Consequently our knowledge
and understanding of phage ecology in AS systems, and their
potential influence on these globally important processes, is
limited.
Traditionally, viruses have been enumerated by culture
based methods (Adams, 1959; Havelaar and Hogeboom, 1983;
Kott, 1966) or by transmission electron microscopy (TEM)
(Torrella and Morita, 1979; Bergh et al., 1989). The former is
selective for host-specific infectious viruses, thus counts only
represent a small fraction of the total population. Whilst the
latter, though providing information on phage shape and size,
is expensive, time consuming and lacks precision (Weinbauer,
2004). Over the past two decades the introduction of highly
sensitive fluorescent nucleic acid-specific dyes (for example
SYBR Green I, DAPI, and YOPRO-1) in combination with epifluorescence
microscopy (EFM) has significantly improved the
detection and quantification of viruses in aquatic ecosystems
(Brussaard, 2004; Brussaard et al., 2010). EFM is considerably
quicker, incurs lower costs and thus allows for a greater
throughput of samples compared with TEM. With the introduction
of flow cytometric detection and enumeration of free
viruses, again in combination with sensitive nucleic acidspecific
dyes, the sensitivity of detection, accuracy and precision
of quantification and the speed of analysis has further
improved. Consequently flow cytometry (FCM) has become
the method of choice for quantifying viruses in aquatic samples
(Brussaard et al., 2010). Despite this, virus abundance in
AS has only been determined using TEM or EFM and not FCM,
though the literature in this area is still modest (Ewert and
Paynter, 1980; Otawa et al., 2007; Wu and Liu, 2009).
The aim of this paper is to critically describe a rapid FCM
protocol to enumerate planktonic and floc-associated extracellular
viruses in AS, to evaluate the protocol against that of
Brussaard et al. (2010) and a TEM based approach, and to
present virus abundance data from 25 AS plants.
ดังนั้นความรู้ของเรา
และความเข้าใจของระบบนิเวศทำลายจุลินทรีย์ในระบบ AS, ของพวกเขาและ
อิทธิพลที่มีศักยภาพในกระบวนการที่สำคัญทั่วโลกเหล่านี้เป็น
Limited.
ตามเนื้อผ้าไวรัสได้รับการแจกแจงจากวัฒนธรรม
วิธีการตาม (อดัมส์ 1959; Havelaar และ Hogeboom 1983;
Kott, 1966) หรือกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (TEM)
(Torrella และโมริตะ 1979. เบิร์ก, et al, 1989) อดีตคือ
การคัดเลือกเพื่อหาไวรัสติดเชื้อเฉพาะสำหรับโฮสต์จึงจะนับเฉพาะ
แทนส่วนเล็ก ๆ ของประชากรทั้งหมด ขณะที่
หลัง แต่ให้ข้อมูลเกี่ยวกับรูปร่างทำลายจุลินทรีย์และขนาด
ที่มีราคาแพงใช้เวลานานและขาดความแม่นยำ (Weinbauer,
2004) กว่าสองทศวรรษที่ผ่านการแนะนำของสูง
สีย้อมกรดเฉพาะนิวคลีอิกเรืองแสงที่สำคัญ (เช่น
SYBR สีเขียวผม DAPI และ YOPRO-1) ร่วมกับ epifluorescence
กล้องจุลทรรศน์ (EFM) ได้ปรับตัวดีขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ
การตรวจสอบและการหาปริมาณของไวรัสในระบบนิเวศทางน้ำ
(Brussaard 2004. Brussaard et al, 2010) EFM เป็นอย่างมาก
เร็วลดค่าใช้จ่ายที่เกิดขึ้นจึงช่วยให้มากขึ้น
ผ่านตัวอย่างเทียบกับ TEM ด้วยการแนะนำ
ของการตรวจสอบการไหลของ cytometric และการแจงนับฟรี
ไวรัสอีกครั้งในการรวมกันกับ acidspecific นิวคลีอิกที่ไวต่อ
สี, ความไวของการตรวจสอบความถูกต้องและความแม่นยำ
ของปริมาณและความเร็วของการวิเคราะห์ได้ต่อไป
ปรับปรุงให้ดีขึ้น ดังนั้น flow cytometry (FCM) ได้กลายเป็น
วิธีการของทางเลือกสำหรับปริมาณไวรัสในตัวอย่างน้ำ
(Brussaard et al., 2010) อย่างไรก็ตามเรื่องนี้อุดมสมบูรณ์ไวรัส
ตามที่ได้รับเพียงการพิจารณาโดยใช้ TEM หรือ EFM และไม่ FCM,
แม้ว่าวรรณกรรมในบริเวณนี้ยังคงเป็นที่เจียมเนื้อเจียมตัว (Ewert และ
. Paynter 1980; Otawa et al, 2007;. วูและหลิว 2009)
จุดมุ่งหมายของการวิจัยนี้คือการอธิบายวิกฤต FCM อย่างรวดเร็ว
โปรโตคอลการระบุ planktonic และลอยตัวที่เกี่ยวข้อง extracellular
ไวรัสใน As การประเมินโปรโตคอลกับที่ของ
Brussaard et al, (2010) และ TEM ตามวิธีการและ
นำเสนอข้อมูลความอุดมสมบูรณ์ไวรัสจาก 25 เป็นไม้
การแปล กรุณารอสักครู่..
