Kefir treatmentThe CTLK and DMK gro

Kefir treatment
The CTLK and DMK groups received Kefir starting on the 5th day
after diabetes induction. Administration was carried out for
8 weeks by gavage, at a dose of 1.8 mL/day. The other groups,
CTL and DM, received water as a control. All animals were placed
in individual metabolic cages for 24 h prior to and after the treatment
protocol, with water and food ad libitum, for urine collection.
After this period, the rats were fasted for 3 h, after which a blood
sample was collected from the retro-orbital plexus while the rats
were under anesthesia. For anesthesia, intramuscular injection of
ketamine chloridrate (67 mg/kg) and xylazine chloridrate (8 mg/
kg) was used. All samples were stored in freezer at 20 C. At
the end of protocol, the animals were killed by CO2, followed by
exsanguination and the removal of the kidneys.
Oral glucose tolerance test (OGTT)
After 8 weeks of Kefir treatment, OGTT was performed in the
animals. After 12 h of fasting, the animals were orally fed a 20%
glucose solution (1 g/kg) and their blood glucose concentrations
were determined at 0, 30, 60 and 120 min intervals using a
glucometer.
Renal function assessment
The plasma and urinary urea concentrations were estimated by
urea kit CE. Creatinine was measured by colorimetric assay
creatinine kit and proteinuria was evaluated by sensiprot kit.
Kidney histology
The kidneys were fixed in 10% formaldehyde, embedded in
paraffin, sectioned at 4 lm thickness and stained with periodic
acid–Schiff reagent (PAS). The histological changes in the stained
sections were assessed by a nephrologist under a light microscope
at 400 magnification. This was carried out under blinded conditions
and for each kidney, 6 randomly selected areas of cortex were
photographed. The area of each renal cortex was digitalized by an
imaging program and a count was made according to changes in
the tubules.
Estimation of oxidative stress and inflammatory parameters
Kidney tissue homogenate
Homogenates of the renal cortex were prepared as previously
described [9]. The homogenates were used for NO, superoxide
anion and LPO assays and the protein content was analyzed by
Bradford assay.
NO measurement
NO was measured to evaluate the magnitude of vascular damage
and oxidative stress of diabetic rats in plasma, urine and renal
cortex. Because NO is extremely unstable, we used a method in
which the stable NO metabolites, nitrite and nitrate, were re-converted
to NO through a reaction with vanadium. The NO that was
generated was quantified by a chemiluminescence method using
the Nitric Oxide Analyzer (Sievers Instruments, Boulder, USA), a
high-sensitive detector of NO in liquid samples (1 pmol) that is
based on the gas-phase chemiluminescent reaction between NO
and ozone [10].
Western blot analysis
The protein expression of endothelial nitric oxide synthase
(eNOS) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) were assessed
in the kidney samples that were individually homogenized with
a Polytron in K-HEPES buffer containing a mixture of protease
inhibitors. After incubation at 4 C for 15 min, the samples were
centrifuged at 2000g. The protein concentrations were quantified
using the Bradford assay method and the 80 lg of protein from
each sample was separated on an 8% polyacrylamide gel and
transferred to a nitrocellulose membrane. Subsequently, the membranes
were probed with a mouse monoclonal eNOS (1:1000) or arabbit polyclonal iNOS (1:200) primary antibody, followed by antimouse
(1:1000) or anti-rabbit (1:5000) secondary antibody,
respectively. The bands were visualized using a chemiluminescence
substrate and analyzed by gel documentation Alience 4.7
Uvitec (Cambridge, Cambs, UK). The relative expression of NOS
proteins in each kidney were normalized using actin antibody
and the values are expressed as a percentage of normal protein
expression.
Superoxide anion
The level of the superoxide anion in the renal cortex was detected
indirectly according to the adapted nitroblue tetrazolium
(NBT) protocol. The optical density (OD) was read in microplate
reader at 560 nm [11].
LPO estimation
The LPO was estimated in terms of MDA by using the TBARS
method. The MDA concentration was calculated using a molar
extinction coefficient of 1.56  105 mol1 cm1 in plasma, urine
and renal cortex [12] at the end of the Kefir treatment.
CRP measurement
To determine the plasmatic CRP, we utilized the turbidimetric
technique [13].
