbes.





Table 9: Growth medium composition
g/l
Glucose
ฟีโนลิก 40
3,5
Yeast extract 5
(NH4)2S04 2
MgS04 * 7 H20 1,0
K2HP04 0,5
KH2P04 1,0
CaCl2* 2H20 0,2

Half of the media prepared this way was quickly heated to 80 C, and then cooled down. For the rest of the media, no heat treatment was made. Half of the each
5 differently treated flasks were ได้รับการปลูกเชื้อ with 0,5 ml of A. oryzae spore สารแขวนลอย.

The other half of the flasks were left unได้รับการปลูกเชื้อ. Also, two flasks of above described medium without ฟีโนลิก addition was made. This was heat treated in 80
C and ได้รับการปลูกเชื้อ as other cultivations. All the cultivations were incubated in 28 C

and 160 rpm shaking for 7 days. Microbial growth was checked daily with

10 microscope.


Results:

After 1 day of incubation it was observed that the fungus grew in all the media that was ได้รับการปลูกเชื้อ with the spore สารแขวนลอย. In the flasks which were not heat treated
15 with spores and contained no ฟีโนลิก there was notable amount of different

contaminating bacteria and yeasts. None of the ฟีโนลิก containing media were contaminated. After 2 days of incubation in the flasks which were nor ได้รับการปลูกเชื้อ or heat treated, contaminating yeast had started to grow. At the end of the cultivations the fungus had grown well in all the flasks that were ได้รับการปลูกเชื้อ with spores. No
20 contaminating microbes were detected amongst them. In the unได้รับการปลูกเชื้อ and flasks which were not heat treated, was detected also a bacterial contamination besides yeasts mentioned earlier. Contrary to this, the flasks which contained no inocula but were heat treated remained growth free until end of the experiments.


25 Based on these results, 80°C heat treatment together with the addition of สารประกอบฟีโนลิก would seem to be able to keep hemicellulose based cultivations free of most common contaminating microbes. On the other hand, it must be noted that





without ฟีโนลิก the growth medium without heat treatment is easily contaminated, so from hygiene point of view both operations, the addition of สารประกอบฟีโนลิก and light heat treatment are needed.



5 Example 6 ~ Producing microbial oil on ประเภทเฮมิเซลลูโลสsugars

The experiments were done using a ไลปิด producing fungal strain A.oryzae. From the sporulating fungus grown on PDA-plates a spore สารแขวนลอย was made by adding
12 ml of sterile water and the spores were scraped off with การปลูกเชื้อ loop to the

liquid. 24 ml of the spore สารแขวนลอย was used for การปลูกเชื้อ of 6 flasks. The

10 medium composition is presented in table 10. The ได้รับการปลูกเชื้อ flasks were incubated at 30 C 160 rpm shaking for 1 day, and then used for fermentor การปลูกเชื้อ.


Table 10: Composition of การปลูกเชื้อ medium, pH set to 5,5. g/l
ประเภทเฮมิเซลลูโลส sugars 40
Yeast extract 1
(NH4)2S04 1
MgS04 * 7 H20 1
K2HP04 0,5
KH2P04 1
CaCl2* 2H20 0,2

15 ออโตไฮโดรไลซิส liquid D (containing ประเภทเฮมิเซลลูโลส sugars partly in เปเปโอลิโกเมอร์ form) was used and it contained 4,2 g/l สารประกอบฟีโนลิก based on analysis with Folin• Ciocalteu method (Waterhouse, 2002). The cultivation was done in Biostat B plus 5 I fermenter in 3 I volume, and during it the stirring was set to 400 rpm, pH was kept in
5,5 with 3 M NaOH, the aeration was 1 vvm and the temperature 30 C. The medium

20 composition is presented in table 11.


