2.6. Separation and purification of

2.6. Separation and purification of protease
The culture was harvested after 2 days’ growth at room temperature. The crude enzyme preparation was subjected to ammonium sulphate precipitation, and the harvested culture was filtered through Whatman no. 1 filter paper of pore size 125 mm and centrifuged (REMIC-24BL) at 5000 rpm for 30 min at 4 ◦C. Ammonium sulphate was added slowly to the cell-free culture filtrate at 75% saturation to precipitate the protein, with continuous shaking and a magnetic stirrer. The precipitated protein was separated by centrifugation at 5000 rpm for 30 min and was dissolved in 0.5 mmol/L phosphate buffer, pH 7, dialysed and stored. This source of crude enzyme was used for further enzyme characterization. At each step, the protease activity and total protein content were measured in an ultraviolet spectrophotometer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. การแยกและทำให้บริสุทธิ์ของโปรติเอสวัฒนธรรมถูกเก็บเกี่ยวหลังจากเติบโต 2 วันที่อุณหภูมิห้อง การเตรียมเอนไซม์ดิบได้ภายใต้การแอมโมเนียมซัลเฟตฝน และวัฒนธรรมเก็บเกี่ยวถูกกรองผ่านกระดาษกรอง Whatman เลข 1 ของรูพรุนขนาด 125 มม.และเหวี่ยง (REMIC-24BL) ที่ 5000 rpm 30 นาทีที่ 4 ◦C แอมโมเนียมซัลเฟตถูกช้าการกรองปราศจากเซลล์ที่ 75% อิ่มตัวตกตะกอนโปรตีน มีการสั่นอย่างต่อเนื่องและช้อนคนเป็นแม่เหล็ก โปรตีน precipitated เป็นแยก โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 rpm 30 นาที และละลายในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.5 mmol/L, pH 7, dialysed และเก็บไว้ แหล่งของเอนไซม์ดิบนี้ถูกใช้สำหรับเพิ่มเติมเอนไซม์จำแนกลักษณะ ในแต่ละขั้นตอน กิจกรรมโปรติเอสและโปรตีนทั้งหมดเนื้อหาถูกวัดในสเปครังสีอัลตราไวโอเลต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของน้ำย่อย
วัฒนธรรมเก็บเกี่ยวหลังจากการเจริญเติบโต 2 วันที่อุณหภูมิห้อง การเตรียมเอนไซม์ได้ภายใต้การแอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอนและวัฒนธรรมการเก็บเกี่ยวที่ถูกกรองผ่าน Whatman ไม่มี 1 กระดาษกรองขนาดรูขุมขน 125 มิลลิเมตรและหมุนเหวี่ยง (REMIC-24BL) ที่ 5000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ◦C แอมโมเนียมซัลเฟตถูกเพิ่มเข้ามาช้าไปที่มือถือฟรีกรองวัฒนธรรมอิ่มตัวที่ 75% ที่จะเกิดการตกตะกอนโปรตีนที่มีการสั่นสะเทือนอย่างต่อเนื่องและเครื่องกวนแม่เหล็ก โปรตีนที่ตกตะกอนถูกแยกจากกันโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีและถูกละลายใน 0.5 มิลลิโมล / ลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 7, ไตและเก็บไว้ แหล่งที่มาของเอนไซม์นี้ถูกใช้สำหรับลักษณะเอนไซม์ต่อไป ในแต่ละขั้นตอนกิจกรรมโปรติเอสและปริมาณโปรตีนรวมวัดใน spectrophotometer อัลตราไวโอเลต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของโปรติเอสวัฒนธรรมที่ถูกเก็บเกี่ยวหลังจาก 2 วัน การเจริญเติบโตที่อุณหภูมิห้อง เอนไซม์ที่เตรียมภายใต้แอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอนและเก็บเกี่ยววัฒนธรรมถูกกรองผ่านกระดาษกรอง เบอร์ 1 whatman 125 มิลลิเมตร และขนาดของรูพรุนระดับ ( remic-24bl ) ที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ◦ C แอมโมเนียมซัลเฟตเพิ่มอย่างช้าๆเพื่อการสังเคราะห์ culture filtrate ที่ 75% การตกตะกอนโปรตีนเขย่า อย่างต่อเนื่องและ stirrer แม่เหล็ก ตกตะกอนโปรตีนแยกโดยการเหวี่ยงแยกที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีและละลายได้ใน 0.5 มิลลิโมล / ลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7 , dialysed และเก็บไว้ นี้แหล่งที่มาของเอนไซม์ที่ถูกใช้สำหรับการหาเอนไซม์เพิ่มเติม ในแต่ละขั้นตอน , protease activity และโปรตีนรวมในรังสีอัลตราไวโอเลตจำนวนวัสดุ