We have previously cloned Dictyoste

We have previously cloned Dictyostelium discoideum calcineurin A (CNA) and established a purification procedure for the recombinant protein expressed in E. coli strain TG1. Purification of the tag-free protein included ammonium sulfate fractionation and affinity chromatography on matrix-bound bovine CaM [13]. Since a fraction of the recombinant protein was complexed with the bac-terial chaperone, GroEL, and since silver staining of SDS poly-acrylamide gels for analysis of samples of the EGTA eluate from the CaM Sepharose column revealed the presence of a number of additional bacterial protein bands a further purification step, namely anion exchange chromatography on MonoQ, was necessary to separate free CNA from CNA/GroEL complexes as well as from further bacterial proteins of the CaM Sepharose eluate. In this chromatographic step, an 88 kDa protein of bacterial origin, eluting in a sharp symmetrical peak before CNA and the CNA/GroEL com-plexes during NaCl gradient elution, was identified.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นอกจากนี้เราเคยมีโคลน calcineurin discoideum Dictyostelium A (CNA) และสร้างกระบวนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับ recombinant โปรตีนแสดงใน E. coli สายพันธุ์ TG1 ทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนฟรีแท็กรวมมซัลเฟตแยกส่วนและความสัมพันธ์ chromatography เมทริกซ์ผูกวัวสาว [13] ตั้งแต่ส่วนของ recombinant โปรตีน complexed ที่ มีพี่เลี้ยงบัค terial, GroEL และตั้งแต่ย้อมสีเงินของ SDS โพลีอะคริลาไมด์เจลสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างของ eluate EGTA จากคอลัมน์ Sepharose แคมเปิดเผยของจำนวนของแถบโปรตีนแบคทีเรียเพิ่มเติมขั้นตอนทำให้บริสุทธิ์ต่อไป คือไอออนที่มีประจุแลกเปลี่ยน chromatography บน MonoQ แก้ไขจำเป็นต้องแยก CNA ฟรี จาก CNA/GroEL คอมเพล็กซ์รวม ทั้ง จากการเพิ่มเติมแบคทีเรียโปรตีนของ eluate CaM Sepharose ในขั้นตอนนี้โครมา พบโปรตีน 88 kDa ของแบคทีเรีย eluting สมมาตรสูงสุดคมชัดก่อน CNA และ com CNA/GroEL เพลกซ์ระหว่าง NaCl ชะไล่ระดับสี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้โคลนก่อนหน้านี้ Dictyostelium discoideum calcineurin A (CNA) และเป็นที่ยอมรับขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับโปรตีนที่แสดงออกใน E. coli สายพันธุ์ TG1 การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนแท็กฟรีรวมแยกแอมโมเนียมซัลเฟตและโครมาความสัมพันธ์ในเมทริกซ์ที่ถูกผูกไว้วัว CAM [13] เนื่องจากส่วนของการโปรตีนถูก complexed กับพี่เลี้ยง BAC-terial, GroEL และตั้งแต่การย้อมสีเงิน SDS เจลโพลีริลาไมด์สำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างของ eluate EGTA จากคอลัมน์ CAM Sepharose เปิดเผยการปรากฏตัวของจำนวนที่เพิ่มขึ้นของเชื้อแบคทีเรีย วงดนตรีโปรตีนบริสุทธิ์ขั้นตอนต่อไปคือไอออนโครมาแลกเปลี่ยนใน MonoQ, จำเป็นที่จะต้องแยกจากฟรี CNA CNA คอมเพล็กซ์ / GroEL รวมทั้งจากโปรตีนจากแบคทีเรียต่อไปของ eluate CAM Sepharose ในขั้นตอนที่โครมานี้ 88 กิโลดาลตันโปรตีนที่ได้จากแบคทีเรีย eluting ในจุดสูงสุดสมมาตรคมก่อน CNA และ CNA / GroEL ดอทคอม plexes ระหว่างโซเดียมคลอไรด์ลาดชะถูกระบุ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขณะนี้มีโคลนก่อนหน้านี้ Diamonds Are Forever แคลซินิวริน ( CNA ) และสร้างกระบวนการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนที่แสดงออกใน E . coli ทรอนด์เฮม ความเครียด การทำให้บริสุทธิ์ของแท็กฟรีโปรตีนรวมและแอมโมเนียม ซัลเฟต ( ขี้รังแคบนเมทริกซ์ผูกพันวัวแคม [ 13 ] เนื่องจากส่วนของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ complexed กับบั๊ก terial คนคุมโกรล และเนื่องจากเงินย้อมโพลีอะคริลาไมด์เจล SDS สำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างของหน่วยสารละลาย ( eluate ) จากแคมเกี่ยวข้องคอลัมน์ พบว่ามีจำนวนของแถบโปรตีนเพิ่มแบคทีเรีย ขั้นตอนต่อไปคือการแลกเปลี่ยนแอนไอออนโครมาโทกราฟีบน monoq , จำเป็น , แยก CNA ฟรีจาก CNA / โกรลเชิงซ้อนเช่นเดียวกับแบคทีเรียเพิ่มเติมโปรตีนของ CAM เกี่ยวข้องการลบที่เกี่ยวข้อง . ในขั้นตอนนี้ และ เป็น 88 kDa โปรตีนของแบคทีเรียที่มา , hexane ในคมสมมาตรสูงสุดก่อน CNA และ CNA / โกรล com plexes NaCl ใช้ในการไล่ระดับสี , ระบุ