A RAPID METHOD FOR CLEARING AND STA

A RAPID METHOD FOR CLEARING AND STAINING
SPECIMENS FOR THE DEMONSTRATION OF BONE
MARGARET C. GREEN
Department of Zoology and Entomology, The Ohio State University, Columbus 10
The potassium hydroxide clearing and alizarin staining method for the preparation
of whole skeletons has proved very useful for the study of bones of embryos
and small animals. It has certain advantages over methods in which the carcass
is macerated and the bones are separated and dried. Among these advantages
are: (1) there is no chance of losing the small bones, (2) all bones are retained in
their original position, (3) there is no chance of wrongly identifying similar bones,
(4) in the finished preparations the bones, after identification, may be disarticulated
and examined from all angles, equally as well as in dried preparations, and (5)
many animals may be processed together without danger of mixing their bones,
a great saving in time and effort.
The method was originally developed by Schultze (1897) and has subsequently
been modified by a number of investigators including Mall (1906), Dawson (1926),
Lipman (1935), Cumley, Crow, and Griffen (1939), Gamble (1945), and True (1947).
The steps usually employed include: (1) fixation in formalin or alcohol, (2) bleaching
with hydrogen peroxide, (3) incomplete maceration in potassium hydroxide,
(4) staining with alizarin red S, and (5) clearing in graded concentrations of glycerin,
or dehydration and clearing in oil of wintergreen. Various authors have suggested
the omission of one or more of these steps. In our genetic experiments it has been
necessary to examine the skeletons of many thousands of mice, making the maximum
possible simplification desirable. It has been found possible to omit fixation
and bleaching and to transfer the specimens directly from the staining solution
to undiluted glycerin without the intermediate steps.
Although the method is particularly useful for mass production of stained
skeletons, the excellent quality of the preparations (fig. 1) makes it useful also for
the preparation of exhibition specimens. It may be used successfully on small
fish, amphibia, reptiles, birds, and mammals. Specimens thus prepared may
subsequently be mounted in transparent plastic according to directions supplied
with the plastic by biological supply companies.
The solutions needed are 1 percent potassium hydroxide, 0.5 percent alizarin
red S in 1 percent potassium hydroxide, and glycerin. A schedule suitable for
30 day old mice is as follows.
1. Skin and eviscerate.
2. Place in 1 percent potassium hydroxide for 5 days.
3. Pour off solution and replace with fresh 1 percent potassium hydroxide.
Add to this a few drops of 0.5 percent alizarin red S in 1 percent potassium hydroxide
to make a medium pink solution. Leave in this for 5 days.
4. Pour off solution and replace with glycerin.
With a little practice the first step can be accomplished very rapidly. The
following procedure for skinning has been found satisfactory for mice of all ages.
With scissors a crosswise cut is made in the skin of the mid-dorsal region. This
cut is then extended around to the ventral side by tearing. If the posterior part
of the skin is now peeled back over the hind legs and tail, it will tear at the ankles
and usually at the base of the tail and come off without further cutting. Sometimes
the skin of the tail pulls off completely. A cut is now made in the anterior part
of the skin running longitudinally from the mid-dorsal region to the tip of the nose.
The skin can then be peeled off the head and front legs in one piece.
THE OHIO JOURNAL OF SCIENCE 52(1): 31, January, 1952.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการล้าง และย้อมสีอย่างรวดเร็วไว้เป็นตัวอย่างสำหรับการสาธิตของกระดูกกรีน C. มาร์กาเร็ตภาควิชาสัตววิทยาและกีฏวิทยา มหาวิทยาลัยรัฐโอไฮโอ โคลัมบัส 10โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ล้างและวิธีการสำหรับการเตรียมการย้อมสี alizarinของโครงกระดูกทั้งหมดได้พิสูจน์แล้วว่ามีประโยชน์มากสำหรับการศึกษากระดูกของโคลนและสัตว์ขนาดเล็ก มีบางข้อดีกว่าวิธีที่ซากเป็น macerated และกระดูกจะแยกออก และแห้ง ในข้อดีเหล่านี้มี: (1) มีโอกาสของการสูญเสียกระดูกเล็ก กระดูก (2) ทั้งหมดจะถูกเก็บไว้ในตำแหน่ง ไม่มี (3) โอกาสของการผิดระบุกระดูกคล้าย(4) ในการจัดเตรียมเสร็จ กระดูก หลังรหัส อาจจะ disarticulatedและกล่าวถึงจากทุกมุม อย่างเท่าเทียมกันเช่นในการเตรียมของแห้ง และ (5)สัตว์จำนวนมากสามารถประมวลผลร่วมกัน โดยไม่มีอันตรายของการผสมของกระดูกการบันทึกที่ดีในเวลาและความพยายามวิธีการเดิมถูกพัฒนา โดย Schultze (1897) และต่อมาได้การปรับเปลี่ยนตามการสืบสวนรวมทั้งห้างสรรพสินค้า (1906), ดอว์สัน (1926),Lipman (1935), Cumley ขัน Griffen (1939), ทำ (1945), และ True (1947)ขั้นตอนทำงานปกติรวม: (1) เบี formalin หรือแอลกอฮอล์, (2) การฟอกสีด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ maceration (3) ไม่สมบูรณ์ที่โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์(4) ย้อมสี alizarin กับสีแดง S และ (5) หักในมีการจัดระดับความเข้มข้นของกลีเซอรีนหรือคายน้ำแล้วหักในน้ำมันระกำ ต่าง ๆ ผู้เขียนได้แนะนำการกระทำการอันอย่างน้อยหนึ่งขั้นตอนเหล่านี้ ในการทดลองทางพันธุกรรมของเรา แล้วจำเป็นต้องตรวจสอบโครงกระดูกของหนู ทำสูงสุดหลายหมื่นรวบได้ต้อง มันพบได้ละเว้นเบีและฟอกสี และไว้เป็นตัวอย่างการโอนย้ายโดยตรงจากโซลูชัน stainingกลีเซอรีนหัวไป โดยขั้นตอนระดับปานกลางแม้ว่าวิธีนี้มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการผลิตโดยรวมของ สีโครงกระดูก คุณภาพดีของการเตรียม (fig. 1) ทำให้มันเป็นประโยชน์สำหรับเตรียมการแสดงไว้เป็นตัวอย่าง มันอาจจะใช้สำเร็จบนปลา amphibia สัตว์เลื้อยคลาน นก และเลี้ยงลูกด้วยนม ไว้เป็นตัวอย่างจึงเตรียมพฤษภาคมมาติดตั้งในพลาสติกใสตามทิศทางที่ให้มามีพลาสติกชีวภาพซัพพลายบริษัทที่ต้องมี 1 เปอร์เซ็นต์โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ alizarin 0.5 เปอร์เซ็นต์S สีแดง 1 เปอร์เซ็นต์โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ และกลีเซอรีน เวลาที่เหมาะสมวันที่ 30 หนูเก่ามีดังนี้1. ผิว และ eviscerate2. ทำใน 1 เปอร์เซ็นต์โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์สำหรับ 5 วัน3. เทปิดโซลูชัน และแทนที่ ด้วยสด 1 เปอร์เซ็นต์โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์เพิ่มนี้หยดของ alizarin 0.5 เปอร์เซ็นต์ S สีแดงใน 1 เปอร์เซ็นต์โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์เพื่อให้การแก้ไขสีชมพูขนาดกลาง ปล่อยในวันที่ 54. เทปิดโซลูชัน และแทนที่ ด้วยกลีเซอรีนทำแบบฝึกหัดน้อย ขั้นแรกสามารถดำเนินได้อย่างรวดเร็ว ที่ขั้นตอนการประกวดพบพอใจสำหรับหนูทุกเพศทุกวัยกับกรรไกร ตัด crosswise จะทำผิวภาคกลาง-dorsal นี้ตัดเป็นแล้วขยายรอบด้าน ventral ฉีกขาด ถ้าส่วนหลังผิวหนังเป็นตอนนี้ปอกเปลือกกว่าขาหลังและหางหลัง มันจะฉีกขาดที่เท้าและปกติที่ฐานของหางมาปิดโดยไม่ต้องไปตัด บางทีผิวหนังของหางดึงปิดอย่างสมบูรณ์ ตอนนี้ได้ทำการตัดในส่วนแอนทีเรียร์ผิวหนังทำงาน longitudinally จากภาคกลาง-dorsal ปลายจมูกผิวหนังสามารถแล้วจะปอกเปลือกหัวและขาหน้าในหนึ่งชิ้นรายโอไฮโอของ 52(1) วิทยาศาสตร์: 31 มกราคม 1952

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการที่รวดเร็วในการล้างและย้อม
ตัวอย่างสำหรับการสาธิตของกระดูก
MARGARET ซี GREEN
ภาควิชาสัตววิทยาและกีฏวิทยา Ohio State University, โคลัมบัส 10
หักบัญชีไฮดรอกไซโพแทสเซียมและวิธีการย้อมสี Alizarin สำหรับการเตรียมความพร้อม
ของโครงกระดูกทั้งได้พิสูจน์แล้วว่ามีประโยชน์มากสำหรับ การศึกษาของกระดูกของตัวอ่อน
และสัตว์ขนาดเล็ก มันมีข้อดีบางอย่างมากกว่าวิธีการที่ซาก
เป็น macerated และกระดูกจะถูกแยกออกและแห้ง ในข้อดีเหล่านี้
คือ (1) มีโอกาสของการสูญเสียกระดูกเล็ก ๆ ไม่ (2) กระดูกทั้งหมดจะถูกเก็บไว้ใน
ตำแหน่งเดิมของพวกเขา (3) มีโอกาสผิดพลาดระบุกระดูกที่คล้ายกันไม่
(4) ในการเตรียมดำเนินการเสร็จสิ้น กระดูกหลังจากที่ประชาชนอาจจะ disarticulated
และการตรวจสอบจากทุกมุมอย่างเท่าเทียมกันเช่นเดียวกับในการเตรียมการแห้งและ (5)
สัตว์หลายชนิดอาจจะต้องดำเนินการร่วมกันโดยไม่เป็นอันตรายของการผสมกระดูกของเขา
ที่ดีในการประหยัดเวลาและความพยายาม.