Reagents
Streptozotocin was purchased from Sigma Chemical (St. Louis,
MO, USA). Citric acid was acquired from LabSynth (Sao Paulo, SP,
Brazil) for preparation of the citrate buffer. For the OGTT test, the
Accu-chek advantage II glucometer strips were purchased from
Roche Diagnostics (Mannheim, Baden-Württemberg, Germany)
and glucose D anidra was obtained from LabSynth (Sao Paulo, SP,
Brazil). The Dopalen (ketamine chloridrate) and Anasedan (xylazine
chloridrate) anesthetics were obtained from Sespo (Sao Paulo,
SP, Brazil). The creatinine, urea and proteinuria assay kits were
obtained from Labtest (Lagoa Santa, MG, Brazil). Vanadium was
purchased from Sigma Chemical (St. Louis, MO, USA). Trichloroacetic
was obtained from LabSynth (Sao Paulo, SP, Brazil) and thiobarbituric
acid was purchased from J.T. Baker Chemical (Phillipsburg,
NJ, USA). Nitroblue tetrazolium chloride (NBT) was obtained from
Amresco (Solon, OH, USA). HEPES was purchased from USB
Corporation (Cleveland, OH, USA) and the K-HEPES buffer
contained 200 mM mannitol, 80 mM HEPES and 41 mM KOH, pH
7.5. Protease inhibitors cocktailI was acquired from Millipore
(Billerica, MA, USA). Mouse anti-eNOS was obtained from Abcam
(Cambridge, Cambs, UK), rabbit anti-iNOS and actin were obtained
from Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Dallas, TX, USA). The
enhanced chemiluminescence (ECL) Western blotting analysis
system was obtained from Amersham International, Plc (Little
Chalfont, Bucks, UK).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Kefir รักษากลุ่ม CTLK และ DMK Kefir ที่เริ่มต้นในวัน 5 ที่ได้รับหลังจากการเหนี่ยวนำของโรคเบาหวาน จัดการได้รับการดำเนินการ8 สัปดาห์ โดย gavage ในปริมาณ 1.8 mL/วัน กลุ่มอื่น ๆCTL และ DM ได้รับน้ำเป็นตัวควบคุม สัตว์ทั้งหมดถูกวางในแต่ละกรงที่เผาผลาญใน 24 ชมก่อน และ หลังการรักษาโพรโทคอล น้ำและอาหาร ad libitum เก็บปัสสาวะหลังจากเวลานี้ หนูก็อดสำหรับ 3 h หลังจากที่เลือดตัวอย่างรวบรวมจากข่ายประสาทออร์บิทัลย้อนยุคในขณะที่หนูได้ภายใต้ยาชา สำหรับยา ฉีดบาดทะยักจากchloridrate คีตามีน (67 mg/kg) และ xylazine chloridrate (8 มิลลิกรัม /ใช้กก.) ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บไว้ในตู้แช่ที่ 20 C. ที่จุดสิ้นสุดของโพรโทคอล สัตว์ถูกฆ่าตาย โดย CO2 ตามด้วยexsanguination และการกำจัดของไตทดสอบยอมรับปากกลูโคส (OGTT)หลังจาก 8 สัปดาห์ของการรักษา Kefir ทำ OGTT ในการสัตว์ หลังจาก h 12 ศีล สัตว์มีเนื้อหารับ 20%โซลูชันกลูโคส (1 g/kg) และความเข้มข้นน้ำตาลในเลือดของพวกเขาได้กำหนด 0, 30, 60 และ 120 นาทีในช่วงเวลาที่ใช้เป็นglucometerประเมินฟังก์ชันไตพลาสม่าและความเข้มข้นของยูเรียที่ท่อปัสสาวะได้โดยประมาณยูเรียชุด CE Creatinine ถูกวัด โดยวิเคราะห์เทียบเคียงชุด creatinine และ proteinuria ถูกประเมิน โดยชุด sensiprotมิญชวิทยาโรคไตไตได้ถาวรใน 10% ฟอร์มาลดีไฮด์ ฝังอยู่ในพาราฟิน จัดแบ่งเป็นส่วน ๆ ที่ 4 lm ความหนา และสี ด้วยเป็นครั้งคราวกรด – องท์ชิฟฟ์รีเอเจนต์ (PAS) การเปลี่ยนแปลงสรีรวิทยาในการทิ้งคราบส่วนที่ประเมิน โดย nephrologist ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงที่ขยาย 400 นี้ถูกดำเนินการภายใต้เงื่อนไขที่มองไม่เห็นและสำหรับแต่ละโรคไต cortex 6 สุ่มเลือกพื้นที่ได้ถ่ายภาพ พื้นที่ของแต่ละ cortex ไตเป็นดิจิทัลโดยการโปรแกรมถ่ายภาพและการทำตามการเปลี่ยนแปลงในtubulesการประเมินความเครียด oxidative และพารามิเตอร์การอักเสบHomogenate เนื้อเยื่อไตHomogenates ของ cortex ไตถูกเตรียมไว้เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย [9] Homogenates ที่ใช้สำหรับไม่มี ซูเปอร์ออกไซด์anion และ LPO assays และโปรตีนถูกวิเคราะห์โดยแบรดฟอร์ดทดสอบวัดไม่มีวัดเพื่อประเมินขนาดของความเสียหายของหลอดเลือดและความเครียด oxidative ของหนูเบาหวานในพลาสมา ปัสสาวะ และไตcortex เนื่องจากไม่มีความเสถียรมาก เราใช้วิธีการในซึ่งคอกไม่ metabolites ไนไตรต์และไนเตรต ถูกแปลงกลับไม่ผ่านปฏิกิริยากับวาเนเดียม หมายเลขที่ถูกสร้างถูก quantified โดยใช้วิธี chemiluminescenceวิเคราะห์ไนตริกออกไซด์ (Sievers เครื่องมือ หิน สหรัฐอเมริกา), การเครื่องตรวจจับความสูงของไม่มีในตัวอย่างของเหลว (1 pmol) ที่ตามปฏิกิริยา chemiluminescent เฟสก๊าซระหว่างไม่มีและโอโซน [10]วิเคราะห์ตะวันตกคืนในตาค่าโปรตีนของ synthase ไนตริกออกไซด์ที่บุผนังหลอดเลือด(eNOS) และไนตริกออกไซด์ inducible synthase (iNOS) ได้ประเมินในตัวอย่างของโรคไต ที่ถูกละ homogenized เป็นกลุ่มด้วยฝากระจกโค้งในบัฟเฟอร์ K HEPES ประกอบด้วยส่วนผสมของรติเอสinhibitors หลังจากบ่มที่ 4 C สำหรับ 15 นาที มีตัวอย่างcentrifuged ที่ 2000g ความเข้มข้นโปรตีนถูก quantifiedใช้วิธีวิเคราะห์แบรดฟอร์ดและ lg 80 โปรตีนจากแต่ละตัวอย่างถูกแบ่งในเจล polyacrylamide เป็น 8% และโอนย้ายไปเยื่อ nitrocellulose ในเวลาต่อมา เข้าได้พิสูจน์กับเมาส์ eNOS โมโน (1:1000) หรือ arabbit polyclonal iNOS (1: 200) หลักแอนติบอดี ตาม antimouse(1:1000) หรือ แอนติบอดีรองป้องกันกระต่าย (1:5000)ตามลำดับ วงดนตรีที่มี visualized chemiluminescence ที่ใช้พื้นผิว และวิเคราะห์ โดยเอกสารเจ Alience 4.7Uvitec (เคมบริดจ์ Cambs, UK) ค่าสัมพันธ์ของชุดหมายเลขโปรตีนในไตแต่ละได้ตามปกติโดยใช้แอนติบอดีแอกตินและมีแสดงค่าเป็นเปอร์เซ็นต์ของโปรตีนปกตินิพจน์Anion ซูเปอร์ออกไซด์ตรวจพบระดับของ anion ซูเปอร์ออกไซด์ใน cortex ไตโดยทางอ้อมตาม tetrazolium nitroblue ดัดแปลงโพรโทคอล (เอ็นบีที) ความหนาแน่นออปติคอล (OD) ถูกอ่านใน microplateอ่านที่ 560 nm [11]ประมาณ LPOLPO ถูกประเมินในแง่ของ MDA โดย TBARSวิธีการ ความเข้มข้นของ MDA ถูกคำนวณโดยใช้กรามสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของ 1.56 105 โมล 1 ซ.