Optimisation of chromatographic con

Optimisation of chromatographic conditions
3.1.1. HPLC/DAD
The selection of the chromatographic conditions was guided by
the need to obtain chromatograms with the best resolution of adjacent
peaks in a short time of analysis. In the current study, different
detection wavelengths (k = 232, 246, 258 and 275 nm) were used
to monitor all compounds simultaneously in a single run to provide
sufficient sensitivity for each analyte. The compounds in the
samples were identified by comparing both retention times and
UV spectra with those of the authentic standards. In focusing on
the analysis of iridoids (loganic acid), secoiridoids (swertiamarin,
sweroside, gentiopicroside, amarogentin) and xanthones (isogentisin)
in G. lutea, we encountered difficulties caused by the wide
polarity range of the analytes of interest by the very close structural
resemblance among some of the compounds (Fig. 1). After
trying different organic solvents such as methanol and acetonitrile,
with aqueous formic acid solution, it was found that the mixture of
aqueous formic acid solution (99.9–0.1%) and acetonitrile was an
ideal mobile phase for the analysis and separation (see chromatogram
Fig. 2A). An aqueous acetic acid solution (99.9–0.1%) and
ammonium formate buffer with acetonitrile also showed good
results, though not as good as those yielded by the aqueous formic
acid solution (99.9–0.1%). We studied the effect of column temperature,
examining room temperature, 30, 15 and 11 C, and found
that at room temperature and 30 C, the peaks of sweroside and
gentiopicroside were totally coeluted; at 15 C, the column demonstrated
a partial coelution of the same two peaks, but when the column
temperature was kept at 11 C, all peaks were well separated.
The flow rates of 0.5, 0.6 and 0.7 ml/min were tested, with the flow
rate of 0.6 ml/min showing the best separation. Moreover, considering
the different and wide degrees of polarity of the 6 standards,
gradient elution was used to achieve better separation. Under the
optimum gradient conditions (0–7 min, 20% B; 7–15 min, 20–90%
B; 15–18 min, 90% B; 18–25 min, 90–20% B), the baseline separation
of the peaks of these 6 compounds was achieved. Other gradient
conditions caused poor separation of some peaks, especially
sweroside and gentiopicroside, or extended the run time.
3.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คุณภาพเงื่อนไข chromatographic3.1.1 การ HPLC/พ่อเลือกเงื่อนไข chromatographic ถูกแนะนำโดยจำเป็นต้องได้รับ chromatograms กับความละเอียดสุดของติดยอดเขาในช่วงเวลาสั้น ๆ ของการวิเคราะห์ ในการศึกษาปัจจุบัน แตกต่างกันตรวจหาความยาวคลื่น (k = 232, 246, 258 และ 275 nm) ใช้การตรวจสอบสารประกอบทั้งหมดพร้อมกันในเครื่องครั้งเดียวให้ความไวที่เพียงพอสำหรับแต่ละ analyte สารในการระบุตัวอย่าง โดยการเปรียบเทียบทั้งสองครั้งเก็บรักษา