วิธี ได้รับการพัฒนาขึ้นโดยซ์ (1897) และต่อมาได้
รับการแก้ไขโดยจำนวนของผู้ตรวจสอบรวมทั้งห้างสรรพสินค้า (1906), ดอว์สัน (1926),
ลิปแมน (1935) Cumley กาและ Griffen (1939) เล่นการพนัน (1945) และ . ทรู (1947)
ขั้นตอนการจ้างงานมักจะรวมถึง: (1) การตรึงในฟอร์มาลินหรือเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (2) การฟอก
ด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (3) ยุ่ยไม่สมบูรณ์ในไฮดรอกไซโพแทสเซียม
(4) การย้อมสีด้วยสีแดง Alizarin S, และ (5) สำนักหักบัญชีในระดับความเข้มข้นอย่างช้า ๆ ของกลีเซอรีน
หรือการคายน้ำและล้างในน้ำมันพืช ผู้เขียนมีข้อเสนอแนะต่าง ๆ
งดหนึ่งหรือมากกว่าของขั้นตอนเหล่านี้ ในการทดลองทางพันธุกรรมของเราจะได้รับ
สิ่งที่จำเป็นในการตรวจสอบโครงกระดูกของหลายพันคนของหนูทำให้สูงสุด
ความเรียบง่ายเป็นไปได้ที่น่าพอใจ จะได้รับพบความเป็นไปได้ที่จะละเว้นการตรึง
และการฟอกและการถ่ายโอนตัวอย่างโดยตรงจากสารละลายสีย้อม
ที่จะกลีเซอรีนเจือปนโดยไม่มีขั้นตอนกลาง.
แต่วิธีการเป็นประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการผลิตมวลของสี
โครงกระดูกที่มีคุณภาพที่ดีเยี่ยมของการเตรียมการ (รูป 1) ทำให้มันมีประโยชน์สำหรับการ
เตรียมความพร้อมของชิ้นงานนิทรรศการ มันอาจจะใช้ประสบความสำเร็จในขนาดเล็ก
ปลา Amphibia สัตว์เลื้อยคลานนกและเลี้ยงลูกด้วยนม ตัวอย่างที่จัดทำขึ้นจึงอาจ
ต่อมาได้รับการติดตั้งในพลาสติกใสตามทิศทางที่จัดทำ
ด้วยพลาสติกโดย บริษัท จัดหาชีวภาพ.
การแก้ปัญหาจำเป็นต้องมีโพแทสเซียมไฮดรอกไซร้อยละ 1, ร้อยละ 0.5 Alizarin
S สีแดงในโพแทสเซียมไฮดรอกไซร้อยละ 1 และกลีเซอรีน ตารางเวลาที่เหมาะสมสำหรับการ
ใช้ 30 วันหนูเก่าเป็นดังนี้.
1 ผิวหนังและคว้านท้อง.
2 สถานที่ในโพแทสเซียมไฮดรอกไซร้อยละ 1 เป็นเวลา 5 วัน.
3 เทออกวิธีการแก้ปัญหาและแทนที่ด้วยโพแทสเซียมไฮดรอกไซร้อยละ 1 สด.
เพิ่มไปนี้ไม่กี่หยดของร้อยละ 0.5 Alizarin S สีแดงในโพแทสเซียมไฮดรอกไซร้อยละ 1
จะทำให้การแก้ปัญหาสีชมพูขนาดกลาง ฝากในครั้งนี้เป็นเวลา 5 วัน.
4 เทออกวิธีการแก้ปัญหาและแทนที่ด้วยกลีเซอรีน.
มีการปฏิบัติน้อยขั้นตอนแรกที่สามารถทำได้อย่างรวดเร็ว
สำหรับขั้นตอนต่อไปที่น่าสนใจมีการค้นพบที่น่าพอใจสำหรับหนูทุกเพศทุกวัย.