ม. 1 ในพลาสมา ปัสสาวะและไต cortex [12] เมื่อสิ้นสุดการรักษา Kefirวัด CRPกำหนด plasmatic CRP เราใช้ที่ turbidimetricเทคนิค [13]ReagentsStreptozotocin ได้ซื้อจากซิกเคมี (St. Louisด สหรัฐอเมริกา) กรดซิตริกมาจาก LabSynth (เปา SPบราซิล) สำหรับการเตรียมบัฟเฟอร์ซิเต การทดสอบ OGTT การเชค Accu ประโยชน์ II glucometer แผ่นซื้อจากการวินิจฉัยโรช (มันน์ไฮม์ เทมแบร์กบาเดน เยอรมนี)และกลูโคส D anidra ได้รับจาก LabSynth (เปา SPบราซิล) Dopalen (chloridrate คีตามีน) และ Anasedan (xylazineanesthetics chloridrate) ได้รับจาก Sespo (เปาSP บราซิล) ชุดทดสอบ creatinine ยูเรีย และ proteinuria ได้ได้รับจาก Labtest (ลากัวซาน MG บราซิล) วาเนเดียมมีซื้อจากซิกเคมี (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) Trichloroaceticได้รับจาก LabSynth (เปา SP บราซิล) และ thiobarbituricกรดถูกซื้อจาก J.T. กัรเคมี (PhillipsburgNJ สหรัฐอเมริกา) Nitroblue tetrazolium คลอไรด์ (เอ็นบีที) ได้รับจากAmresco (Solon, OH สหรัฐอเมริกา) HEPES ถูกซื้อจาก USBคอร์ปอเรชั่น (คลีฟแลนด์ OH สหรัฐอเมริกา) และบัฟเฟอร์ K HEPESประกอบด้วย mannitol 200 mM เกาะ 41 มม.และ 80 มม. HEPES ค่า pH7.5. cocktailI inhibitors รติเอสมาจากมาก(Billerica, MA สหรัฐอเมริกา) เมาส์ต่อต้าน eNOS ได้รับจาก Abcam(เคมบริดจ์ Cambs, UK), กระต่ายป้องกัน iNOS และแอกตินได้รับจากซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ Inc. (ดัลลัส TX สหรัฐอเมริกา) ที่พิเศษ chemiluminescence (ECL) ตะวันตก blotting วิธีวิเคราะห์ระบบได้รับจาก Amersham อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด(มหาชน) (น้อยชาร์ฟอร์นเซน Bucks สหราชอาณาจักร)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การรักษา Kefir
กลุ่ม CTLK และ DMK รับ Kefir เริ่มต้นในวันที่ 5
หลังจากที่เหนี่ยวนำโรคเบาหวาน บริหารได้รับการดำเนินการสำหรับ
8 สัปดาห์โดย Gavage, ขนาด 1.8 มิลลิลิตร / วัน กลุ่มอื่น ๆ
CTL และ DM ได้รับน้ำเป็นตัวควบคุม สัตว์ทุกตัวถูกวางไว้
ในกระชังการเผาผลาญของแต่ละบุคคลเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนและหลังการรักษา
โปรโตคอลที่มีน้ำและอาหารเต็มที่โฆษณาสำหรับการเก็บปัสสาวะ.
หลังจากช่วงเวลานี้หนูได้รับการอดอาหารเป็นเวลา 3 ชั่วโมงหลังจากที่เลือด
ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมจาก ช่องท้องย้อนยุควงในขณะที่หนู
อยู่ภายใต้การดมยาสลบ สำหรับการดมยาสลบฉีดเข้ากล้ามเนื้อของ
คีตา chloridrate (67 mg / kg) และ xylazine chloridrate (8 มก. /
กก.) ถูกนำมาใช้ ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็งที่? 20? C ใน
ตอนท้ายของโปรโตคอลสัตว์ที่ถูกฆ่าโดย CO2 ตามด้วย
การเอาและการกำจัดของไต.
การทดสอบความทนทานต่อกลูโคสในช่องปาก (OGTT)
หลังจาก 8 สัปดาห์ของการรักษา Kefir, OGTT ได้รับการดำเนินการใน
สัตว์ หลังจาก 12 ชั่วโมงของการอดอาหาร, สัตว์ที่ถูกเลี้ยงด้วยปากเปล่า 20%
วิธีการแก้ปัญหาน้ำตาลกลูโคส (1 กรัม / กิโลกรัม) และความเข้มข้นของน้ำตาลในเลือดของพวกเขา
ได้รับการพิจารณาที่ 0, 30, 60 และ 120 นาทีช่วงเวลาโดยใช้
Glucometer.
