Actin polymerization propels endoso

Actin polymerization propels endosomes
The observation that F-actin patches were present at
the tips of root hairs and displayed similar motility
characteristics as endosomes labeled with GFP-FYVE
and Ara6/RabF2a reporter constructs suggested that
perhaps the dynamics of these compartments was
intimately linked to the actin cytoskeleton. To identify
the driving forces behind the motility of these plant
endosomes, we performed time-lapse confocal imaging
of root hair tips. Asingle focal plane in the middle of the
tip was monitored for 70 s. Our observations revealed
that the motile behavior of endosomes was highly
variable (Fig. 6). In some rare cases endosomes were
nearly stationary, displaying restricted motility of only a
few micrometers forwards and backwards (Fig. 6f, red).
Alternatively, stationary compartments suddenly initiated movements and dashed away at high speed. Other
GFP-FYVE-labeled endosomes displayed slow and
directional movements (Fig. 6f and 2), while yet
others showed sustained, rapid motility (Fig. 6f and l;
Movie 3).
In order to ascertain which cytoskeletal elements and
processes underlay these endosomal movements, effects
of several drugs on endosomal motility were tested. In
the untreated root hair tips, the majority of endosomes
changed their position within 14–28 s (Fig. 7a–c).
Measurements and subsequent statistical analysis of
the movements revealed an average speed of 0.54mm/s
(0.21mm/s SE) for the GFP-FYVE-labeled endosomes
(Table 1). During the time of observation, they spent up
to 40% of this period as stationary organelles, the
duration of resting time was in the range of 1–4 s.
Upon application of 10 mM 2,3-butanedione monoxime (BDM), a general myosin ATPase inhibitor (Sˇ
amaj
et al., 2000), GFP-FYVE-labeled endosomes continued
to display subcellular movements within the ‘clear zone’,
even if we extended the treatment for up to 1 h (Fig.
7d–f; Movie 12). Nevertheless, the characteristics of
endosome motility were altered in the presence of BDM
(Table 1). In particular, the resting times changed
dramatically, as the BDM-treated FYVE-labeled endosomes spent less than 10% of the observed time in a
stationary phase as compared to 40% in control
conditions. Application of latrunculin B (LatB), an
efficient F-actin-depolymerizing agent (for plant cells,
seeGibbon et al., 1999; Balusˇka et al., 2001),.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Polymerization แอกติน propels endosomesสังเกตที่อยู่ในโปรแกรมแอกติน Fเคล็ดลับเส้นขนรากและ motility แสดงคล้ายคลึงกันลักษณะเป็นป้าย มี GFP FYVE endosomesและโครงสร้างโปรแกรมรายงาน Ara6/RabF2a แนะนำที่บางทีของช่องเหล่านี้ได้จึงเชื่อมโยงกับ cytoskeleton แอกติน เมื่อต้องการระบุกองกำลังขับหลัง motility ของพืชเหล่านี้endosomes เราทำภาพ confocal การหน่วงเวลาของรากผมเคล็ดลับ Asingle ระนาบโฟกัสในการมีการตรวจสอบคำแนะนำสำหรับ 70 s ข้อสังเกตของเราเปิดเผยว่า พฤติกรรม motile endosomes ถูกมากตัวแปร (Fig. 6) ในบางกรณียาก ได้ endosomesเครื่องเขียนเกือบ แสดงจำกัด motility ของเฉพาะตัวคัลไมโครมิเตอร์แบบไม่กี่ข้างหน้า และย้อนกลับ (Fig. 6f สีแดง)หรือ ช่องเครื่องเขียนก็เริ่มเคลื่อนไหว และเส้นประไปที่ความเร็วสูง อื่น ๆEndosomes GFP-FYVE-ป้ายแสดงช้า และทิศทางการเคลื่อนไหว (Fig. 6f และ 2), ในขณะที่ยังอื่น ๆ แสดงให้เห็นอย่างรวดเร็ว sustained motility (Fig. 6f และ lภาพยนตร์ 3)การตรวจองค์ประกอบที่ cytoskeletal และกระบวนการ endosomal เคลื่อนไหว ผล underlayยาเสพติดหลายบน endosomal motility ถูกทดสอบ ในเคล็ดลับไม่ถูกรักษารากผม ส่วนใหญ่ของ endosomesเปลี่ยนตำแหน่งของพวกเขาภายใน 14-28 s (Fig. 7a – c)วัดและวิเคราะห์ทางสถิติต่อไปความเคลื่อนไหวเปิดเผยเป็นความเร็วเฉลี่ย 0.54 mm/s(0.21 mm/s SE) สำหรับ endosomes GFP FYVE มีป้ายชื่อว่า(ตาราง 1) ในช่วงเวลาเก็บข้อมูล จะใช้ค่า40% ของรอบระยะเวลานี้เป็น organelles เครื่องเขียน การมีระยะเวลาพักในช่วง 1 – 4 sเมื่อโปรแกรมประยุกต์ของ 10 มม. 2,3 butanedione monoxime (BDM), สารยับยั้ง ATPase ทั่วไปไมโอซิน (Sˇamajและ al., 2000), GFP FYVE มีป้ายชื่อว่า endosomes อย่างต่อเนื่องแสดงความเคลื่อนไหวของ subcellular ภายใน 'ชัดเจนโซน'ถ้าเราขยายการรักษาใน 1 h (ฟิก7d-f ภาพยนตร์ 12) อย่างไรก็ตาม ลักษณะของเอนโดโซม motility ถูกเปลี่ยนแปลงไปในต่อหน้าของ BDM(ตาราง 1) โดยเฉพาะ การเปลี่ยนแปลงเวลาพักผ่อนอย่างมาก เป็นการรักษา BDM ป้าย FYVE endosomes ใช้เวลาน้อยกว่า 10% ของเวลาสังเกตการระยะเครื่องเขียนเมื่อเทียบกับ 40% ในการควบคุมเงื่อนไขการ โปรแกรมประยุกต์ latrunculin B (LatB), การมีประสิทธิภาพ F-แอกติน-depolymerizing ตัวแทน (เซลล์พืชseeGibbon et al., 1999 Balusˇka และ al., 2001),

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พอลิเมอโปรตีนขับเคลื่อน endosomes
สังเกตว่าแพทช์ F-โปรตีนอยู่ในปัจจุบันที่
เคล็ดลับของรากขนและแสดงการเคลื่อนที่คล้าย
ลักษณะเป็น endosomes กำกับด้วย GFP-FYVE
และ Ara6 / RabF2a สร้างนักข่าวบอกว่า
บางทีการเปลี่ยนแปลงของช่องเหล่านี้ได้รับการ
เชื่อมโยงอย่างใกล้ชิดกับ โครงร่างโปรตีน เพื่อระบุ
แรงผลักดันที่อยู่เบื้องหลังการเคลื่อนไหวของพืชเหล่านี้
endosomes เราดำเนินการตามเวลาที่ถ่ายภาพ confocal
ของเคล็ดลับรากผม asingle ระนาบโฟกัสอยู่ตรงกลางของ
ปลายได้รับการตรวจสอบสำหรับ 70 S ข้อสังเกตของเราเปิดเผย
ว่าพฤติกรรมเคลื่อนที่ของเอ็นโดโซมเป็นอย่างมาก
ตัวแปร (รูปที่. 6) ในบางกรณีที่หายาก endosomes อยู่
นิ่งเกือบ, การแสดงการเคลื่อนที่ จำกัด เพียง
ไม่กี่ไมโครเมตรไปข้างหน้าและข้างหลัง (รูปที่. 6, สีแดง).
อีกทางเลือกหนึ่งช่องนิ่งเคลื่อนไหวริเริ่มฉับพลันและประออกไปด้วยความเร็วสูง อื่น ๆ
endosomes GFP-FYVE ป้ายแสดงช้าและ
ทิศทางการเคลื่อนไหว (รูปที่ 6 และ 2.) ในขณะที่ยัง
คนอื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นอย่างต่อเนื่อง, การเคลื่อนที่อย่างรวดเร็ว (รูปที่ 6 และ l;.
ภาพยนตร์ 3).
เพื่อที่จะตรวจสอบให้แน่ใจว่าองค์ประกอบ cytoskeletal และ
กระบวนการหนุนเหล่านี้ การเคลื่อนไหว endosomal ผลกระทบ
ของยาเสพติดหลายเคลื่อนที่ endosomal ถูกทดสอบ ใน
เคล็ดลับที่รากผมได้รับการรักษาส่วนใหญ่ของ endosomes
เปลี่ยนตำแหน่งของพวกเขาภายใน 14-28 วินาที (รูป. 7a-ค).
วัดและการวิเคราะห์ทางสถิติที่ตามมาของ
การเคลื่อนไหวเปิดเผยความเร็วเฉลี่ยของ 0.54mm / วินาที
(0.21mm / วินาที SE ) สำหรับ GFP-FYVE ป้าย endosomes
(ตารางที่ 1) ในช่วงเวลาของการสังเกตพวกเขาใช้เวลาเพิ่มขึ้น
ถึง 40% ของระยะเวลาที่ organelles นิ่งนี้
ระยะเวลาของการพักผ่อนเวลาอยู่ในช่วง 1-4 วินาที.
เมื่อการประยุกต์ใช้ 10 มม 2,3-butanedione monoxime (BDM) (S myosin ทั่วไปยับยั้ง ATPase
amaj
et al., 2000), GFP-FYVE ป้าย endosomes อย่างต่อเนื่อง
เพื่อแสดงการเคลื่อนไหว subcellular ภายใน 'โซนที่ชัดเจน',
แม้ว่าเราจะขยายการรักษาได้นานถึง 1 ชั่วโมง (รูป.
7d-F; ภาพยนตร์ 12) แต่ลักษณะของ
การเคลื่อนที่ endosome มีการเปลี่ยนแปลงในการปรากฏตัวของ BDM
(ตารางที่ 1) โดยเฉพาะอย่างยิ่งเวลาที่พำนักแห่งการเปลี่ยนแปลง
อย่างรวดเร็วในขณะที่ BDM รับการรักษา endosomes FYVE ป้ายใช้เวลาน้อยกว่า 10% ของเวลาที่สังเกตใน
ระยะ stationary เมื่อเทียบกับ 40% ในการควบคุม
เงื่อนไข การประยุกต์ใช้ latrunculin B (LatB)
ที่มีประสิทธิภาพ F-โปรตีน-depolymerizing ตัวแทน (สำหรับเซลล์พืช
seeGibbon, et al, 1999;.. Baluska, et al, 2001) ,.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เกิด actin propels endosomes
สังเกตว่าแพทช์ f-actin ณ
เคล็ดลับของรากขนและแสดงลักษณะการเคลื่อนที่
คล้าย endosomes ป้ายชื่อและ gfp-fyve
ara6 / rabf2a นักข่าวสร้างแนะนำว่า
บางทีพลวัตของช่องเหล่านี้ถูกเชื่อมโยงอย่างใกล้ชิดกับ actin ขาดตอน
. เพื่อระบุ
บังคับขับขี่อยู่เบื้องหลังการเคลื่อนไหวของ endosomes พืชเหล่านี้

