been suggested in previous studies

been suggested in previous studies for the quantification of
these specific markers, offering the potential to delineate
human and/or animal fecal contributions in environmental
water matrices (Bofill-Mas et al., 2006, 2013; Hundesa et al.,
2006, 2009 and 2010).
This study aimed to test the applicability of human and
animal adenoviruses and polyomaviruses in widely diverse
river catchments by applying skimmed milk flocculation and
qPCR to define sources of fecal contamination in all areas and
scenarios.
2. Materials and methods
2.1. Control viruses and plasmids
Human adenovirus type 35 (ATCC, LGC Standards AB, Bora° s,
Sweden) stocks were produced by infecting A549 cells
cultured in Earl’s minimum essential medium (EMEM) supplemented
with 1% glutamine, 20 mg of streptomycin and 20U
of penicillin per mL and 10% (growth medium) or 2% (maintenance
medium) of heat-inactivated fetal bovine serum
(FBS). Viruses were released from cells by freezing and thawing
the cultures 3 times. Then, a centrifugation step at 3000 g
for 20 min was applied to eliminate cell debris. Finally, viral
suspensions were quantified, distributed among the participant
laboratories and stored in 3.5-mL aliquots at _80 _C until
used.
Plasmid DNA has been used as a positive control and as a
quantitative standard. For BPyV, a 416-bp amplicon corresponding
to a fragment of the VP1-coding gene was cloned
into a pGEM-T Easy vector (Promega, Madison, WI, USA). The
same vector containing a 612-bp sequence of the PAdV-3
hexon was used for PAdV. Finally, the hexon region
(8961 bp) and the whole genome (5130 bp) of HAdV41 and
JCPyV Mad1 respectively, were cloned in pBR322 and used as
standards for human markers.
2.2. Studied areas
River water and seawater were collected based on ISO 19458
(2006) from five different geographical areas: (i) Llobregat river
catchment in Catalonia (Spain), (ii) Glafkos River in Patras
(Greece), (iii) Umea¨lven River in Umea° (Sweden), (iv) Tisza
River in Szolnok (Hungary) and (v) the Negro River in the urban
area of Manaus (Brazil) (Fig. 1).
The Glafkos River flows into the Gulf of Patras (Ionian Sea)
in Patras, a city of 250,000 inhabitants. The river does not dry
completely during the summer, but stream flow decreases
dramatically. All Glafkos samples were collected bi-monthly
from four sampling sites (Fig. 1): P1 and P2 in the river and
two marine sampling points, P3 and P4, at the beach in the
Gulf of Patras.
The Llobregat river catchment is located in Catalonia,
northeast Spain. It flows for 170 km from the Pyrenees to the
Mediterranean Sea. The river basin contains more than half of
the Catalan population (approximately 5 million people out of
approximately 8 million). The river transports urban sewage
and agricultural runoff into the stream, and it is used as a
source of drinking water after appropriate treatment. The
Llobregat River was sampled bi-monthly at three locations:
80 km upstream of the coast (site L1), downstream near the
city of Barcelona (L2), which has 3 million people, and from
seawater receiving the riverine discharge (L3) (Fig. 1).
The Umea¨lven River in northern Sweden flows in a
southeasterly direction from its origin at LakeO¨ veruman. The

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การแนะนำในการศึกษาก่อนหน้านี้สำหรับการนับของ
เหล่านี้เฉพาะเครื่องหมาย ศักยภาพในการไปนำเสนอ
ผลงาน fecal มนุษย์ หรือสัตว์ในสิ่งแวดล้อม
น้ำเมทริกซ์ (มาส Bofill et al., 2006, 2013 Hundesa et al.,
2006, 2009 และ 2010) .
การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทดสอบความเกี่ยวข้องของมนุษย์ และ
adenoviruses สัตว์และ polyomaviruses ในอย่างกว้างขวางหลากหลาย
catchments แม่น้ำ โดยใช้น้ำนมขาดมันเนย flocculation และ
qPCR การกำหนดแหล่งการปนเปื้อน fecal ในพื้นที่ทั้งหมด และ
สถานการณ์.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 ควบคุมไวรัสและ plasmids
ชนิด adenovirus มนุษย์ 35 (ATCC, LGC มาตรฐาน AB โบ° s,
สวีเดน) หุ้นผลิตเล็ดเซลล์ A549
อ่างในเอิร์ลต่ำสุดจำเป็นปานกลาง (ซีอาร์) เสริม
มี glutamine 1% 20 มิลลิกรัม streptomycin และ 20U
ของยาเพนนิซิลลินต่อ mL และ 10% (เชื้อ) หรือ 2% (บำรุงรักษา
กลาง) ของยกเลิกร้อนครรภ์วัว serum
(FBS) ไวรัสถูกปล่อยออกมาจากเซลล์แช่แข็ง และ thawing
วัฒนธรรม 3 ครั้ง แล้ว centrifugation ขั้นที่ 3000 g
สำหรับใช้เพื่อกำจัดเศษเซลล์ 20 นาที สุดท้าย ไวรัส
บริการถูก quantified การแจกจ่ายระหว่างผู้เข้าร่วม
ห้องปฏิบัติการและ aliquots 3.5 mL เก็บไว้ในที่ _C _80 จน
ใช้
Plasmid DNA ถูกใช้ เป็นตัวควบคุมค่าบวก และเป็นการ
มาตรฐานเชิงปริมาณ สำหรับ BPyV, 416-bp amplicon ตรง
ไปส่วนของ VP1-รหัส ยีนถูกโคลน
เป็น pGEM T ง่ายเวกเตอร์ (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) ใน
เวกเตอร์เดียวกันที่ประกอบด้วยลำดับ 612-bp 3 PAdV
hexon ใช้สำหรับ PAdV สุดท้าย
(8961 bp) ภูมิภาค hexon และทั้งจีโนม (5130 bp) ของ HAdV41 และ
JCPyV Mad1 ตามลำดับ โคลนใน pBR322 และใช้เป็น
มาตรฐานเครื่องหมายมนุษย์.
2.2 ศึกษาพื้นที่
แม่น้ำและทะเลถูกรวบรวมไว้ตาม ISO 19458
(2006) จากพื้นที่ทางภูมิศาสตร์ที่แตกต่างกันห้า: (i) Llobregat ริเวอร์
ลุ่มน้ำในคาตาโลเนีย (สเปน), แม่น้ำ (ii) Glafkos Patras
(Greece) (iii) แม่น้ำ Umea¨lven Umea ° (สวีเดน), Tisza (iv)
แม่น้ำ Szolnok (ฮังการี) และ (v) Negro แม่น้ำเมือง
ของเมโนส (บราซิล) (Fig. 1) .
Glafkos แม่น้ำเจ้าพระยาไหลไปอ่าวของแพทรัสประเทศกรีซ (ทะเลไอโอเนียน)
ในแพทรัสประเทศกรีซ เมืองของประชากร 250000 แม่น้ำแห้ง
อย่างสมบูรณ์ในช่วงฤดูร้อน แต่ลดลงกระแสไหล
อย่างมาก ตัวอย่าง Glafkos ทั้งหมดถูกรวบรวมทุกสองเดือน
จากเว็บไซต์สุ่มสี่ (Fig. 1): P1 และ p 2 ในแม่น้ำ และ
สองทะเลสุ่มจุด P3 และ P4 ที่ชายหาดใน
อ่าวของแพทรัสประเทศกรีซ
ลุ่มน้ำแม่น้ำ Llobregat ตั้งอยู่ในคาตาโลเนีย,
สเปนตะวันออกเฉียงเหนือ มันไหล 170 กิโลเมตรจากพิเรนีสไป
ทะเลเมดิเตอร์เรเนียน ลุ่มแม่น้ำประกอบด้วยมากกว่าครึ่งหนึ่งของ
ประชากรคาตาลัน (ประมาณ 5 ล้านคนจาก
ประมาณ 8 ล้าน) แม่น้ำขนส่งน้ำเสียเมือง
การเกษตรที่ไหลบ่าเข้าไปในกระแสข้อมูล และการ
ดื่มน้ำหลังการรักษาที่เหมาะสม
แม่น้ำ Llobregat เป็นตัวอย่างสองรายเดือนที่สามสถาน:
80 กิโลเมตรต้นน้ำชายฝั่ง (ไซต์ L1), ใกล้น้ำ
เมืองบาเซโลน่า (L2), ซึ่งมี 3 ล้านคน และจาก
ทะเลรับปล่อยริเวอร์ไรน์ (L3) (Fig. 1) .
Umea¨lven แม่น้ำเจ้าพระยาเหนือในสวีเดนทุนหมุนเวียนในการ
southeasterly ทิศทางจากจุดที่ LakeO¨ veruman ใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ได้รับการแนะนำในการศึกษาก่อนหน้านี้ สำหรับปริมาณของ
เครื่องหมายที่เฉพาะเจาะจงเหล่านี้เสนอศักยภาพในการอธิบาย
มนุษย์และ / หรือสัตว์ในน้ำอุจจาระ ผลงานเชิงสิ่งแวดล้อม
( Bofill Mas et al . , 2006 ) ;
hundesa et al . , 2006 , 2009 และ 2010 ) .
การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทดสอบการใช้ของมนุษย์และสัตว์ และ polyomaviruses
Adenoviruses อย่างกว้างขวางหลากหลาย
แม่น้ำ catchments โดยใช้นมรวมตะกอนและ
qpcr เพื่อกำหนดแหล่งที่มาของอุจจาระที่ปนเปื้อนในพื้นที่ทั้งหมด และสถานการณ์
.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . ไวรัส การควบคุมและพลาสมิด
มนุษย์โนไวรัสชนิด 35 ( มาตรฐาน lgc ATCC , AB โบรา / S ,
สวีเดน ) หุ้นถูกผลิตโดยเซลล์เพาะเลี้ยงติด a549
ในเอิร์ลขั้นต่ำที่จำเป็นเสริมกลาง มเ ม )
1 % และ20 มิลลิกรัม และ streptomycin 20u
ยาต่อมิลลิลิตร และ 10% ของอาหารเลี้ยงเชื้อ ) หรือ 2% ( รักษา
2 ) ซึ่งความร้อนของวัวเซรั่ม
( FBS ) ไวรัสถูกปล่อยออกมาจากเซลล์ โดยการแช่แข็งและละลาย
วัฒนธรรม 3 ครั้ง จากนั้น ปั่นขั้นตอนที่ 3000 g
20 นาทีถูกนำมาใช้เพื่อกำจัดเศษเซลล์ ในที่สุด , ไวรัส
แขวนลอยและปริมาณการกระจายในหมู่ผู้เข้าร่วม
ห้องปฏิบัติการและเก็บไว้ใน 3.5-ml เฉยๆที่ _80 _c จน

ใช้พลาสมิดดีเอ็นเอถูกใช้เป็นบวก การควบคุมและเป็น
มาตรฐานเชิงปริมาณ สำหรับ bpyv , 416 BP และสอดคล้องกับชิ้นส่วนของนะครับ

vp1 ถูกโคลนยีนใน pgem-t ง่ายเวกเตอร์ ( promega เมดิสัน , WI , USA )
เดียวกันเวกเตอร์ที่มี 612 BP ลำดับ Hexon padv-3
ใช้ padv . ในที่สุดการ Hexon เขต
( 8961 BP ) และจีโนมทั้งหมด ( 1 คู่ ) และ hadv41
jcpyv mad1 ตามลำดับโคลนใน pbr322 และใช้เป็นมาตรฐานสำหรับมนุษย์เครื่องหมาย
.
2.2 . พื้นที่ศึกษา
น้ำแม่น้ำ และทะเล ศึกษาตาม ISO 19458
( 2006 ) จากห้าที่แตกต่างกันทางภูมิศาสตร์พื้นที่ : ( i )
ลุ่มน้ำในแม่น้ำ Llobregat เนีย ( สเปน ) , ( 2 ) glafkos แม่น้ำใน Patras
( กรีซ )( 3 ) ตั้ง lven แม่น้ำใน Umea Umea บริเวณ ( สวีเดน ) , ( iv ) ทิสซา
แม่น้ำในโซลนอค ( ฮังการี ) และ ( 5 ) นิโกรแม่น้ำในเมือง
พื้นที่ของมาเนาส์ ( บราซิล ) ( รูปที่ 1 )
glafkos แม่น้ำไหลลงสู่อ่าวพาทราส ( Ionian Sea )
ในพาทราสเป็นเมืองของ 250 , 000 คน แม่น้ำไม่แห้ง
อย่างสมบูรณ์ ในช่วงซัมเมอร์ แต่กระแสการไหลลดลง
อย่างมาก ทั้งหมด glafkos ตัวอย่างรายเดือน
บิจากสี่เว็บไซต์ตัวอย่าง ( รูปที่ 1 ) : P1 กับ P2 ในแม่น้ำและทะเล (
2 จุด , P3 และ P4 ที่ชายหาดในอ่าวพาทราส
.
ลุ่มน้ำแม่น้ำ Llobregat ตั้งอยู่ในคาตาโลเนีย
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือสเปน มันไหล 170 km จาก Pyrenees กับ
ทะเลเมดิเตอร์เรเนียน ลุ่มน้ำที่มีมากกว่าครึ่งหนึ่งของประชากร
คาตาลัน ( ประมาณ 5 ล้านคนออกจาก
ประมาณ 8 ล้านบาท ) แม่น้ำขนส่งสิ่งปฏิกูลและการเกษตรในเขตเมือง
น้ำลำธาร และมันถูกใช้เป็นแหล่งที่มาของน้ำดื่ม
หลังการรักษาที่เหมาะสม
Llobregat แม่น้ำตัวอย่างบีรายเดือนที่ 3 สถานที่ :
80 km เหนือชายฝั่ง ( ไซต์ L1 ) ดาวน์ใกล้
เมืองบาร์เซโลนา ( L2 ) ซึ่งมี 3 ล้านคน และจาก
น้ำทะเลรับตัวจำหน่าย ( L3 ) ( รูปที่ 1 ) .
Umea ตั้ง lven แม่น้ำในสวีเดนภาคเหนือไหลในทิศทาง southeasterly
ที่มาจากของที่ lakeo ตั้ง veruman .