Frozen tissues were further diluted

Frozen tissues were further diluted 1:14 (sample:buffer, wt/vol) in ice-cold extraction buffer (10 mMTris with 5mMEDTA, pH 8.0) and immediately homogenized(model PT10/35, Brinkmann Instruments) on iceby applying three 1-min bursts over 5 min. A 1.0-mL aliquot of each tissue homogenate was placed into a 1.5-mL polypropylene, microcentrifuge tube and frozen
(−70°C) for subsequent DNA analysis using the Hoechst 33258 dye-binding procedure of Labarca and Paigen (1980), modified for a 96-well microtiter plate assay using a fluorometer (FL600, BioTek Instruments Inc.,Highland Park, Winooski, VT). A second 1.0-mL aliquot was placed into a 2.0-mL microcentrifuge tube and assayed for total RNA (Schmidt and Thannhauser, 1945).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื้อเยื่อแช่แข็งได้อีกแตกออก 1:14 (ตัวอย่าง: บัฟเฟอร์ wt/vol) ในบัฟเฟอร์สกัดฉ่ำ (10 mMTris กับ 5mMEDTA, pH 8.0) และระเบิดทันที homogenized เป็นกลุ่ม (รุ่น PT10/35 เครื่องมือ Brinkmann) iceby ใช้สาม 1-นาที 5 นาที ส่วนลงตัว 1.0 mL ของ homogenate แต่ละเนื้อเยื่อที่อยู่ในหลอด 1.5 มิลลิลิตร polypropylene, microcentrifuge และแช่แข็ง(−70 ° C) สำหรับการวิเคราะห์ดีเอ็นเอต่อมาใช้อย่างไร Hoechst 33258 ย้อมรวมขั้นตอนของ Labarca และ Paigen (1980), การปรับเปลี่ยนสำหรับการทดสอบแผ่น microtiter 96 ดีใช้ fluorometer (FL600, BioTek เครื่องมือ Inc. ไฮแลนด์ปาร์ค Winooski, VT) ส่วนลงตัว 1.0 mL สองอยู่ในหลอด microcentrifuge 2.0 mL และ assayed ในอาร์เอ็นเอทั้งหมด (Schmidt และ Thannhauser, 1945)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แช่แข็งเนื้อเยื่อถูกปรับลดต่อไป 1:14 (ตัวอย่าง: บัฟเฟอร์น้ำหนัก / ปริมาตร) ในบัฟเฟอร์สกัดเย็น (10 mMTris กับ 5mMEDTA ค่า pH 8.0) และหดหายทันที (รุ่น PT10 / 35, เครื่องมือ Brinkmann) บน iceby ใช้สาม 1- นาทีระเบิดในช่วง 5 นาที aliquot 1.0 มิลลิลิตรของแต่ละ homogenate เนื้อเยื่อถูกวางไว้เป็นโพรพิลีน 1.5 มิลลิลิตรหลอดไมโครและแช่แข็ง
(-70 ° C) สำหรับการวิเคราะห์ดีเอ็นเอที่ตามมาโดยใช้ Hoechst 33258 ขั้นตอนการย้อมผูกพันของ Labarca และ Paigen (1980) แก้ไข ทดสอบแผ่นไมโคร 96 หลุมโดยใช้ fluorometer (ที่ FL600, Biotek เครื่องมืออิงค์ไฮแลนด์พาร์ค, นุ, VT) aliquot 1.0 มิลลิลิตรที่สองถูกวางลงในหลอดไมโคร 2.0 มิลลิลิตรและ assayed สำหรับ RNA รวม (Schmidt และ Thannhauser, 1945)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เนื้อเยื่อแช่แข็งได้เจือจาง 1 : 14 ( ตัวอย่าง : บัฟเฟอร์ , WT / Vol ) ในการสกัดเย็น บัฟเฟอร์ ( 10 mmtris กับ 5mmedta pH 8.0 ) และทันทีที่บด ( แบบ pt10 / 35 , brinkmann เครื่องมือ ) ใน iceby ใช้สาม 1-min ระเบิดกว่า 5 นาที เป็น 1.0-ml ส่วนลงตัวของแต่ละแยกเนื้อเยื่ออยู่ใน 1.5-ml โพรพิลีน , หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์และแช่แข็ง
( − 70 ° C ) สำหรับการวิเคราะห์ดีเอ็นเอที่ตามมาใช้ Hoechst 33258 ย้อมผูกและขั้นตอนของ labarca paigen ( 1980 ) , แก้ไขสำหรับ 96 ก็ ( ใช้แผ่นไมโครฟลู โรมิเตอร์ ( fl600 biotek เครื่องมือ , Inc , Highland Park , Winooski , VT ) ส่วนที่หารลงตัว 1.0-ml ที่สองถูกวางไว้ใน 2.0-ml หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ และปริมาณอาร์เอ็นเอทั้งหมด ( และสำหรับชมิดท์ thannhauser , 1945 )