และUV ที่แรมสเป็คตรากับมาตรฐานอาหาร ในการเน้นการวิเคราะห์ของ iridoids (กรด loganic), secoiridoids (swertiamarinsweroside, gentiopicroside, amarogentin) และสารแซนโธนส์ (isogentisin)กรัม lutea เราพบปัญหาที่สาเหตุกว้างช่วงขั้วของ analytes น่าสนใจด้วยโครงสร้างดีมากรูปของสารประกอบ (Fig. 1) หลังจากพยายามที่แตกต่างกันหรือสารทำละลายอินทรีย์เช่นเมทานอลและ acetonitrileด้วยโซลูชั่นกรดอควี มันถูกพบว่ามีส่วนผสมของกรดฟอร์มิกอควีโซลูชัน (99.9 – 0.1%) และ acetonitrile เป็นระยะเคลื่อนที่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์และแยก (ดู chromatogramFig. 2A) แก้ปัญหากรดอะซิติกอควี (99.9 – 0.1%) และแอมโมเนียรูปแบบเอกสารบัฟเฟอร์ ด้วย acetonitrile ยังแสดงให้เห็นว่าดีผล ว่าไม่ดีเป็นผู้หา โดยอควี formicกรดโซลูชัน (99.9 – 0.1%) เราศึกษาผลของอุณหภูมิของคอลัมน์ตรวจสอบอุณหภูมิ 15, 30 และ 11 C ห้อง และพบที่อุณหภูมิห้องและ C 30 แห่ง sweroside และทั้งหมดถูก coeluted gentiopicroside ที่ 15 C คอลัมน์ที่แสดงcoelution บางส่วนของยอดสองเดียว แต่เมื่อคอลัมน์อุณหภูมิเก็บไว้ที่ 11 C ยอดเขาทั้งหมดถูกคั่นด้วยอัตราการไหล 0.5, 0.6 และ 0.7 ml/min ทดสอบ กับการไหลอัตรา 0.6 ml/min แสดงแยกสุด ยิ่งไปกว่านั้น พิจารณาองศาแตกต่าง และหลากหลายของขั้วมาตรฐาน 6ใช้ elution ไล่โทนสีเพื่อแยกดีกว่า ภายใต้การเงื่อนไขไล่ระดับ (0 – 7 นาที 20% B ต่ำสุด 7-15, 20-90%B 15 – 18 นาที 90% B ต่ำสุด 18-25, 20-90% B), แยกหลักของสารประกอบเหล่านี้ 6 แห่งสำเร็จ การไล่ระดับสีอื่น ๆเงื่อนไขที่เกิดจากการแบ่งแยกดียอดบาง โดยเฉพาะsweroside และ gentiopicroside หรือขยายเวลาทำงาน3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไขโครมา
3.1.1 HPLC / DAD
เลือกเงื่อนไขโครมาได้รับการแนะนำโดยจำเป็นที่จะต้องได้รับ chromatograms ที่มีความละเอียดที่ดีที่สุดของที่อยู่ติดกันยอดเขาในช่วงเวลาสั้นๆ ของการวิเคราะห์ ในการศึกษาในปัจจุบันที่แตกต่างกันความยาวคลื่นการตรวจสอบ (k = 232, 246, 258 และ 275 นาโนเมตร) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบสารทั้งหมดพร้อมกันในการทำงานครั้งเดียวที่จะให้ความไวเพียงพอสำหรับแต่ละวิเคราะห์ สารประกอบในที่ตัวอย่างที่ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบทั้งสองครั้งการเก็บรักษาและสเปกตรัมรังสียูวีกับบรรดาของมาตรฐานที่แท้จริง ในการมุ่งเน้นการวิเคราะห์ iridoids นี้ (กรด loganic) secoiridoids (swertiamarin, sweroside, gentiopicroside, amarogentin) และแซนโทน (isogentisin) ในจี lutea เราพบปัญหาที่เกิดจากความกว้างช่วงขั้วของวิเคราะห์ที่น่าสนใจโดยใกล้ชิดโครงสร้างคล้ายคลึงในบางส่วนของสาร (รูปที่ 1). หลังจากที่พยายามทำละลายอินทรีย์ที่แตกต่างกันเช่นเมทานอลและ acetonitrile, กับสารละลายกรดฟอร์มิน้ำก็พบว่ามีส่วนผสมของสารละลายกรดฟอร์มิน้ำ (99.9-0.1%) และ acetonitrile เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์และการแยก(ดู chromatogram รูป . 