immunized with extract of radial ne

immunized with extract of radial nerve of the starfish, Asterina pectinifera.
These antibodies specifically recognize known and novel structures of the larval
nervous system in A. pectinifera and other species of echinoderms (Nakajima et
al., 2004b). Rabbit anti-serotonin polyclonal antibody (DiaSorin, USA) was also
used.
Immunolocalization
Embryos and larvae were fixed in 4% paraformaldehyde in phosphatebuffered
saline (PBS) or seawater for 15 to 20 min at room temperature. Animals
were washed twice in PBS and dehydrated through a graded ethanol series and
stored in 75% ethanol at −20°C. The specimens were washed three times with
75% ethanol and treated with acetone (precooled at −20°C) on ice for 40 min.
Samples were rinsed three times with PBST (PBS containing 0.1% Tween 20)
and then incubated in either 1E11, 1F9, anti-serotonin antibody (diluted 1:2000
in PBS), overnight at 4°C. Negative control samples were treated in PBS instead
of primary antibodies at this step. After several rinsing with PBST, samples were
treated with secondary antibodies labeled with either Alexa Fluor 488, 546, or
Texas Red (Molecular Probes, USA). Goat anti-mouse secondary antibodies
were used for the 1E11 and 1F9 antibodies and goat anti-rabbit secondary
antibodies for the polyclonal anti-serotonin antibody. They were then rinsed
with PBST. Then samples were dehydrated through a graded ethanol series and
transferred into benzyl benzoate for clearing the later stage opaque larvae.
Samples were observed with confocal laser scanning and difference interference-
contrast (DIC) microscopes (Carl Zeiss LSM510, Leica TCS SP2 or
Olympus Fluoview FV300) or a fluorescence microscope (Olympus BX51).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

immunized สกัดจากเส้นประสาทเรเดียลของปลาดาว Asterina pectiniferaแอนตี้เหล่านี้รู้จักโดยเฉพาะนวนิยาย และรู้จักโครงสร้างของการ larvalระบบประสาทใน A. pectinifera และพันธุ์อื่น ๆ echinoderms (นาร้อยเอ็ดal., 2004b) กระต่ายต่อต้าน serotonin polyclonal แอนติบอดี (DiaSorin สหรัฐอเมริกา) ยังเป็นใช้Immunolocalizationโคลนและตัวอ่อนก็คงใน paraformaldehyde 4% ใน phosphatebufferedน้ำเกลือ (PBS) หรือทะเลสำหรับ 15-20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง สัตว์ล้างสองครั้งใน PBS และอบแห้งผ่านชุดเอทานอลที่มีการจัดระดับ และในเอทานอล 75% ที่ −20 องศาเซลเซียส ไว้เป็นตัวอย่างถูกล้างสามครั้งด้วย75% เอทานอล และอะซีโตน (precooled ที่ −20 ° C) ในน้ำแข็ง 40 นาทีรับตัวอย่างที่ rinsed สามครั้งกับ PBST (PBS ประกอบด้วย 0.1% Tween 20)แล้ว incubated ในการ 1E11, 1F9 แอนติบอดีต้าน serotonin (1:2000 แตกออกใน PBS), นอนที่ 4 องศาเซลเซียส ตัวอย่างควบคุมลบได้รับการรักษาใน PBS แทนของแอนตี้หลักในขั้นตอนนี้ หลังจากหลายล้างด้วย PBST ตัวอย่างดีรับแอนตี้รองที่ติดป้ายใด Alexa Fluor 488, 546 หรือเท็กซัสแดง (คลิปปากตะเข้โมเลกุล สหรัฐอเมริกา) แอนตี้รองเมาส์ป้องกันแพะใช้สำหรับแอนตี้ 1E11 และ 1F9 และรองป้องกันกระต่ายแพะแอนตี้สำหรับแอนติบอดีต้าน serotonin polyclonal พวกเขาได้แล้ว rinsedกับ PBST จากตัวอย่างอบแห้งผ่านชุดเอทานอลที่มีการจัดระดับ และโอนย้ายเป็น benzyl benzoate สำหรับล้างตัวอ่อนทึบแสงขั้นต่อไปตัวอย่างที่สังเกต ด้วยเลเซอร์ confocal สแกนและความแตกต่างรบกวน-ความคมชัด (ดิ๊กส) กล้องจุลทรรศน์ (Carl Zeiss LSM510 ไล TCS SP2 หรือOlympus Fluoview FV300) หรือกล้องจุลทรรศน์ fluorescence (Olympus BX51)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัคซีนที่มีสารสกัดจากเส้นประสาทรัศมีของปลาดาว, Asterina pectinifera.
แอนติบอดีเหล่านี้โดยเฉพาะคำนึงถึงเป็นที่รู้จักและโครงสร้างนวนิยายของตัวอ่อน
ของระบบประสาทใน pectinifera เอและชนิดอื่น ๆ ของ echinoderms (นากาจิมาและ
al., 2004b) กระต่ายโพลีแอนติบอดีต่อต้าน serotonin (Diasorin สหรัฐอเมริกา) ก็ถูก
นำมาใช้.
Immunolocalization
ตัวอ่อนและตัวอ่อนได้รับการแก้ไขใน paraformaldehyde 4% ใน phosphatebuffered
น้ำเกลือ (PBS) หรือน้ำทะเล 15 ถึง 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง สัตว์
ถูกล้างครั้งที่สองในพีบีเอสและแห้งผ่านชุดเอทานอลอย่างช้าและ
เก็บไว้ในเอทานอล 75% ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส ตัวอย่างที่ถูกล้างสามครั้งด้วย
เอทานอล 75% และได้รับการรักษาด้วยอะซิโตน (precooled ที่ -20 ° C) บนน้ำแข็งสำหรับ 40 นาที.
ตัวอย่างถูกล้างสามครั้งด้วย PBST (พีบีเอสที่มี Tween 0.1% 20)
แล้วนำไปบ่มในทั้ง 1E11, 1F9 แอนติบอดีต่อต้าน serotonin (ปรับลด 1: 2000
ในพีบีเอส) ในชั่วข้ามคืนที่ 4 ° C ตัวอย่างการควบคุมเชิงลบได้รับการรักษาในพีบีเอสแทน
ของแอนติบอดีหลักในขั้นตอนนี้ หลังจากหลายล้างด้วย PBST ตัวอย่างได้
รับการรักษาด้วยแอนติบอดีรองป้ายที่มีทั้งของ Alexa Fluor 488, 546 หรือ
เท็กซัสสีแดง (วัดระดับโมเลกุล, ประเทศสหรัฐอเมริกา) แพะป้องกันเมาส์แอนติบอดีรอง
ถูกนำมาใช้สำหรับ 1E11 และ 1F9 แอนติบอดีและแพะป้องกันกระต่ายมัธยมศึกษา
แอนติบอดีสำหรับโพลีแอนติบอดีต่อต้าน serotonin พวกเขาจะถูกล้างแล้ว
กับ PBST จากนั้นตัวอย่างแห้งผ่านชุดเอทานอลอย่างช้า ๆ และ
โอนเข้า benzyl เบนโซเอสำหรับการล้างขั้นตอนภายหลังอ่อนทึบแสง.
ตัวอย่างพบกับเลเซอร์สแกน confocal และความแตกต่าง interference-
ความคมชัด (DIC) กล้องจุลทรรศน์ (Carl Zeiss LSM510, Leica TCS SP2 หรือ
โอลิมปั Fluoview FV300 ) หรือกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (โอลิมปั BX51)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ฉีดกระตุ้นด้วยสารสกัดของเส้นประสาทเรเดียลของปลาดาว asterina pectinifera .
แอนติบอดีเหล่านี้โดยเฉพาะรับรู้รู้จักและนวนิยายโครงสร้างของระบบประสาทที่หนอน
. pectinifera และชนิดอื่น ๆของไคโนเดิร์ม ( นากาจิม่า et
al . , 2004b ) กระต่ายต้าน serotonin แอนติบอดีโพลี ( diasorin , USA ) ยัง immunolocalization