การประเมินการทำงานของไต
พลาสมาและปัสสาวะ ความเข้มข้นของปุ๋ยยูเรียได้รับการประเมินโดย
ชุดยูเรีย CE Creatinine โดยวัดจากการทดสอบสี
ชุด creatinine และโปรตีนได้รับการประเมินโดยชุด sensiprot.
จุลไต
ไตได้รับการแก้ไขในฟอร์มาลดีไฮด์ 10% ที่ฝังอยู่ใน
พาราฟินแบ่งที่ความหนา LM 4 และย้อมด้วยธาตุ
สารกรดชิฟฟ์ (PAS) การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อในการย้อมสี
ส่วนได้รับการประเมินโดยไตวิทยาภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
ที่ 400? การขยายภาพ นี้ได้รับการดำเนินการภายใต้เงื่อนไขที่ตาบอด
และไตแต่ละ 6 พื้นที่สุ่มเลือกของเยื่อหุ้มสมองได้รับการ
ถ่ายภาพ พื้นที่ของแต่ละเยื่อหุ้มสมองไตถูก digitalized โดย
โปรแกรมการถ่ายภาพและการนับที่ถูกสร้างขึ้นตามการเปลี่ยนแปลงใน
ท่อ.
การประเมินความเครียดออกซิเดชันและพารามิเตอร์อักเสบ
homogenate เนื้อเยื่อไต
homogenates ของเยื่อหุ้มสมองไตวายได้จัดทำไว้ก่อนหน้านี้
อธิบาย [9] homogenates ถูกนำมาใช้สำหรับ NO, superoxide
ไอออนและการตรวจ LPO และปริมาณโปรตีนได้รับการวิเคราะห์โดย
การทดสอบ Bradford.
วัด NO
NO วัดเพื่อประเมินขนาดของความเสียหายหลอดเลือด
และความเครียดออกซิเดชันของหนูเบาหวานในพลาสมาปัสสาวะและไต
เยื่อหุ้มสมอง เพราะไม่มีไม่เสถียรมากเราใช้วิธีการ
ที่มีความเสถียรสาร NO, ไนไตรท์และไนเตรทได้อีกแปลง
ที่จะไม่ผ่านการทำปฏิกิริยากับวานาเดียม NO ที่ถูก
สร้างถูกวัดโดยวิธี chemiluminescence ใช้
ไนตริกออกไซด์วิเคราะห์ (Sievers เครื่องดนตรี, โบลเดอ, ประเทศสหรัฐอเมริกา),
เครื่องตรวจจับที่มีความสำคัญสูงของ NO ในตัวอย่างของเหลว (1 pmol) ที่
อยู่บนพื้นฐานของก๊าซเฟสปฏิกิริยา chemiluminescent ระหว่าง NO
และโอโซน [10].
การวิเคราะห์ดวงตะวัน
การแสดงออกของโปรตีนของเทสไนตริกออกไซด์ endothelial
(eNOS) และ inducible เทสไนตริกออกไซด์ (iNOS) ได้รับการประเมิน
ในตัวอย่างไตที่ได้หดหายเป็นรายบุคคลกับ
Polytron ในบัฟเฟอร์ K-HEPES มี ส่วนผสมของโปรติเอส
ยับยั้ง หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสนาน 15 นาทีตัวอย่างถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 2000g ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกวัด
โดยใช้วิธีการทดสอบ Bradford และ 80 LG ของโปรตีนจาก
แต่ละตัวอย่างถูกแยกออกในเจลอะคริเลต 8% และ
โอนไปยังเมมเบรน nitrocellulose ต่อมาเยื่อ
ถูกหยั่งกับโมโนโคลนอลเมาส์ eNOS (1: 1000) หรือ arabbit โพลีอิโนส์ (1: 200) แอนติบอดีหลักตามด้วย antimouse
(1: 1000) หรือต่อต้านกระต่าย (1: 5000) แอนติบอดีรอง
ตามลำดับ วงดนตรีได้รับการมองเห็นโดยใช้ chemiluminescence
พื้นผิวและวิเคราะห์โดยเอกสารเจล Alience 4.7
UVItec (เคมบริดจ์, Cambs สหราชอาณาจักร) การแสดงออกของญาติของ NOS
โปรตีนในแต่ละไตปกติโดยใช้แอนติบอดีโปรตีน
และคุณค่าจะแสดงเป็นร้อยละของโปรตีนปกติ
การแสดงออก.