2A) วิธีการแก้ปัญหาน้ำกรดอะซิติก (99.9-0.1%) และบัฟเฟอร์รูปแบบที่มีแอมโมเนียมacetonitrile ยังแสดงให้เห็นดีผลแม้ว่าจะไม่ดีเท่าที่ให้ผลโดยฟอร์มิน้ำสารละลายกรด(99.9-0.1%) เราศึกษาผลของอุณหภูมิคอลัมน์ตรวจสอบอุณหภูมิห้อง, 30, 15 และ 11 องศาเซลเซียสและพบว่าที่อุณหภูมิห้องและ30 องศาเซลเซียสยอดของ sweroside และgentiopicroside เป็น coeluted ทั้งหมด; วันที่ 15 C คอลัมน์แสดงให้เห็นถึงcoelution บางส่วนของที่เหมือนกันสองยอด แต่เมื่อคอลัมน์อุณหภูมิถูกเก็บไว้ที่11 องศาเซลเซียสยอดเขาทั้งหมดถูกแยกกัน. อัตราการไหลของ 0.5, 0.6 และ 0.7 มล. / นาทีได้มีการทดสอบกับ ไหลอัตรา0.6 มล. / นาทีแสดงให้เห็นถึงการแยกที่ดีที่สุด นอกจากนี้เมื่อพิจารณาองศาที่แตกต่างและหลากหลายของขั้วของ 6 มาตรฐานชะลาดถูกนำมาใช้เพื่อให้เกิดการแยกที่ดีกว่า ภายใต้เงื่อนไขการไล่ระดับสีที่เหมาะสม (0-7 นาที, 20% B; 7-15 นาที, 20-90% B; 15-18 นาที, 90% B; 18-25 นาที, 90-20% B), แยกพื้นฐานของยอดเขาเหล่านี้ 6 สารประกอบก็ประสบความสำเร็จ การไล่ระดับสีอื่น ๆเงื่อนไขที่เกิดการแยกที่ดีของยอดเขาโดยเฉพาะอย่างยิ่งsweroside และ gentiopicroside หรือขยายเวลาทำงาน. 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพิ่มประสิทธิภาพของภาพ
3.1.1 ทางโครมาโทกราฟี HPLC / พ่อ
เลือกเงื่อนไข และถูกแนะนำโดย
ต้องได้รับกลิ่นที่ดีที่สุดที่มีความละเอียดของยอดติดกัน
ในช่วงเวลาสั้น ๆของการวิเคราะห์ ในการศึกษาปัจจุบัน ที่สามารถตรวจจับที่แตกต่างกัน
( K = 232 , 246 และ 258 , 275 nm ) ใช้
ตรวจสอบสารประกอบทั้งหมดพร้อมกันในระยะเดียวให้
ความไวเพียงพอสำหรับแต่ละครู . สารประกอบใน
ระบุเปรียบเทียบทั้งจำนวนและเวลากัก
UV ที่สเปกตรัมมาตรฐานของแท้ ในการมุ่งเน้นไปที่การวิเคราะห์ของ iridoids
( loganic acid ) , secoiridoids ( swertiamarin sweroside gentiopicroside amarogentin
, , , ) และแซนโธน ( isogentisin )
ในกรัม lutea เราพบปัญหาที่เกิดจากกว้าง
ช่วงที่ขั้วของสารที่น่าสนใจ โดยปิดมากโครงสร้าง
ความคล้ายคลึงระหว่างบางสารประกอบ ( รูปที่ 1 ) หลังจาก
พยายามตัวทำละลายอินทรีย์ต่าง ๆเช่น เมทานอลและไน
กับสารละลาย กรดฟอร์มิค โซลูชั่น พบว่า สารละลายผสมของกรดฟอร์มิค
โซลูชั่น ( 99.9 ( 0.1% ) และไนเป็น
เฟสเคลื่อนที่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์และการแยก ( ดู chromatogram
รูปที่ 2A ) โซลูชั่นที่เป็นกรดน้ำ ( 99.9 ( 0.1% ) และแอมโมเนียกับไน
รูปแบบบัฟเฟอร์ยังให้ผลดี
, แม้ว่าจะไม่ดีเท่านั้น ) ด้วยสารละลายกรดฟอร์มิก
( 99.9 ( 0.1% ) การศึกษาครั้งนี้ มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลของอุณหภูมิคอลัมน์
ตรวจสอบอุณหภูมิ ห้อง 30 , 15 และ 11 พบ
Cที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส และยอดของ sweroside
gentiopicroside สมบูรณ์ coeluted ; 15 C , คอลัมน์ แสดง : coelution บางส่วนของเดียวกันสองยอด แต่เมื่อคอลัมน์
อุณหภูมิถูกเก็บไว้ที่ 11 C ทั้งหมดยอดถูกแยกกัน .
อัตราการไหล 0.5 , 0.6 และ 0.7 มิลลิลิตร / นาที ทดสอบกับการไหล
อัตรา 0.6 มิลลิลิตรต่อนาที แสดงการแยกที่ดีที่สุด นอกจากนี้ การพิจารณา
แตกต่างกัน และองศาที่กว้างของขั้วของ 6 มาตรฐาน
ลาดได้มาใช้เพื่อให้บรรลุแยก ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสมในการไล่ระดับสี ( 0 )
7 นาที 20 % b ; 7 – 15 นาทีที่ 20 – 90 %
b ; 15 – 18 นาที 90 % B ; 18 – 25 นาที 90 – 20 % B )
( แยกของยอด 6 สารเหล่านี้พบว่า เงื่อนไขการแยก
อื่นๆที่เกิดยากจนบางยอด โดยเฉพาะอย่างยิ่ง
และ sweroside gentiopicroside หรือขยายเวลาหนี
3