เราแสดงเวลาล่วงเลยภาพถ่ายด้วยเคล็ดลับผมที่ราก ระนาบโฟกัสซิงเกิลในกลางของ
เคล็ดลับการ 70 S . การสังเกตของเราพบว่า พฤติกรรมของ endosomes เคลื่อนที่

คือสูง ( รูปที่ 6 ) ในบาง endosomes บางกรณีถูก
เกือบหยุดนิ่ง , แสดงการเคลื่อนที่เท่านั้น
จำกัดไม่กี่ไมโครเมตรไปข้างหน้าและข้างหลัง ( ภาพที่ 6F , สีแดง )
หรือใส่เครื่องเขียนก็เริ่มเคลื่อนไหว และลากไปที่ความเร็วสูง อื่น ๆระบุว่า endosomes
fyve GFP แสดงทิศทางและการเคลื่อนไหวช้า
( รูปที่ 6F และ 2 ) ในขณะที่คนอื่น ๆมียัง
ยั่งยืนอย่างรวดเร็ว , การเคลื่อนที่ ( ภาพและภาพยนตร์ 6F l ;
3
) . เพื่อให้ทราบถึงองค์ประกอบและ
ซึ่งไซโตร กเลตัลกระบวนการหนุนการเคลื่อนไหว endosomal เหล่านี้ผล
ยาเสพติดหลาย endosomal การเคลื่อนที่บนดำเนินการ ใน
เคล็ดลับรากผมและส่วนใหญ่ของ endosomes
เปลี่ยนตำแหน่งของพวกเขาภายใน 14 – 28 S ( รูปงาน ( c )
การวัดและการวิเคราะห์ทางสถิติที่ตามมาของ
การเคลื่อนไหวพบความเร็วเฉลี่ย 0.54mm / s
( 0.21mm/s เซ ) สำหรับ GFP fyve ป้าย endosomes
( ตารางที่ 1 )ในช่วงเวลาของการสังเกต พวกเขาใช้เวลาขึ้น
40% ของช่วงเวลานี้เป็นออร์แกเนลล์เครื่องเขียน
ระยะเวลาเวลาพักในช่วง 1 – 4 S .
เมื่อใช้ monoxime 2,3-butanedione 10 มม. ( bdm ) , ทั่วไป myosin ATPase inhibitor ( s ˇ

amaj et al . , 2000 ) ป้าย , fyve GFP endosomes อย่างต่อเนื่อง
แสดงการเคลื่อนไหวตําแหน่งภายในเซลล์ภายในโซน
' ชัดเจน 'ถ้าเราขยายการรักษานานถึง 1 ชั่วโมง ( รูป
7D ) F ; ภาพยนตร์ 12 ) อย่างไรก็ตาม ลักษณะของการเคลื่อนที่
โครโมโซมมีการเปลี่ยนแปลงในสถานะของ bdm
( ตารางที่ 1 ) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง พักเวลาเปลี่ยน
อย่างมากเป็น bdm ถือว่า fyve ป้าย endosomes ใช้เวลาน้อยกว่า 10% ของเวลาที่สังเกตใน
นิ่งระยะเมื่อเทียบกับ 40% ในเงื่อนไขการควบคุม

การประยุกต์ใช้ latrunculin B ( latb ) ,
เจ้าหน้าที่ f-actin-depolymerizing ที่มีประสิทธิภาพ ( สำหรับพืชเซลล์
seegibbon et al . , 1999 ; balus ˇ ka et al . , 2001 )