ดังนั้นความรู้ของเราและความเข้าใจในระบบนิเวศ Phage เป็นระบบ และความอิทธิพลที่อาจเกิดขึ้นในกระบวนการทั่วโลกที่สำคัญเหล่านี้จำกัดแต่เดิมไวรัสได้รับการระบุโดยวัฒนธรรมโดยวิธี ( อดัมส์ , 1959 ; havelaar และ hogeboom , 1983 ;หิน , 1966 ) หรือโดยการส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( TEM )( torrella และ โมริตะ , 1979 ; เบิร์ก et al . , 1989 ) อดีตคือเลือกโฮสต์เฉพาะโรคติดเชื้อไวรัสจึงนับได้เพียงเป็นตัวแทนของส่วนเล็ก ๆของประชากรทั้งหมด ขณะที่หลัง แต่ให้ข้อมูลว่ารูปร่างและขนาดแพง ใช้เวลานานและขาดความแม่นยำ ( weinbauer ,2004 ) ที่ผ่านมาสองทศวรรษที่ผ่านมาเบื้องต้นสูงมีเฉพาะสีเรืองแสงกรดนิวคลีอิก ( ตัวอย่างเช่นสีเขียว SYBR ผม dapi และ yopro-1 ) ร่วมกับ epifluorescenceกล้องจุลทรรศน์ ( EFM ) ได้มีการปรับปรุงการตรวจหาปริมาณไวรัสในสัตว์น้ำ และระบบนิเวศ( brussaard , 2004 ; brussaard et al . , 2010 ) EFM เป็นอย่างมากเกิดเร็วขึ้น ลดต้นทุน และดังนั้นจึงช่วยให้มากขึ้นthroughput ตัวอย่างเปรียบเทียบกับแบบ . ด้วยการแนะนำเพื่อการตรวจสอบและการไหลของฟรีไวรัสอีกครั้งในการรวมกันกับตัว acidspecific อ่อนไหวสี , ความไวในการตรวจสอบ ความถูกต้องของปริมาณและความเร็วของการวิเคราะห์ได้ต่อไปปรับปรุง ดังนั้นการไหล ( ( FCM ) ได้กลายเป็นวิธีการเลือกสำหรับปริมาณไวรัสในตัวอย่างน้ำ( brussaard et al . , 2010 ) แม้จะมีไวรัสมากมายในนี้ที่ได้รับการพิจารณาและไม่เต็มหรือ FCM EFM ,แม้ว่าวรรณกรรมในพื้นที่นี้ยังคงเจียมเนื้อเจียมตัว ( ยูเอิร์ต และเพนเตอร์ , 1980 ; โอตาวะ et al . , 2007 ; Wu และหลิว , 2009 )วัตถุประสงค์ของบทความนี้คือการอธิบาย FCM วิกฤตอย่างรวดเร็วและพิธีสารเพื่อแจกแจงฟล็อคเกี่ยวข้องและสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำไวรัสในการ ประเมินโครงการต่อต้านว่าbrussaard et al . ( 2010 ) และวิธีการตามแบบ และปัจจุบันไวรัสข้อมูลมากมายจาก 25 เป็นพืช
การแปล กรุณารอสักครู่..