Table 11: The composition of fermentation medium
Medium Concentration components (Q/I)
Hemicellu losic
suqars 60
Yeast extract 1 (NH4)2S04 1
MgCI * 6 H20 1,0





K2HP04 0,5
KH2P04 1,0
CaCl2* 2H20 0,2

Results:

During cultivation, the ประเภทเฮมิเซลลูโลส สารละลาย was added in small batches.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างที่ 20 5 – การควบคุมการปนเปื้อน ด้วยความช่วยเหลือของสารประกอบฟีโนลิกและความร้อนอย่างรวดเร็วทำการทดลองโดยใช้ไลปิดที่ผลิตสายพันธุ์เชื้อรา A.oryzae จากเชื้อรา sporulating ปลูกบนแผ่น PDA สารแขวนลอยสปอร์ที่ทำ โดยการเพิ่ม12 ml ของน้ำผ่านการฆ่าเชื้อและสปอร์ถูกขูดออกกับวงการปลูกเชื้อไปเหลว 25 0,5 สารแขวนลอยสปอร์ ml ใช้สำหรับการปลูกเชื้อแต่ละขวด องค์ประกอบกลางแสดงในตาราง 9ฟีโนลิกที่ประกอบด้วยของเหลวจากออโตไฮโดรไลซิส ออโตไฮโดรไลซิสของเหลว (hemicellulose สารละลาย), ถูกเพิ่มเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายในสื่อ3, 5 g/l หลังจากนี้ ค่า pH ของสื่อถูกปรับให้ 6.5 ใช้ 3 M NaOH การปานกลาง 30 กระจายชุด 50 มล.ลงในขวด erlenmayer 250 ml สารสกัดจากยีสต์ที่นี่ถูกใช้เป็นแหล่งสำหรับจุลินทรีย์ปนเปื้อนที่ปกติ ตารางที่ 9: องค์ขนาดกลางเจริญเติบโตg/lกลูโคสฟีโนลิก 403.5สารสกัดจากยีสต์ 52S04 (NH4) 2MgS04 * 7 H20 1.0K2HP04 0,5KH2P04 1.0CaCl2 * 2H 20 0,2ครึ่งหนึ่งของสื่อที่เตรียมด้วยวิธีนี้ความร้อนอย่างรวดเร็วถึง 80 C และเย็นตัวลงแล้ว สำหรับส่วนเหลือของสื่อ ความร้อนไม่ทำ ครึ่งหนึ่งของแต่ละขวด 5 บำบัดแตกต่างกันมีได้รับการปลูกเชื้อกับ 0,5 ml ของ A. oryzae สปอร์สารแขวนลอยอีกครึ่งหนึ่งของขวดถูกทิ้ง unได้รับการปลูกเชื้อ นอกจากนี้ ทำขวดสองของเหนือกลางอธิบายโดยไม่ต้องเพิ่มฟีโนลิก นี้คือความร้อนใน 80C และได้รับการปลูกเชื้อเป็น cultivations อื่น ๆ Cultivations ทั้งหมดได้รับการกกใน 28 Cและ 160 rpm สั่น 7 วัน จุลินทรีย์เจริญเติบโตถูกตรวจสอบทุกวันด้วย10 กล้องจุลทรรศน์ผลลัพธ์:หลังจากบ่ม 1 วัน พบว่า เชื้อราที่เติบโตในทุกสื่อที่ได้รับการปลูกเชื้อกับสารแขวนลอยสปอร์ ในเบ้าซึ่งไม่ ถือว่าร้อน15 กับสปอร์และไม่มีฟีโนลิกมีคือ โดดเด่นจำนวนแตกต่างกันปนเปื้อนแบคทีเรียและยีสต์ ไม่มีฟีโนลิกที่ประกอบด้วยสื่อถูกปนเปื้อน หลังจาก 2 วันในขวดซึ่ง หรือได้รับการปลูกเชื้อ หรือความร้อน ปลอมปนยีสต์เริ่มจะเติบโต เมื่อสิ้นสุดการ cultivations เชื้อราได้เติบโตในขวดทั้งหมดที่มีได้รับการปลูกเชื้อกับสปอร์ ไม่ใช่20 ที่ปนเปื้อนจุลินทรีย์ที่พบในหมู่พวกเขา ใน unได้รับการปลูกเชื้อ และขวดที่ความร้อนไม่ได้ นอกจากนี้ยังพบ การปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียรายีสต์นอกจากกล่าวถึงก่อนหน้านี้ ขัดกับนี้ เบ้าซึ่งอยู่ไม่ inocula แต่ถูกความร้อนยังคง เติบโตฟรีจนถึงสิ้นสุดการทดลอง25 ตามผลลัพธ์เหล่านี้ ความร้อน 80° C ร่วมกับการเพิ่มขึ้นของสารประกอบฟีโนลิกจะดูเหมือน สามารถเก็บ hemicellulose คะแนน cultivations ปราศจากจุลินทรีย์ปนเปื้อนที่พบมากที่สุด บนมืออื่น ๆ มันต้องสังเกตที่ โดยไม่ฟีโนลิก ปานกลางเจริญเติบโต โดยไม่มีความร้อนเป็นได้ง่าย ๆ ปนเปื้อน เพื่อสุขอนามัยมอง การดำเนินงาน การเพิ่มสารประกอบฟีโนลิกและความร้อนแสงมีความจำเป็นตัวอย่างที่ 5 6 ~ ผลิตน้ำมันจุลินทรีย์บน ประเภทเฮมิเซลลูโลสsugarsทำการทดลองโดยใช้ไลปิดที่ผลิตสายพันธุ์เชื้อรา A.oryzae จากเชื้อรา sporulating ปลูกบนแผ่น PDA สารแขวนลอยสปอร์ที่ทำ โดยการเพิ่ม12 ml ของน้ำผ่านการฆ่าเชื้อและสปอร์ถูกขูดออกกับวงการปลูกเชื้อไปของเหลว 24 ml สารแขวนลอยสปอร์ถูกใช้สำหรับการปลูกเชื้อของ 6 ขวด การองค์ขนาดกลาง 10 จะแสดงในตาราง 10 ขวดได้รับการปลูกเชื้อรับการกกที่ 30 C 160 rpm สั่น 1 วัน และจากนั้น ใช้สำหรับ fermentor การปลูกเชื้อตารางที่ 10: การจัดองค์ประกอบของกลางการปลูกเชื้อ pH ตั้งขนาด 5.5 g/lประเภทเฮมิเซลลูโลสน้ำตาล 40สารสกัดจากยีสต์ 1(NH4) 2S04 1MgS04 * 7 H20 1K2HP04 0,5KH2P04 1CaCl2 * 2H 20 0,215 ออโตไฮโดรไลซิสของเหลวที่ใช้ D (ประกอบด้วยประเภทเฮมิเซลลูโลสน้ำตาลบางส่วนแบบเปเปโอลิโกเมอร์) และประกอบด้วยสารประกอบฟีโนลิกบัญชี 4,2 อิงการวิเคราะห์ ด้วยวิธี Folin• Ciocalteu (คิงทาวน์ 2002) การเพาะปลูกทำใน Biostat B บวก 5 ฉัน fermenter 3 เนี่ยเสียง และในระหว่างที่มันกวนที่ถูกตั้งค่าเป็น 400 รอบต่อนาที ค่า pH เก็บไว้ในแก้ไขขนาด 5.5 กับ 3 M NaOH การเติมอากาศ 1 vvm และอุณหภูมิ 30 c สื่อองค์ประกอบ 20 แสดงในตาราง 11ตารางที่ 11: องค์ประกอบของหมักกลางส่วนความเข้มข้นปานกลาง (Q / ฉัน)Hemicellu losicsuqars 60สารสกัดจากยีสต์ 1 (NH4) 2S04 1MgCI * 6 H20 1.0 K2HP04 0,5KH2P04 1.0CaCl2 * 2H 20 0,2ผลลัพธ์:ในระหว่างการเพาะปลูก ประเภทเฮมิเซลลูโลสสารละลายถูกเพิ่มใน batches ขนาดเล็ก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