แอนไอออน Superoxide
ระดับของแอนไอออน superoxide ในเยื่อหุ้มสมองไตได้รับการตรวจพบ
ทางอ้อมตาม nitroblue tetrazolium ดัดแปลง
(NBT ) โปรโตคอล ความหนาแน่นของแสง (OD) ได้อ่านใน microplate
ผู้อ่านที่ 560 นาโนเมตร [11].
การประมาณค่า LPO
LPO เป็นที่คาดกันในแง่ของภาคตะวันออกเฉียงเหนือโดยใช้ TBARS
วิธี ความเข้มข้นของภาคตะวันออกเฉียงเหนือได้รับการคำนวณโดยใช้ฟันกราม
ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียของ 1.56? 105 mol 1 ซม.? 1 ในพลาสมาปัสสาวะ
และไตเยื่อหุ้มสมอง [12] ในตอนท้ายของการรักษา Kefir.
วัด CRP
การตรวจสอบ CRP Plasmatic เราใช้ turbidimetric
เทคนิค [13].
รีเอเจนต์
ใช้ streptozotocin ซื้อมาจาก Sigma เคมี ( เซนต์หลุยส์,
MO, USA) กรดซิตริกก็มาจาก LabSynth (Sao Paulo, SP,
บราซิล) ในการจัดทำบัฟเฟอร์ซิเตรต สำหรับการทดสอบ OGTT,
Accu-Chek ประโยชน์ II แถบ Glucometer ที่ซื้อมาจาก
Roche Diagnostics (Mannheim, Baden-Württemberg, เยอรมนี)
และกลูโคส D anidra ที่ได้รับจาก LabSynth (Sao Paulo, SP,
บราซิล) Dopalen (คีตา chloridrate) และ Anasedan (xylazine
chloridrate) ยาชาที่ได้รับจาก Sespo (Sao Paulo,
SP, ประเทศบราซิล) creatinine, ยูเรียและทดสอบโปรตีนชุดถูก
ที่ได้รับจาก Labtest (กัวซานตา, MG, บราซิล) วานาเดียมที่ถูก
ซื้อมาจาก Sigma เคมี (St. Louis, MO, USA) ไตรคลอโร
ที่ได้รับจาก LabSynth (Sao Paulo, SP, ประเทศบราซิล) และด่างทั้งหมดที่ระเหย
กรดซื้อมาจาก JT เบเกอร์เคมี (ลิฟส์,
นิวเจอร์ซีย์ประเทศสหรัฐอเมริกา) คลอไรด์ tetrazolium nitroblue (NBT) ที่ได้รับจาก
AMRESCO (โซล, OH, USA) HEPES ถูกซื้อจาก USB
คอร์ปอเรชั่น (Cleveland, OH, USA) และบัฟเฟอร์ K-HEPES
มี 200 มิลลิแมนนิทอล, 80 มิลลิ HEPES และ 41 มิลลิเมตรเกาะพีเอช
7.5 น้ำย่อย cocktailI ก็มาจากค
(บิลเลริกา, MA, USA) เมาส์ต่อต้าน eNOS ที่ได้รับจาก Abcam
(เคมบริดจ์, Cambs สหราชอาณาจักร), กระต่ายต่อต้าน iNOS และโปรตีนที่ได้รับ
จากซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพอิงค์ (ดัลลัส, TX, USA)
chemiluminescence ที่เพิ่มขึ้น (ECL) การวิเคราะห์วิธี western blotting
ระบบที่ได้รับจาก Amersham อินเตอร์เนชั่นแนล จำกัด (ลิตเติ้ล
Chalfont, เหรียญสหราชอาณาจักร)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บัวหิมะรักษา ctlk DMK
และกลุ่มได้รับคีเฟอร์จะเริ่มที่ 5 วัน
หลังการโรคเบาหวาน การบริหารข้อมูลสำหรับ
8 สัปดาห์ โดย gavage ที่ dose / วัน 10 ml . กลุ่มอื่น ๆและ
ctl DM , ได้รับน้ำเป็นตัวควบคุม สัตว์ทั้งหมดที่ถูกวางไว้ในแต่ละกรงสลาย
24 ชั่วโมงก่อนและหลังขั้นตอนการรักษา
, ด้วยน้ำและอาหารทั้ง โฆษณา ,สำหรับเก็บปัสสาวะ .