ใช้ .ตัวอ่อนและตัวอ่อนถูกกำหนดในพาราฟอร์มาลดิไฮด์ 4% ใน phosphatebuffered
น้ำเกลือ ( PBS ) หรือน้ำทะเลประมาณ 15 - 20 นาที ที่อุณหภูมิห้อง สัตว์
ถูกล้างสองครั้งใน PBS และแห้งผ่านระดับเอทานอลและชุด
เก็บไว้ในเอทานอล 75% ที่− 20 องศา ทำการล้างสามครั้งกับ
เอทานอล 75% และรักษาด้วยอะซีโตน ( precooled ที่− 20 ° C )
น้ำแข็งสำหรับ 40 นาทีทำการล้างสามครั้งกับ pbst ( PBS ที่ประกอบด้วย 0.1% Tween 20 )
แล้วบ่มใน 1e11 1f9 แอนติบอดีต่อต้าน , , serotonin ( เจือจาง 1:2000
ใน PBS ) ค้างคืนที่ 4 ° C ลบควบคุมจำนวนการรักษาใน PBS แทน
แอนติบอดีประถมศึกษา ในขั้นตอนนี้ หลังจากล้างด้วย pbst หลายตัวอย่าง ที่ได้รับรองฉลากแอนติบอดี
ด้วย Alexa Fluor 488 546 หรือ
,เท็กซัสแดง ( โมเลกุลโพรบ สหรัฐอเมริกา ) เมาส์ระดับแอนติบอดีต่อต้านแพะ
ถูกใช้เพื่อ 1e11 และแอนติบอดีต่อต้าน 1f9 แพะและกระต่ายระดับแอนติบอดี เพื่อใช้ต่อต้าน
) ยาพิษ จากนั้นล้างด้วย pbst
. แล้วทำการอบแห้งผ่านการจัดชุดและเอทานอล
โอนเป็นเบนซิลเบนโซเอตเพื่อล้างเวทีทีหลัง
ทึบแสงตัวอ่อนตัวอย่าง พบว่ามีความแตกต่างกับด้วยเลเซอร์สแกนและแทรก -
ความคมชัด ( DIC ) กล้องจุลทรรศน์ ( Carl Zeiss lsm510 , Leica TCS SP2 หรือ
โอลิมปัส fluoview ภาคอุตสาหกรรมที่มีความเสี่ยง ) หรือกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ( Olympus bx51 )