To investigate the polymerisation o

To investigate the polymerisation of myosin heavy chain in surimi gels, the continuous SDS–PAGE system described by Weber and Osborn (1969) was used. Samples were prepared according to Kamath, Lanier, Foegeding, and Hamann (1992). The surimi gel samples were cut into small pieces (0.4 g) and solubilised in 7.5 ml of a buffer made of 2% SDS-8 M urea, 2% b-mercaptoethanol, and 20 mM Tris–HCl (pH 8.0). The samples were heated at 100 C for 2 min and stirred continuously for 24 h at room temperature (25 C). Homogenates were centrifuged at 10,000g (Sorvall, DuPont Co., Newton, CT, USA) at room temperature for 20 min. The protein concentration of supernatants was measured by the
method described by Lowry, Rosebrough, Farr, and Randall (1951), using bovine serum albumin (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) as a standard. Gels were prepared using 3% (w/v) polyacrylamide
and 6 M urea. GelBond PAG film (FMC Bioproducts, Rockland, ME, USA) was used to support the polyacrylamide gel system. Phosphate buffer (0.06 M NaH2PO4, 0.14 M Na2HPO4, 0.002% (w/v) SDS, pH 7.0) was diluted with water (1:2) and used as a running buffer. A constant current of 80 mA was applied. Gels were fixed and stained with 0.125% Coomassie brilliant blue R-250 (Bio-Rad, Richmond, CA, USA), and destained in a solution containing 50% methanol and 10% acetic acid.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการตรวจสอบพอลิเมอของ myosin ห่วงโซ่หนักในเจลซูริมิ, ระบบ SDS-PAGE อย่างต่อเนื่องโดยเวเบอร์และออสบอร์ (1969) ถูกนำมาใช้ ตัวอย่างถูกจัดทำขึ้นตามแมท, ลานิเยร์ Foegeding และ Hamann (1992) เจลซูริมิตัวอย่างที่ถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (0.4 กรัม) และ solubilised ใน 7.5 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ที่ทำจาก 2% SDS-8 M ยูเรีย, 2% B-mercaptoethanol และ 20 มิลลิเมตร Tris-HCl (pH 8.0) กลุ่มตัวอย่างที่ถูกความร้อนที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและขยับอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (? 25? C) homogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g (Sorvall ดูปองท์ Co. , นิวตัน, CT, USA) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที ความเข้มข้นของโปรตีน supernatants วัดโดย
วิธีการอธิบายโดยโลว์รีย์ Rosebrough, ฟาร์และแรนดัล (1951) โดยใช้วัว serum albumin (Sigma Chemical Co. , เซนต์หลุยส์, MO, USA) เป็นมาตรฐาน เจลได้จัดทำขึ้นโดยใช้ 3% (w / v) polyacrylamide
และ 6 M ยูเรีย ภาพยนตร์ GelBond PAG (ไบโอเอฟเอ็ม, ร็อกแลนด์, ME, สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้ในการสนับสนุนระบบเจล polyacrylamide ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.06 M NaH2PO4, 0.14 M Na2HPO4, 0.002% (w / v) SDS พีเอช 7.0) ถูกเจือจางด้วยน้ำ (1: 2) และใช้เป็นบัฟเฟอร์ทำงาน ปัจจุบันคงที่ของ 80 mA ถูกนำมาใช้ เจลได้รับการแก้ไขและย้อมด้วยสี 0.125% Coomassie สีฟ้าสดใส R-250 (ไบโอราดริชมอนด์, CA, USA) และ destained ในการแก้ปัญหาที่มี 50% เมทานอลและ 10% กรดอะซิติก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อศึกษาพอลิเมอไรเซชันของ myosin หนักโซ่ในเจลซูริมิ , SDS - หน้าอย่างต่อเนื่องระบบอธิบายโดยเวเบอร์และออสบอร์น ( 1969 ) ที่ใช้ ตัวอย่างที่เตรียมไว้ตาม kamath ลาเนียร์ foegeding , , , และ มันน์ ( 1992 ) ในเจลซูริมิทำการหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆ ( 0.4 กรัม ) และ solubilised ใน 7.5 ml ของบัฟเฟอร์ที่ทำจาก 2% sds-8 M ยูเรีย b-mercaptoethanol 2 % ,และ 20 มม. โดย– HCl ( pH 8.0 ) จำนวน  อุณหภูมิ 100 C 2 นาทีและกวนตลอด 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (  25  C ) homogenates เป็นระดับที่ 10000g ( sorvall ดูปองท์ จำกัด , นิวตัน , CT , สหรัฐอเมริกา ) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาทีและความเข้มข้นของสารละลายโปรตีน supernatants ถูกวัดโดยวิธีบรรยายโดย rosebrough โลว์รีย์
, , ฟาร์ และ แรนดัลล์ ( 1951 )การใช้อัลบูมิน ( Sigma Chemical Co . , St . Louis , MO , USA ) เป็นมาตรฐาน เจลที่เตรียมโดยใช้ 3 % ( w / v )
6 M ยูเรียและสาร . ภาพยนตร์แบ่ง gelbond ( FMC bioproducts ร็อกแลนด์ , ฉัน , USA ) ถูกใช้เพื่อสนับสนุนระบบเจลอะคริลาไมด์ . ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0.06 เมตร nah2po4 0.14 เมตร na2hpo4 , 0.002 % ( w / v ) t , pH 7.0 ) เจือจางกับน้ำ ( 1 : 2 ) และใช้เป็นใช้บัฟเฟอร์ปัจจุบันคงมา 80 ก็ใช้ เจลได้ถาวร และย้อมด้วยสีฟ้าสดใส 0.125 % เหล่านี้น่าจะเป็น r-250 ( ไบโอ ราด ริชมอนด์ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) และ destained ในสารละลายที่มีเมทานอล 50% และ 10% กรด .