0.1% SDS at 37°C for 60 min. RNA wa

0.1% SDS at 37°C for 60 min. RNA was extracted and
precipitated with ethanol. Reverse transcriptase (RT)-PCR
was performed with the isolated RNA by using two primers:
one corresponds to nt 3220-3237 (5' primer) and the other is
complementary to nt 3362-3381 (3' primer) in the M33 RV
genome. These primers amplify a 161-bp RV-specific PCR
product containing an Nhe I restriction enzyme recognition
sequence (ref. 16; Fig. 1). The PCR was performed in the
presence of 10 ,uCi of [a-32P]dCTP (800 Ci/mmol) at an
annealing temperature of 50°C. Upon Nhe I digestion, the
RV-RNA-specific PCR DNA yields 98- and 63-bp fragments.
The digested products were separated on nondenaturing 6%
polyacrylamide gels as described (5).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

sds 0.1% ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที RNA ถูกสกัดและ
ตกตะกอนด้วยเอทานอล ย้อนกลับ transcriptase (RT) pcr
ได้ดำเนินการกับอาร์เอ็นเอที่แยกโดยใช้ไพรเมอร์สอง:
หนึ่งที่สอดคล้องกับ NT 3220-3237 (5 'ไพรเมอร์) และอื่น ๆ เป็น
ประกอบกับ NT 3362-3381 (3' ไพรเมอร์) ใน M33 RV
จีโนม ไพรเมอร์เหล่านี้ขยาย pcr
ผลิตภัณฑ์ที่เฉพาะเจาะจง RV-161-bp ท​​ี่มีการรับรู้ของเอนไซม์ nhe จำกัด i
ลำดับ (อ้างอิง 16. มะเดื่อ 1) pcr ได้ดำเนินการในการแสดงตนของ
10 UCI ของ [-32P] dctp (800 CI / มิลลิโมล) ที่อุณหภูมิการหลอม
จาก 50 องศาเซลเซียส เมื่อ nhe i ย่อย
RV-RNA เฉพาะ pcr dna ผลตอบแทนถัวเฉลี่ย 98 -. และชิ้นส่วน 63-bp
ผลิตภัณฑ์ย่อยที่ถูกแยกจากกันบนเจล nondenaturing 6%
polyacrylamide ตามที่อธิบายไว้ (5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

0.1% SDS ที่ 37° C สำหรับ 60 นาทีอาร์เอ็นเอที่สกัด และ
ตะกอน ด้วยเอทานอล กลับ transcriptase (RT) -PCR
ทำกับอาร์เอ็นเอที่แยก โดยใช้ไพรเมอร์สอง:
หนึ่งสอดคล้องกับ nt 3220-3237 (5' พื้น) และอื่น ๆ ที่เป็น
เสริมการ nt 3362-3381 (พื้น 3) ใน M33 RV
กลุ่ม ไพรเมอร์เหล่านี้ขยายตัว 161 bp RV เฉพาะ PCR
ผลิตภัณฑ์ประกอบด้วยการ Nhe ฉันรู้เอนไซม์จำกัด
ลำดับ (16 อ้างอิง Fig. 1) PCR มีดำเนินการในการ
ของ 10, uCi dCTP [a - 32P] (800 Ci/mmol) ที่เป็น
การอบเหนียวอุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส เมื่อ Nhe ผมย่อยอาหาร การ
RV อาร์เอ็นเอเฉพาะ PCR ดีเอ็นเอทำให้บางส่วนของ 98 - และ 63-bp.
ผลิตภัณฑ์ digested ถูกแยกจากกันใน nondenaturing 6%
polyacrylamide gels เป็นอธิบาย (5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซิร์ฟเวอร์ SDS 0.1% ที่ 37 ° C สำหรับ 60 rna นาทีสกัดและ
ตกตะกอนด้วยเอทานอล ย้อนกลับ transcriptase ( RT ) - pcr
ได้ดำเนินการกับที่แยก rna โดยการใช้สอง primers :
หนึ่งตรงกับ NT 3220-3237 ( 5 "เชื้อปะทุ)และที่อื่นๆคือ
ซึ่งจะช่วยเสริมให้ NT 3362-3381 ( 3 'เชื้อปะทุ)ในม. 33 รถ RV
ยีน. primers เหล่านี้เพิ่ม ผลิตภัณฑ์ pcr
161 - BP รถ RV - เฉพาะที่มีการจำแนกเอนไซม์การจำกัด NHE ,ผมที่
ตามมาตรฐาน(ref. ตามลำดับ รูปที่ 16 . 1 ) pcr ซึ่งได้ดำเนินการ
ซึ่งจะช่วยในการมีอยู่ของ UCI 10 ของ[ -32 P ] dctp ( 800 มิลลิโมล CI /)ที่ อุณหภูมิ
annealing ของ C 50 ° เมื่อ NHE , i ระบบย่อยอาหาร,ที่
RV - rna - pcr ดีเอ็นเอระบุอัตราผลตอบแทน 98 - และ 63 - BP เศษ.
ที่ย่อยเป็นแบบแยกพื้นที่ใน nondenaturing 6%
polyacrylamide ผลิตภัณฑ์ ประเภท แวกซ์,เจลตามที่อธิบายไว้( 5 )