Isolation of chromosomal DNAChromos

Isolation of chromosomal DNA
Chromosomal DNA was prepared from an 18 hrsculture at 30°C of BS11 in Trypticase Soy broth (TSB). Cells were harvested after centrifugation at 9,820 g for 3 min and
suspended in 500 l of 50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5mM (TE buffer). After freezing at -80°C and thawing cells at 100°C, each of 5 min for five times, suspension was re–centrifuged at 25,931 g for 10 min. The supernatant was added with 1xvolume of phenol chloroform for DNA extraction. The aqueous upper layer was transferred into fresh tube and
1/10x volume of 3M Na-acetate and absolute ethanol 2xvolume were added and kept at -20°C for 1 h. DNA was precipitated by centrifugation at 25,931 g for 10 min followed by washing with 70% ( v/v) ethanol, and centrifuged at 25,931 g for 10 min. DNA pellet were dried in heat box at 50°C, resuspended in 50  l TE buffer containing 1  l of RNase (10mg/ml), and incubated at 37°C for 1 h. DNA suspension was
kept at -20°C before use.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกโครโมโซมดีเอ็นเอโครโมโซมดีเอ็นเอถูกจัดทำขึ้นจาก 18 hrsculture ที่ 30 ° C ของ BS11 Trypticase ในน้ำซุปถั่วเหลือง (TSB)
เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวหลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 9,820 กรัมเป็นเวลา 3
นาทีและระงับใน500 l 50 มิลลิ Tris-HCl, pH 8.0 5mm (บัฟเฟอร์ TE) หลังจากแช่แข็งที่ -80 องศาเซลเซียสและละลายเซลล์ที่ 100 ° C แต่ละ 5 นาทีสำหรับครั้งที่ห้าระงับเป็นอีกครั้งที่หมุนเหวี่ยงที่ 25,931 กรัมเป็นเวลา 10 นาที สารละลายที่ถูกเพิ่มเข้ามาด้วย 1xvolume คลอโรฟอร์มฟีนอลในการสกัดดีเอ็นเอ ชั้นบนน้ำก็ถูกย้ายลงในหลอดสดและ
1 / 10x ปริมาณของ 3M นาอะซิเตทและเอทานอลที่แน่นอน 2xvolume มีการเพิ่มและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 25,931 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการล้างด้วย 70% (v / v) เอทานอลและหมุนเหวี่ยงที่ 25,931 กรัมเป็นเวลา 10 นาที เม็ดดีเอ็นเอแห้งในกล่องความร้อนที่ 50 องศาเซลเซียส resuspended ใน 50 ลิตรบัฟเฟอร์ TE มี 1 ลิตร RNase (10mg / ml) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ระงับดีเอ็นเอถูกเก็บไว้ที่ -20 ° C ก่อนการใช้งาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกดีเอ็นเอจากโครโมโซมโครโมโซม
เตรียมจาก 18 hrsculture 30 ° C trypticase bs11 ในซุปถั่วเหลือง ( TSB ) เซลล์เก็บหลังการปั่นเหวี่ยงที่ 9820 G 3 นาที
แขวนลอยใน 500 ล. HCl จาก 50 mm pH 8.0 มม. ( TE buffer ) หลังแข็งที่อุณหภูมิ - 80 องศา C และละลายเซลล์ที่ 100 องศา C ละ 5 นาที 5 ครั้ง ถูกระงับอีกครั้ง–ไฟฟ้าที่ 25931 G สำหรับ 10 นาทีและน่าน ได้เพิ่มด้วย 1xvolume ฟีนอลคลอโรฟอร์มในการสกัดดีเอ็นเอ ชั้นบนน้ำถูกย้ายเข้าไปในหลอดสด
1 / 10 เท่าปริมาณของ 3M na อะซิเตท และแน่นอน 2xvolume เอทานอลเพิ่มและเก็บไว้ที่ - 20 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ดีเอ็นเอตกตะกอนโดยการเหวี่ยงแยกที่ 25931 G 10 นาทีตามด้วยซัก 70 % ( v / v ) เอทานอล และไฟฟ้าที่ 25931 กรัม เป็นเวลา 10 นาทีเม็ดดีเอ็นเอแห้งในกล่องความร้อน 50 ° C , resuspended 50  L TE บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 1 ลเลส ( 10 mg / ml ) บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ดีเอ็นเอถูกระงับ
เก็บไว้ที่ - 20 องศา C ก่อนใช้