ด้วยกรรไกรตัดขวางจะทำในผิวของภาคกลางหลัง นี้
จะขยายออกไปตัดแล้วไปรอบ ๆ เพื่อหน้าท้องด้านข้างโดยการฉีกขาด หากส่วนหลัง
ของผิวจะปอกเปลือกตอนนี้กลับมาในช่วงขาหลังและหางก็จะฉีกขาดที่ข้อเท้า
และมักจะอยู่ที่ฐานของหางและหลุดออกมาโดยไม่มีการตัดต่อ บางครั้ง
ผิวของหางดึงออกอย่างสมบูรณ์ ตัดทำตอนนี้ในส่วนด้านหน้า
ของผิวทำงานตามยาวจากภาคกลางหลังถึงปลายจมูก.
ผิวนั้นจะสามารถปอกเปลือกออกหัวและขาหน้าในชิ้นเดียว.
OHIO วารสารวิทยาศาสตร์ 52 ( 1): วันที่ 31 มกราคม 1952

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นวิธีที่รวดเร็วในการล้างและย้อม
ตัวอย่างการสาธิตกระดูก
มาร์กาเร็ต C สีเขียว
ภาควิชาสัตววิทยาและกีฏวิทยา มหาวิทยาลัยแห่งโอไฮโอโคลัมบัส 10
โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์การย้อมวิธีอะลิซารินสำหรับการเตรียม
ของโครงกระดูกทั้งหมดได้พิสูจน์ประโยชน์มากสำหรับการศึกษากระดูกของเอ็มบริโอ
และสัตว์ขนาดเล็กมันมีข้อได้เปรียบเหนือกว่าวิธีการที่ซาก
เป็น macerated และกระดูกจะถูกแยกและอบแห้ง ในข้อดีเหล่านี้
คือ ( 1 ) ไม่มีโอกาสของการสูญเสียกระดูกเล็ก ( 2 ) กระดูกจะถูกเก็บไว้ใน
ตำแหน่งเดิม ( 3 ) ไม่มีโอกาสผิดพลาดระบุกระดูกที่คล้ายกัน
( 4 ) ในเสร็จสิ้นการเตรียมกระดูก หลังจากประชาชนอาจจะ disarticulated
และการตรวจสอบจากทุกมุม อย่างเท่าเทียมกัน ตลอดจนการเตรียมการแห้ง และ ( 5 )
มากสัตว์อาจประมวลผลเข้าด้วยกัน โดยไม่มี อันตรายของการผสมอัฐิ
ประหยัดมากเวลาและความพยายาม
วิธีการพัฒนาเดิมโดยชูลท์ ( 1897 ) และต่อมาได้
ถูกแก้ไขโดยจำนวนของนักวิจัย ได้แก่ ห้างสรรพสินค้า ( 1906 ) , ดอว์สัน ( 1926 )
ลิปแมน ( 1935 ) , cumley อีกา และกริฟเฟ็น ( 1939 )เล่นการพนัน ( 1945 ) และทรู ( 1947 ) .
ขั้นตอนปกติที่ใช้ ได้แก่ ( 1 ) การตรึงในฟอร์มาลิน หรือ แอลกอฮอล์ ( 2 ) ฟอก
กับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ( 3 ) ขาดยุ่ยในโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์
( 4 ) ย้อมด้วยอะลิซารินสีแดง และ ( 5 ) การล้างในระดับความเข้มข้นของ กลีเซอรีน ,
หรือ dehydration และล้างในมณฑลซานตง . ผู้เขียนได้เสนอแนะ
ต่าง ๆการละเลยของหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งของขั้นตอนเหล่านี้ ในการทดลองทางพันธุกรรมของเรามันมี
จำเป็นต้องศึกษาโครงกระดูกของหลายพันของหนู ทำสูงสุด
ที่สุดหนึ่งเดียวที่พึงปรารถนา มันถูกพบว่าเป็นไปได้ที่จะละเว้นการตรึง
ฟอกสี และโอนตัวอย่างโดยตรงจากการแก้ไข
จะเจือปนกลีเซอรีนไม่มี
ขั้นตอนกลางถึงแม้ว่าวิธีการจะเป็นประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการผลิตมวลของเปื้อน
โครงกระดูก คุณภาพที่ดีของการเตรียมการ ( รูปที่ 1 ) ทำให้มันมีประโยชน์สำหรับ
เตรียมชิ้นงานนิทรรศการ มันอาจจะใช้ประสบความสำเร็จในขนาดเล็ก
ปลา สัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำ สัตว์เลื้อยคลาน นก และสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ตัวอย่างต่อมาจึงเตรียมจะถูกติดตั้งในพลาสติกใส

ตามเส้นทางมา