หลังจากระยะเวลานี้ หนูถูกอดอาหาร 3 ชั่วโมงหลังจากที่เลือด
การเก็บตัวอย่างจากย้อนยุคโคจรร่างแหในขณะที่หนู
ภายใต้ยาชา สำหรับยาชาฉีดเคตามีน chloridrate
( 67 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ) และไซลาซีน chloridrate (
8 มก. / กก. ) ใช้ ตัวอย่างทั้งหมดจะถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็งใน  20  C ที่
จบขั้นตอนสัตว์ที่ถูกฆ่าโดย CO2 ตาม
ไหลหมดตัวและการกำจัดของไต
การทดสอบความอดทนกลูโคสในช่องปาก ( วิธี )
8 สัปดาห์ของบัวหิมะรักษา วิธีในการปฏิบัติ
สัตว์ หลังจาก 12 ชั่วโมงของการอดอาหาร , สัตว์เลี้ยงโดยให้สารละลายน้ำตาลกลูโคส 20 %
1 g / kg ) และความเข้มข้นของกลูโคสในเลือด
ถูกกำหนดเป็น 0 , 30 , 60 และ 120 นาทีช่วงเวลาการใช้

glucometer .ฟังก์ชันไตการประเมิน
พลาสมาและปัสสาวะยูเรียความเข้มข้นโดยประมาณ
ยูเรีย Kit CE หรือวัดด้วยวิธี Colorimetric
ครี Kit และมีวิธีการ sensiprot ชุด

ไตไต ซึ่งถูกกำหนดใน 10% ที่ใช้ฝังในพาราฟิน
แบ่งที่ 4 ความหนาและ LM เปื้อนเป็นระยะ
กรด–ชิฟรีเอเจนต์ ( PAS )การเปลี่ยนแปลงที่พบในคราบ
บางส่วนถูกประเมิน โดย nephrologist ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสง
ที่ 400  ขยาย . นี้ดำเนินการภายใต้เงื่อนไขและตาบอด
แต่ละไต พื้นที่ 6 สุ่มของเยื่อหุ้มสมองถูก
ถ่ายภาพ พื้นที่ของแต่ละคอร์ไตเป็น bmp โดย
โปรแกรมการถ่ายภาพและนับได้ตามการเปลี่ยนแปลงใน

) ส่วน .การประมาณค่าพารามิเตอร์ของความเครียดออกซิเดชันและการอักเสบของเนื้อเยื่อไตอน

homogenates ของ สมอง ไต เตรียมเป็นก่อนหน้านี้
อธิบาย [ 9 ] การใช้ homogenates ไม่มีประจุลบและ Superoxide
) LPO และโปรตีนโดยใช้


ไม่เซ็นต์ ตามลำดับ วัดไม่วัดเพื่อประเมินขนาดความเสียหายหลอดเลือด
และความเครียดออกซิเดชันในหนูเบาหวานในพลาสมา ปัสสาวะและไต
สมองส่วนนอก เพราะไม่มีเป็นสิ่งไม่แน่นอน เราใช้วิธีใน
ซึ่งมั่นคงไม่ metabolites ไนไตรต์และไนเตรตเป็นอีกแปลง
ไม่ผ่านปฏิกิริยากับพืช . ไม่มีที่สร้างขึ้นเป็นวัดโดยนโยบายแรงงาน

วิธีที่ใช้วิเคราะห์ไนตริกออกไซด์ ( ซีเวิร์สเครื่องมือ โบลเดอร์ สหรัฐอเมริกา ) ,
เครื่องตรวจจับความไวสูงไม่มีในตัวอย่างของเหลว (  1 pmol ) นั่นคือ
ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาระหว่างแก๊ส chemiluminescent และโอโซนไม่
[ 10 ] .

