2.1. Isolation and identification o

2.1. Isolation and identification of bacterial contaminants
Samples collected from a Midwestern dry-grind fuel ethanol
plant were serially diluted in phosphate buffered saline and spread
on plates containing MRS medium (Difco Becton Dickinson, Sparks,
MD) with 0.001% (w/v) cycloheximide added to suppress yeast
growth (Skinner and Leathers, 2004). Cultures were incubated
anaerobically at 37 C using the Mitsubishi AnaeroPack system
(Thermo Fisher Scientific, Pittsburg PA) or the GasPak EZ System
(Becton Dickinson) and strains were purified twice as single colonies
and stored at 80 C in 40% (v/v) glycerol in 96-well microtiter
plates.
Strains were identified by sequencing of 16S rRNA genes via
polymerase chain reaction using 16Sf (50
-GAGAGTTTGATYCTGGC
TCAG) and 16Sr (50
-GAAGGAGGTGWTCCARCCGCA) primers as previously
described (Whitehead and Cotta, 2001). The resulting products
(about 1.6 kbp) were purified using a 5 Prime PCR purification
kit, and sequenced by standard methods using the forward primer.
The sequences obtained were compared with sequences in the
GenBank database using BLASTN program (Altschul et al., 1997)
at the National Center for Biotechnology Information (http://
blast.ncbi.nlm.nih.gov/).
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1 การแยกและระบุสารปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียตัวอย่างที่เก็บรวบรวมจากเอทานอลเป็นเชื้อเพลิงแห้งมัน Midwesternพืชที่ผสมในน้ำเกลือฟอสเฟต buffered และแพร่กระจาย seriallyบนแผ่นที่ประกอบด้วยนางกลาง (Difco Becton สัน สปาร์คMD) กับเพิ่มไม่ใส่ยีสต์ cycloheximide 0.001% (w/v)เจริญเติบโต (สกินเนอร์และเครื่องหนัง 2004) วัฒนธรรมถูก incubatedanaerobically ที่ 37 C ใช้ระบบ AnaeroPack มิตซูบิชิ(Fisher เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Pittsburg PA) หรือระบบอีซี่ GasPak(Becton สัน) และสายพันธุ์ที่บริสุทธิ์สองเดียวเป็นอาณานิคมและเก็บไว้ที่ 80 C ในกลีเซอร 40% (v/v) ใน microtiter 96-ดีแผ่นสายพันธุ์ที่ระบุลำดับของ 16S rRNA ยีนผ่านปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสที่ใช้ 16Sf (50-GAGAGTTTGATYCTGGCTCAG) และ 16Sr (50-GAAGGAGGTGWTCCARCCGCA) ไพรเมอร์เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย (Whitehead และ Cotta, 2001) ผลิตภัณฑ์ได้(ประมาณ 1.6 kbp) ที่บริสุทธิ์ใช้ฟอกตัว PCR นายก 5kit และเรียงลำดับตามวิธีมาตรฐานที่ใช้รองพื้นไปข้างหน้าลำดับที่รับได้เมื่อเทียบกับลำดับในการฐานข้อมูล GenBank ที่ใช้โปรแกรม BLASTN (Altschul และ al., 1997)ที่แห่งชาติศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ (ของ http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 การแยกและบัตรประจำตัวของสารปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียตัวอย่างที่เก็บรวบรวมจากมิดเวสต์ของแห้งบดเชื้อเพลิงเอทานอพืชที่ถูกปรับลดลำดับในน้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตและการแพร่กระจายบนจานที่มีขนาดกลางMRS (Difco Becton ดิกคินสันปาร์กส์, MD) กับ 0.001% (w / v) cycloheximide เพิ่ม เพื่อให้การปราบปรามยีสต์เจริญเติบโต(สกินเนอร์และเครื่องหนัง, 2004) วัฒนธรรมถูกบ่มแบบไม่ใช้อากาศที่ 37 องศาเซลเซียสโดยใช้ระบบมิตซูบิชิ AnaeroPack (เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์, พิตต์สเดลเฟีย) หรือ GasPak ระบบ EZ (Becton ดิกคินสัน) และสายพันธุ์บริสุทธิ์สองเท่าอาณานิคมเดียวและเก็บไว้ที่80 องศาเซลเซียสใน 40% (v / v) กลีเซอรอลในไมโคร 96 หลุมจาน. สายพันธุ์ที่ถูกระบุโดยลำดับของยีน 16S rRNA ผ่านปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ใช้16Sf (50 -GAGAGTTTGATYCTGGC TCAG) และ 16Sr (50 -GAAGGAGGTGWTCCARCCGCA) ไพรเมอร์เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย(Whitehead และ Cotta, 2001) ผลิตภัณฑ์ผล(ประมาณ 1.6 KBP) ถูกนำมาทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ 5 บริสุทธิ์ PCR นายกรัฐมนตรีชุดและลำดับขั้นตอนโดยวิธีมาตรฐานโดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้า. ลำดับที่ได้มาเทียบกับลำดับในฐานข้อมูล GenBank ใช้กล่าวหา (Altschul et al., 1997) ที่ศูนย์แห่งชาติสำหรับข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ (http: //. blast.ncbi.nlm.nih.gov/) 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . การแยกและจำแนกแบคทีเรียปนเปื้อน
เก็บตัวอย่างจากช่องแห้งบดเชื้อเพลิงเอทานอล
พืชเจือจางในฟอสเฟตบัฟเฟอร์เป็นดินเค็มและการแพร่กระจายบนแผ่นประกอบด้วย MRS medium (
difco เบคตอนดิกคินสัน ประกายไฟ
, MD ) 0.001 % ( w / v ) ร้อยเรียงเพิ่มเพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของยีสต์
( สกินเนอร์และหนัง 2004 ) วัฒนธรรมที่ถูกบ่ม
พ 37 C ใช้มิตซูบิชิ anaeropack ระบบ
( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Pittsburgh PA ) หรือระบบ EZ gaspak
( เบคตอน Dickinson ) และสายพันธุ์บริสุทธิ์ เป็น 2
โคโลนีเดี่ยว และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส ใน 40 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กลีเซอรอลใน 96 ดีแผ่นไมโคร
.
สายพันธุ์ โดยการระบุ ของ 16S rRNA ยีนโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสโดยใช้ 16sf

-
gagagtttgatyctggc ( 50tcag ) และ 16sr ( 50
- gaaggaggtgwtccarccgca ) ไพรเมอร์เป็นก่อนหน้านี้
อธิบาย ( สิวและ Cotta , 2001 ) ส่งผลให้ผลิตภัณฑ์
( ประมาณ 1.6 kbp ) บริสุทธิ์ใช้ 5 นายก PCR และบริสุทธิ์
ชุดนี้โดยวิธีมาตรฐานโดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้า .
ลำดับเปรียบเทียบกับลำดับใน
ฐานข้อมูลขนาดโดยใช้โปรแกรม blastn ( แอลเชิล et al . , 1997 )
ที่ศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ ( http : / /
ระเบิด ncbi . nlm . NIH . gov / )
2