1.5 mMMgCl2, 0.2 mM of each dNTP, 0.2 pmol EcoRI and HpaII/MspI adapter-directed primers (each
possessing a single-selective base, E+1; HM+1) and 1 U Taq DNA polymerase (Invitrogen,
Norway). PCR was performed with the following profile: 94°C for 60 s, 25 cycles of 30 s denaturing
at 94°C, 30 s annealing at 55°C and 60 s extension at 72°C, and finally 10 min at 72°C
to complete extension. After confirming the presence of a smear of fragments (100-1000 bp in
length) by agarose electrophoresis, the amplification product was diluted 40 times in 0.1X TE.
1.5 mmmgcl2 0.2 มม. ของแต่ละ dntp 0.2 pmol EcoRI และ hpaii / อะแดปเตอร์โดยตรงโดยใช้ PCR ( แต่ละ
ครอบครองเดียวเลือกฐาน e 1 ; HM 1 ) และ 1 วูทัค DNA polymerase ( Invitrogen
, นอร์เวย์ ) ซึ่งแสดงด้วยรายละเอียดต่อไปนี้ : 94 ° C เป็นเวลา 60 วินาที , 25 รอบ 30 s ี่
ที่ 94 ° C , 30 วินาที annealing ที่ 55 องศา C และ 60 72 ° C ) , และสุดท้าย 10 นาทีที่ 72 ° C
เพื่อให้ขยายหลังจากได้รับการยืนยันการปรากฏตัวของรอยเปื้อนของเศษ ( อะ
BP ในความยาว ) , อิเล็ก , สินค้าแบบเจือจาง 40 ครั้งใน 0.1x เต้
การแปล กรุณารอสักครู่..