Western blot การวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีน endothelial nitric oxide synthase
( นอส ) และ inducible nitric oxide synthase ( inos ) มีการประเมิน
ในไตของตัวอย่างที่ เป็นแบบโฮโมกับ
เป็น polytron ใน k-hepes บัฟเฟอร์ที่มีส่วนผสมของโปรติเอส
ตัวยับยั้ง หลังจากบ่มที่ 4  เป็นเวลา 15 นาที ตัวอย่าง (
ระดับที่ 2000g . โปรตีนความเข้มข้นเชิงปริมาณโดยใช้วิธี Bradford assay และ

80 LG โปรตีนจากแต่ละตัวอย่าง แยกเป็น 8 % polyacrylamide gel และ
ย้ายไปเป็นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ต่อมาเยื่อ
ถูกตรวจสอบด้วยโมโนโคลนอล นอส ( 000 ) หรือ arabbit โพลี inos ( 1:200 ) โดยหลัก ตามด้วย antimouse
( 000 ) หรือป้องกันกระต่าย ( 1:5000 ) ระดับแอนติบอดี ,
) วงดนตรี ) การมองเห็นโดยใช้นโยบายแรงงาน
( โดยใช้เจล alience เอกสาร 4.7
uvitec ( เคมบริดจ์ cambs , UK ) การแสดงออกของญาติของ NOS
โปรตีนในแต่ละตับได้รับปกติใช้
แอนติบอดี actin และค่าจะแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของการแสดงออกของโปรตีน Superoxide anion


ปกติ ระดับของ Superoxide anion ในเยื่อหุ้มสมองไตที่ตรวจพบ
ทางอ้อมตามการดัดแปลง nitroblue tetrazolium
( NBT ) โปรโตคอล ความหนาแน่นของแสง ( OD ) เคยอ่านในการอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
ที่ 560 nm [ 11 ] .

LPO ประมาณLPO ถูกประเมินในแง่ของน้ำตาลโดยใช้วิธีปกติ
. ความเข้มข้น ( คำนวณโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ฟันกราม
1.56  105 โมล  1 ซม.  1 ในพลาสมาและปัสสาวะ
, ไตส่วนนอก [ 12 ] ในตอนท้ายของการรักษา kefir

ขาดการวัดเพื่อตรวจสอบค้นหา plasmatic เราใช้เทคนิค turbidimetric
[ 13 ] .

streptozotocin reagents ซื้อมาจาก Sigma เคมี ( เซนต์หลุยส์
โม , USA ) กรดซิตริกได้มาจาก labsynth ( เซา เปาโล , SP ,
บราซิล ) สำหรับการเตรียมการของซิเตรทบัฟเฟอร์ สำหรับวิธีทดสอบ
ACCU Chek glucometer ประโยชน์ 2 แถบ ซื้อมาจาก
โรชวินิจฉัย ( Mannheim , รัฐบาเดิน - เวือร์ทเทมแบร์ก , เยอรมนี )
/ D anidra ได้จาก labsynth ( เซา เปาโล , SP ,
บราซิล ) การ dopalen ( เคตามีน chloridrate ) และ anasedan ( ไซลาซีน
chloridrate ) ยาชาได้จาก sespo ( เซา เปาโล
SP , ประเทศบราซิล ) ส่วนครี ปุ๋ยยูเรีย และมีการทดสอบชุดถูก
ที่ได้จาก labtest ( Lagoa Santa , มิลลิกรัม , บราซิล ) วาเนเดียมเป็น
ซื้อจาก Sigma เคมี ( St . Louis , MO , USA ) ไตรคลอโรอะซิติก
ได้จาก labsynth ( เซา เปาโล , SP , ประเทศบราซิล ) และเท่ากับ
กรดถูกซื้อจากสารเคมี ( phillipsburg
J.T . Baker , NJ , USA )nitroblue tetrazolium คลอไรด์ ( NBT ) ได้จาก
amresco ( โซลอน โอ สหรัฐอเมริกา ) ฮีเปส ถูกซื้อจาก USB
Corporation ( Cleveland , OH , USA ) และ k-hepes บัฟเฟอร์ที่มีแมนนิทอล
200 มม. และ 80 มม. ฮีเปส 41 มม. เกาะอ
7.5 . โปรตีเอสอินฮิบิเตอร์ cocktaili ได้มาจากมิลลิ
( โตเกียว , MA , USA ) เมาส์ anti นอส ได้จาก ABCAM
( เคมบริดจ์ cambs , UK )