20 ตัวอย่างที่ 5 - การควบคุมการปนเปื้อนด้วยความช่วยเหลือของสารประกอบฟีโนลิกและการรักษาความร้อนอย่างรวดเร็ว
การทดลองกระทำโดยใช้ไลปิดการผลิตสายพันธุ์เชื้อรา A.oryzae จากเชื้อรา sporulating ที่ปลูกบน PDA แผ่นสปอร์สารแขวนลอยที่ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่ม
12 มล. น้ำหมันและสปอร์ที่ถูกคัดลอกออกไปพร้อมกับการปลูกเชื้อห่วงไป25 ของเหลว 0.5 มล. ของสปอร์สารแขวนลอยที่ใช้สำหรับขวดแต่ละการปลูกเชื้อ องค์ประกอบกลางจะนำเสนอในตารางที่ 9 ฟีโนลิกที่มีของเหลวจากออโตไฮโดรไลซิส, ออโตไฮโดรไลซิสของเหลว (เฮมิเซลลูโลสสารละลาย) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายในสื่อเป็น3,5 g / l หลังจากนี้ค่า pH ของสื่อที่ถูกปรับ 6.5 ใช้ 3 M NaOH 30 กลางถูกกระจายไปยัง 50 มล. สำหรับกระบวนการออกเป็น 250 มล. ขวด erlenmayer สารสกัดจากยีสต์ที่นี่ได้ถูกใช้เป็นแหล่งข้อมูลสำหรับการปนเปื้อนจุลินทรีย์ปกติ. ตารางที่ 9: การเจริญเติบโตองค์ประกอบกลางg / l กลูโคสฟีโนลิก 40 3,5 ยีสต์สารสกัดจาก 5 (NH4) 2 2S04 MgS04 * 7 H20 1,0 K2HP04 0, 5 KH2P04 1,0 CaCl2 * 2H20 0,2 ครึ่งหนึ่งของสื่อที่จัดทำวิธีนี้อย่างรวดเร็วความร้อนถึง 80 องศาเซลเซียสและจากนั้นเย็นลง สำหรับส่วนที่เหลือของสื่อที่ไม่มีการรักษาความร้อนที่ถูกสร้างขึ้น ครึ่งหนึ่งของแต่ละ5 ขวดถือว่าแตกต่างกันอยู่ได้รับการปลูกเชื้อกับ 0.5 มิลลิลิตร A. oryzae สปอร์สารแขวนลอย. อีกครึ่งหนึ่งของขวดถูกทิ้งสหประชาชาติได้รับการปลูกเชื้อ นอกจากนี้ทั้งสองขวดของกลางดังกล่าวข้างต้นโดยไม่ต้องอธิบายฟีโนลิกนอกจากนี้ถูกสร้างขึ้นมา นี้ได้รับความร้อนใน 80 ซีและได้รับการปลูกเชื้อเป็นปลูกอื่น ๆ เพาะปลูกทั้งหมดถูกบ่มใน 28 C และ 160 รอบต่อนาทีเขย่าเป็นเวลา 7 วัน เจริญเติบโตของจุลินทรีย์ได้รับการตรวจสอบทุกวันกับ10 กล้องจุลทรรศน์. ผล: หลังจาก 1 วันของการบ่มมันถูกตั้งข้อสังเกตว่าเชื้อราเติบโตในทุกสื่อที่เป็นได้รับการปลูกเชื้อกับสปอร์สารแขวนลอย ในขวดที่ไม่ได้รับความร้อน15 พร้อมด้วยสปอร์และจะไม่มีฟีโนลิกมีจำนวนเงินที่โดดเด่นที่แตกต่างกันของแบคทีเรียที่ปนเปื้อนและยีสต์ ไม่มีฟีโนลิกสื่อที่มีปนเปื้อน หลังจากนั้น 2 วันของการบ่มในขวดที่อยู่หรือได้รับการปลูกเชื้อหรือความร้อนได้รับการรักษาการปนเปื้อนยีสต์ได้เริ่มต้นที่จะเติบโต ในตอนท้ายของการปลูกเชื้อราเติบโตได้ดีในขวดทุกคนที่อยู่ได้รับการปลูกเชื้อกับสปอร์ ไม่มี20 จุลินทรีย์ปนเปื้อนที่พบในหมู่พวกเขา ในการยกเลิกได้รับการปลูกเชื้อและขวดที่ไม่ได้รับความร้อนได้รับการตรวจพบการปนเปื้อนยังมีแบคทีเรียยีสต์นอกจากนี้ยังกล่าวถึงก่อนหน้า ตรงกันข้ามกับนี้ขวดที่มีอยู่ไม่มี inocula แต่ถูกความร้อนได้รับการรักษายังคงเจริญเติบโตฟรีจนกว่าจะสิ้นสุดการทดลอง. 