Sample Processing and Isolation of

Sample Processing and Isolation of CNS
Quarter Milk Samples. Bacteriological culture
of quarter milk samples and bacterial identification
was done in the Milk Control Centre Flanders as recommended
by the National Mastitis Council (1999).
Briefly, 0.01 mL of each quarter milk sample was
spread on a quadrant of a blood-esculin agar plate and
incubated aerobically at 37°C ± 1°C for 36 h ± 12 h.
A quarter was considered culture-positive when growth
of ≥1 colony was detected. A sample was considered
contaminated when 3 or more dissimilar colony types
were observed. Phenotypic differentiation of bacterial
species was done as described by Piepers et al.
(2007). Staphylococci were identified presumptively
based on colony morphology, Gram stain, and positive
catalase test. Staphylococcus aureus was differentiated
from other Staphylococcus spp. based on morphology,
pigmentation, hemolysis, and DNase activity. All non-
Staphylococcus aureus staphylococci were a priori considered
as CNS. For milk samples yielding at least 3
CNS colonies (≥300 cfu/mL), 2 colonies were picked
and transferred to tryptone soy agar (TSA, Oxoid
Ltd., Basingstoke, UK) for further identification. When
more than one type of CNS colony was present, more
colonies were picked. The TSA plates were incubated
at 37°C for 18 h.
Environmental Samples. On the same day of
sample collection, exposed air strips were incubated at
37°C for 24 to 48 h. Of each sawdust sample, 25 g was
weighed and put in a new sterile stomacher bag. Overshoes
were transferred to separate sterile stomacher
bags. To each sawdust sample and overshoe, 225 mL of
brain heart infusion broth (Oxoid Ltd.) + 7.5% NaCl
was added. Sawdust samples were homogenized for 1
min in a stomacher, and overshoes were massaged by
hand for 1 min for equal distribution of the medium.
Samples were then incubated for 20 h ± 4 h at 37°C
for selective enrichment of staphylococci. The next
day, dilution series of the enrichment media were made
in Ringers solution (Oxoid Ltd.), 100 μL of dilutions
10−2 to 10−5 were spread by use of sterile glass beads
(2.5–3.5 mm, VWR International, West Chester, PA)
on MSA plates, which were incubated for 20 h ± 4 h
at 37°C. After incubation, Staphylococcus-like colonies
were picked up from MSA plates and strips and were
streaked onto TSA. Choice of colonies was random but

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การประมวลผลตัวอย่างและการแยกของ CNS
ไตรมาสนมตัวอย่าง
วัฒนธรรมทางแบคทีเรียของแบคทีเรีย ระบุไตรมาสตัวอย่างนม
าในนม ศูนย์ควบคุมความเสี่ยงเป็นแนะนำ
โดยสภาเต้านมแห่งชาติ ( 1999 ) .
แค่ 0.01 มิลลิลิตร ในแต่ละไตรมาส นมตัวอย่าง
กระจายบนส่วนของเลือด esculin agar plate และ
aerobically บ่มที่ 37 ° C ± 1 เมตร C เป็นเวลา 36 ชั่วโมง± 12
hไตรมาสถือว่าวัฒนธรรมเป็นบวกเมื่อการเจริญเติบโตของ≥
1 อาณานิคมถูกตรวจพบ ตัวอย่างถือว่า
ปนเปื้อนเมื่อ 3 ตัวหรือมากกว่าที่แตกต่างกันประเภทอาณานิคม
พบ . ความแตกต่างของเซลล์แบคทีเรีย
ชนิดเสร็จตามที่อธิบายไว้โดย piepers et al .
( 2007 ) และถูกระบุ presumptively
ขึ้นอยู่กับลักษณะของโคโลนี กรัมคราบ และซิลิกา บวก

Staphylococcus aureus คือแตกต่างจากอื่น ๆขึ้นอยู่กับ Staphylococcus spp .

สี รูปร่าง และระดับกิจกรรมตรวจหา ADNase . ไม่ใช่ทั้งหมด -
Staphylococcus aureus และอยู่ระหว่างการพิจารณา
เป็น CNS สำหรับตัวอย่างนมอย่างน้อย 3
CNS อาณานิคมหยุ่น ( ≥ 300 CFU / ml ) 2
อาณานิคมถูกเลือกและโอนไปยังทริพโทนเหลือง ( TSA oxoid
, จำกัด , Basingstoke ,อังกฤษ ) สำหรับการกำหนดเพิ่มเติม เมื่อ
มากกว่าหนึ่งชนิดของ CNS อาณานิคมอยู่ อาณานิคมมากขึ้น
ถูกเลือก TSA แผ่นถูกบ่มที่ 37 ° C
18 H .
สิ่งแวดล้อมตัวอย่าง ในวันเดียวกันของ
ตัวอย่างคอลเลกชัน สัมผัสแถบอากาศอุณหภูมิ
37 ° C สำหรับ 24 ถึง 48 ชั่วโมง ของแต่ละ ขี้เลื่อยตัวอย่าง 25 กรัม
หนักและใส่ในถุงแผงประดับหน้าอกปลอดเชื้อใหม่ overshoes
ถูกแยกถุงแผงประดับหน้าอก
เป็นหมัน แต่ละตัวอย่าง overshoe ขี้เลื่อยและ 225 มล.
ซุปแช่ สมอง หัวใจ ( oxoid จำกัด ) 7.5 % NaCl
ถูกเพิ่มเข้ามา ตัวอย่างถูกบดขี้เลื่อย 1
มินในแผงประดับหน้าอกและ overshoes คือ การนวดโดย
มือ 1 นาทีสำหรับการกระจายเท่าเทียมกันของตัวกลาง
จำนวนแล้วบ่มเป็นเวลา 20 ชั่วโมง± 4 ชั่วโมง 37 ° C
สำหรับการเลือกของกลุ่ม .วันถัดไป
( ชุดเสริมสื่อทำ
ในวงจรอุบาทว์ ( oxoid โซลูชั่น จำกัด ) 100 μล. เจือจาง
10 − 2 10 − 5 ที่ถูกแพร่กระจายโดยการใช้ลูกปัดแก้วเป็นหมัน
( 2.5 - 3.5 มม. , บริษัท Imcopa International , เวสต์เชสเตอร์ , PA )
7 ซึ่งในแผ่น ถูกบ่ม 20 H ± 4 H
ที่ 37 องศา หลังจากบ่ม , Staphylococcus เช่นอาณานิคม
ถูกหยิบขึ้นมาจากแผ่นและแถบและ
7 .ลายบน TSA เป็นแบบสุ่ม แต่ทางเลือกของอาณานิคม