In vivo recombined antibody librari

In vivo recombined antibody libraries
To circumvent the earlier limits imposed by the transformation
step, some libraries have been constructed using
in vivo recombination or combinatorial infection to generate
highly diversifi ed repertoires of either synthetic or
naive antibody fragments. A synthetic Fab library was
constructed using two vectors, each with a different antibiotic
selectable marker. One is a plasmid derived from
pUC19, and the second is a phage vector (fdDOG). The
heavy and light chain antibody sequences were cloned
into this vector [29]. The vectors are then incorporated
into the same cell by a simple phage rescue strategy, and
cells are sub sequently coinfected by the chloramphenicol-
resistant phage P1. P1 provides the Cre recombinase
which recognizes the loxP sites fl anking the heavy and
light chain antibody sequences and recombines them
within the cell. The constructed library was predicted
to contain ~1010 recombinants, and these recombinants
were being detected on the basis of their resistance to all
three antibiotics. Recently, a single vector system which
also used Cre recombinase has been described [30]. A
phagemid vector containing both VH and VL segments

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไลบรารีของแอนติบอดีในร่างกายคืนรูปปรุงแต่งเพื่อหลีกเลี่ยงข้อจำกัดก่อนหน้านี้กำหนด โดยการแปลงขั้นตอน บางไลบรารีได้รับการก่อสร้างโดยใช้ในร่างกายรวมตัวกันหรือติดเชื้อ combinatorial เพื่อสร้างสูง diversifi repertoires ed ของสังเคราะห์อย่างใดอย่างหนึ่ง หรือส่วนของแอนติบอดีไร้เดียงสา ไลบรารี Fab ที่สังเคราะห์ได้ใช้สองเวกเตอร์ ยาปฏิชีวนะแตกต่างกันในแต่ละเลือกเครื่องหมาย เป็น plasmid ที่ได้มาจากpUC19 และสองเป็น phage เวกเตอร์ (fdDOG) การลำดับโซ่หนัก และเบาแอนติบอดีถูกโคลนเป็นเวกเตอร์ที่นี้ [29] แล้วมีรวมเวกเตอร์ลงในเซลล์เดียวกันโดยกลยุทธ์กู้ภัย phage ง่าย และเซลล์จะย่อย sequently coinfected โดยคคัส-ทน phage P1 ให้ P1 Cre recombinaseซึ่งรู้จัก anking ไซต์ fl loxP หนัก และไฟแอนติบอดีลำดับ และรวมพวกเขาภายในเซลล์ สร้างไลบรารีก็คาดว่ามี recombinants ~ 1010 และ recombinants เหล่านี้ถูกตรวจพบบนพื้นฐานของความต้านทานทั้งหมดยาปฏิชีวนะที่สาม เมื่อเร็ว ๆ นี้ ระบบเวกเตอร์เดียวซึ่งยัง ใช้ Cre recombinase ได้อธิบายไว้ [30] Aphagemid เวกเตอร์ที่ประกอบด้วยเซกเมนต์ VH และ VL

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในร่างกาย recombined ห้องสมุดแอนติบอดี
เพื่อหลีกเลี่ยงข้อ จำกัด ก่อนหน้านี้ที่กำหนดโดยการเปลี่ยนแปลง
ขั้นตอนห้องสมุดบางส่วนได้ถูกสร้างขึ้นโดยใช้
ในการรวมตัวกันอีกร่างกายหรือการติดเชื้อรวมกันเพื่อสร้าง
repertoires เอ็ด diversifi สูงของทั้งสังเคราะห์หรือ
ไร้เดียงสาเศษแอนติบอดี ห้องสมุด Fab สังเคราะห์ที่ถูก
สร้างขึ้นโดยใช้สองเวกเตอร์แต่ละคนมีความแตกต่างกันของยาปฏิชีวนะ
เครื่องหมายเลือก หนึ่งคือพลาสมิดที่ได้มาจาก
pUC19 และที่สองเป็นเวกเตอร์ฟาจ (fdDOG)
หนักและห่วงโซ่แสงลำดับแอนติบอดีถูกโคลน
เป็นเวกเตอร์นี้ [29] เวกเตอร์จะรวมแล้ว
เข้าไปในเซลล์เดียวกันโดยกลยุทธ์กู้ภัย phage ง่ายและ
เซลล์ย่อย sequently coinfected โดย chloramphenicol-
ทน P1 ทำลายจุลินทรีย์ P1 ให้ recombinase Cre
ซึ่งตระหนักในเว็บไซต์ loxP FL anking หนักและ
ห่วงโซ่ลำดับแอนติบอดีแสงและ recombines พวกเขา
ภายในเซลล์ ห้องสมุดสร้างขึ้นเป็นที่คาดการณ์
ว่าจะมี ~ 1010 โคและโคเหล่านี้
ถูกตรวจพบบนพื้นฐานของความต้านทานของทุก
สามยาปฏิชีวนะ เมื่อเร็ว ๆ นี้ระบบเวกเตอร์เดียวที่
ยังใช้ Cre recombinase ได้รับการอธิบาย [30]
เวกเตอร์ phagemid มีทั้ง VH และกลุ่ม VL

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โดยห้องสมุดโปรตีนน้ำนมเพื่อหลีกเลี่ยงการบังคับ โดยก่อนหน้านี้ จำกัดขั้นตอน บางสถาบันได้ถูกสร้างขึ้นโดยใช้โดยการสร้างหรือการติดเชื้อขอ diversifi เอ็ด repertoires ทั้งสังเคราะห์หรือไร้เดียงสาจากเศษ สังเคราะห์ fab ห้องสมุดคือสร้างโดยใช้สองเวกเตอร์แต่ละคนมีแตกต่างกัน ยาปฏิชีวนะเครื่องหมายที่เลือก เป็นสายพันธุ์ที่ได้มาจากpuc19 และสองเป็นเฟจเวกเตอร์ ( fddog ) ที่หนักและเบา โซ่ลำดับถูกโคลนแอนติบอดีเป็นเวกเตอร์ [ 29 ] เวกเตอร์แล้วรวมในเซลล์เดียวกันโดยง่ายว่าช่วยเหลือกลยุทธ์และเซลล์จะย่อย sequently coinfected อล - โดยทนเฟจ P1 . P1 ให้ CRE recombinaseซึ่งรู้จักเว็บไซต์ loxp FL anking หนักและlight chain แอนติบอดี ลำดับและ recombines พวกเขาภายในเซลล์ สร้างขึ้นพบว่าห้องสมุดบรรจุ ~ 1010 recombinants และ recombinants เหล่านี้ถูกตรวจพบบนพื้นฐานของความต้านทานของพวกเขาทั้งหมดสามยาปฏิชีวนะ เมื่อเร็วๆ นี้ ซึ่งระบบเดียวเวกเตอร์ยังใช้ครีม recombinase ได้รับการอธิบาย [ 30 ] เป็นphagemid เวกเตอร์ที่มีทั้ง 6 กลุ่ม และออสเตรเลีย