25 จากผลลัพธ์เหล่านี้ 80 องศาเซลเซียสการรักษาความร้อนร่วมกับการเพิ่มขึ้นของสารประกอบฟีโนลิกดูเหมือนจะเป็นความสามารถในการ ให้ปลูกเฮมิเซลลูโลสตามฟรีมากที่สุดจุลินทรีย์ปนเปื้อนที่พบบ่อย บนมืออื่น ๆ จะต้องมีการตั้งข้อสังเกตว่าโดยไม่ต้องฟีโนลิกกลางการเจริญเติบโตโดยไม่ต้องรักษาความร้อนจะถูกปนเปื้อนได้อย่างง่ายดายดังนั้นจากจุดสุขอนามัยในมุมมองของการดำเนินงานทั้งการเพิ่มขึ้นของสารประกอบฟีโนลิกและการรักษาความร้อนแสงที่มีความจำเป็น. 5 ตัวอย่างที่ 6 ~ ผลิตน้ำมันของจุลินทรีย์ในประเภทเฮมิเซลลูโลสน้ำตาลการทดลองกระทำโดยใช้ไลปิดการผลิตสายพันธุ์เชื้อรา A.oryzae จากเชื้อรา sporulating ที่ปลูกบน PDA แผ่นสปอร์สารแขวนลอยที่ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่ม12 มล. น้ำหมันและสปอร์ที่ถูกคัดลอกออกไปพร้อมกับการปลูกเชื้อห่วงกับของเหลว 24 มล. ของสปอร์สารแขวนลอยที่ใช้สำหรับการปลูกเชื้อ 6 ขวด องค์ประกอบกลาง 10 จะนำเสนอในตาราง 10 ได้รับการปลูกเชื้อขวดถูกบ่มที่ 30 C 160 รอบต่อนาทีเขย่าเป็นเวลา 1 วันและจากนั้นก็ใช้ถังหมักสำหรับการปลูกเชื้อ. ตารางที่ 10: องค์ประกอบของการปลูกเชื้อกลางชุดค่า pH เพื่อ 5,5 g / l ประเภทเฮมิเซลลูโลสน้ำตาล 40 สกัดจากยีสต์ 1 (NH4) 2S04 1 MgS04 * 7 H20 1 K2HP04 0,5 KH2P04 1 CaCl2 * 2H20 0,2 15 ออโตไฮโดรไลซิสของเหลว D (ที่มีประเภทเฮมิเซลลูโลส น้ำตาลส่วนหนึ่งในเปเปโอลิโกเมอร์รูปแบบ) ถูกนำมาใช้และมี 4,2 g / l สารประกอบฟีโนลิกจากการวิเคราะห์ด้วยวิธี Folin • Ciocalteu (วอเตอร์เฮาส์, 2002) การเพาะปลูกได้ทำใน BioStat B บวกปริมาณ 5 ฉันฉันหมักใน 3 และในระหว่างนั้นกวนถูกกำหนดให้ 400 รอบต่อนาทีมีค่า pH ที่ถูกเก็บไว้ใน5,5 3 M NaOH อากาศเป็น 1 VVM และอุณหภูมิ 30 ซี กลาง20 องค์ประกอบที่จะนำเสนอในตารางที่ 11 ตารางที่ 11: องค์ประกอบของการหมักปานกลางส่วนประกอบเข้มข้นปานกลาง (Q / I) Hemicellu losic suqars 60 สารสกัดจากยีสต์ 1 (NH4) 2S04 1 MgCI * 6 H20 1,0 K2HP04 0,5 KH2P04 1,0 CaCl2 * 2H20 0,2 ผล: ในช่วงการเพาะปลูกที่ประเภทเฮมิเซลลูโลสสารละลายที่ถูกเพิ่มเข้ามาใน batches ขนาดเล็ก