The thermocycling protocol for toxi

The thermocycling protocol for toxin genes included an initial denaturation at 95 °C for 5 min, followed by 30 cycles of denaturation (94 °C for 1 min), annealing (57 °C for 1 min), and extension (72 °C for 1 min), ending with an extension at 72 °C for 7 min. Then 10 μL of the multiplex PCR product was added to a 2% (wt/vol) agarose gel in 1x Tris-acetate-EDTA (TAE) buffer. A 100–10,000 bp ladder was used as a molecular marker. The electrophoresis was run at 100 mV for 1 h and 10 min. The gel was stained for 15 min using ethidium bromide and distained in distilled water for 30 min. The DNA bands were visualized and recorded under UV using a gel documentation system. The expected amplicon band sizes of S. aureus toxin genes are shown in Table 5. At least one PCR amplicon of each positively reported toxin gene was sequenced using the same amplifying primers to ensure the accuracy of the PCR amplification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพรโทคอล thermocycling สำหรับยีนสารพิษรวม denaturation เป็นเริ่มต้นที่ 95 ° C สำหรับ 5 นาที ตามรอบ 30 denaturation (94 องศาเซลเซียสใน 1 นาที), การอบเหนียว (57 องศาเซลเซียสใน 1 นาที), และส่วนขยาย (72 องศาเซลเซียสใน 1 นาที), ลงท้าย ด้วยนามสกุลที่ 72 ° C สำหรับ 7 min แล้ว μL 10 ผลิตภัณฑ์ multiplex PCR ถูกเพิ่มเข้าไปเจ agarose 2% (wt/vol) ใน 1 x บัฟเฟอร์ตรี-acetate-EDTA (เต้) 100 – 10000 bp บันไดถูกใช้เป็นเครื่องหมายโมเลกุล Electrophoresis การรัน 100 mV สำหรับ 1 h 10 นาที เจเป็นสีสำหรับใช้โบรไมด์ ethidium และหยามในน้ำกลั่น 30 นาที 15 นาที แถบดีเอ็นเอมี visualized และบันทึกภายใต้ UV ใช้ระบบเอกสารของเจ ขนาดวง amplicon ที่คาดไว้ของ S. หมอเทศข้างลายพิษจะแสดงในตาราง 5 Amplicon PCR ที่น้อยของแต่ละยีนสารพิษบวกรายงานถูกเรียงลำดับโดยใช้ไพรเมอร์ amplifying ที่เดียวกันเพื่อให้แน่ใจความถูกต้องของขยาย PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอล thermocycling ยีนสารพิษรวมถึงการสูญเสียสภาพธรรมชาติเริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 30 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ (94 ° C เป็นเวลา 1 นาที) หลอม (57 ° C เป็นเวลา 1 นาที) และส่วนขยาย (72 ° C เป็นเวลา 1 นาที) ที่ลงท้ายด้วยนามสกุลที่ 72 ° C เป็นเวลา 7 นาที จากนั้น 10 ไมโครลิตรของผลิตภัณฑ์ PCR multiplex ถูกเพิ่มให้กับ 2% (น้ำหนัก / ปริมาตร) เจล agarose ใน 1x Tris-acetate-EDTA (TAE) บัฟเฟอร์ บันได bp 100-10,000 ถูกใช้เป็นเครื่องหมายโมเลกุล อิเล็กวิ่งที่ 100 mV เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ 10 นาที เจลสีได้นาน 15 นาทีโดยใช้โบรไมด์ ethidium และ distained ในน้ำกลั่นเป็นเวลา 30 นาที แถบดีเอ็นเอถูกมองเห็นและบันทึกไว้ภายใต้แสงยูวีที่ใช้ระบบเอกสารเจล ขนาดวง amplicon ที่คาดหวังของยีนพิษเชื้อ S. aureus ที่แสดงในตารางที่ 5 อย่างน้อยหนึ่ง PCR amplicon สารพิษแต่ละรายงานในเชิงบวกยีนติดใจโดยใช้ไพรเมอร์ขยายเดียวกันเพื่อความถูกต้องของการขยายวิธี PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มีผื่นแดงรับสารพิษยีนรวมเริ่มต้นที่ 95 องศา C ( เป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 30 รอบ ( 94 ° C ( 1 นาที ) , อบ 57 องศา C เป็นเวลา 1 นาที ) และนามสกุล ( 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที ) , ลงท้ายด้วยนามสกุลที่ 72 ° C 7 นาที แล้ว 10 μ l ผลิตภัณฑ์เทคนิค multoplex PCR ถูกเพิ่มเป็น 2 เปอร์เซ็นต์ ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) เจลใน 1X ซึ่ง EDTA ( แท ) อะซิเตทบัฟเฟอร์ 100 – 10000 BP บันไดใช้เป็นเครื่องหมายโมเลกุล วิธีที่ใช้ 100 หาบเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ 10 นาที เจลที่ถูกย้อมสี 15 นาทีใช้ทิเดียมโบรไมด์และ distained น้ำกลั่น 30 นาทีและมีแถบดีเอ็นเอตรวจบันทึกการใช้ระบบเอกสารแบบยูวีเจล ความคาดหวังและวงดนตรีขนาดของ S . aureus สารพิษยีนแสดงดังตารางที่ 5อย่างน้อยหนึ่งของแต่ละรายงานในเชิงบวกและตรวจสารพิษยีนนี้โดยใช้ไพรเมอร์แบบขยายเพื่อให้มั่นใจในความถูกต้องของวิธี PCR แบบ .