Orthopoxviruses code for numerous i

Orthopoxviruses code for numerous immunomodulatory proteins, the structure and function of which are clarified inadequately. Antibodies constitute a potent tool to study such proteins, enabling conclusions on protein location and time course of expression. However, common antibody production in mice or rabbits requires tedious protein expression and injection, as well as blood collection at regular intervals.

To simplify this procedure, IgY antibodies specific for poxviral proteins (F1L and p28) were generated by immunisation of chickens, because antibody retrieval from eggs allows the non-invasive generation of huge amounts of antibodies. The main intentions were (i) to decrease invasiveness, (ii) to immunise with native forms of proteins and (iii) to circumvent previous protein expression and purification. Therefore, chicken were immunised with DNA expression vectors coding for conserved domains of the selected proteins delivered for the first time by a gene gun. Four weeks after initial immunisation specific antibodies were found in the egg yolk as proven by immunofluorescence staining of poxvirus-infected cells. The specific IgY titre rose to 1:80,000 and was stable for more than 120 days. With this investigation we present an universal procedure for IgY design and production that can be applied for various issues in the future.

Keywords

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รหัส Orthopoxviruses immunomodulatory จำนวนมากโปรตีน โครงสร้าง และฟังก์ชันที่มีขึ้ inadequately แอนตี้เป็นเครื่องมือที่มีศักยภาพเพื่อศึกษาเช่นโปรตีน เปิดบทสรุปโปรตีนสถานที่และเวลาเรียนของนิพจน์ อย่างไรก็ตาม ร่วมกันผลิตแอนติบอดีในหนูหรือกระต่ายต้องน่าเบื่อโปรตีนนิพจน์ และฉีด ตลอดจนเก็บเลือดอย่างสม่ำเสมอการทำขั้นตอนนี้ แอนตี้ IgY เฉพาะสำหรับโปรตีน poxviral (F1L และ p28) สร้างขึ้น โดย immunisation ไก่ เพราะเรียกแอนติบอดีจากไข่ช่วยให้การสร้างจำนวนมากของแอนตี้ไม่รุกราน ความตั้งใจหลัก (i) เพื่อ ลด invasiveness, (ii) immunise มีโปรตีนในรูปแบบดั้งเดิม และ (iii) หลีกเลี่ยงโปรตีนก่อนหน้านิพจน์และฟอกได้ ดังนั้น ไก่ถูก immunised กับเวกเตอร์นิพจน์ดีเอ็นเอรหัสสำหรับโดเมนนำของโปรตีนเลือกที่ส่งครั้งแรก โดยปืนยีน 4 สัปดาห์หลังจากเริ่มต้น immunisation แอนตี้เฉพาะพบในไข่แดงเป็นพิสูจน์ immunofluorescence ย้อมสีของเซลล์ที่ติดไวรัส poxvirus Titre IgY เฉพาะยัง 1:80,000 และมีเสถียรภาพมากกว่า 120 วัน มีการตรวจสอบนี้ เรานำเสนอกระบวนการสากล IgY ออกแบบและผลิตที่สามารถใช้สำหรับปัญหาต่าง ๆ ในอนาคตคำสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รหัส Orthopoxviruses โปรตีนภูมิคุ้มกันต่าง ๆ นานาโครงสร้างและฟังก์ชั่นที่มีการชี้แจงไม่เพียงพอ แอนติบอดีเป็นเครื่องมือที่มีศักยภาพในการศึกษาโปรตีนดังกล่าวช่วยให้ข้อสรุปเกี่ยวกับสถานที่ตั้งของโปรตีนและเวลาที่แน่นอนในการแสดงออก อย่างไรก็ตามการผลิตแอนติบอดีที่พบในหนูหรือกระต่ายต้องมีการแสดงออกของโปรตีนที่น่าเบื่อและการฉีดเช่นเดียวกับคอลเลกชันของเลือดในช่วงเวลาปกติ. เพื่อลดความซับซ้อนของขั้นตอนนี้แอนติบอดี้ IGY ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับโปรตีน poxviral (F1L และ p28) ถูกสร้างขึ้นโดยการสร้างภูมิคุ้มกันของไก่เพราะแอนติบอดี ดึงออกมาจากไข่จะช่วยให้คนรุ่นไม่รุกรานของจำนวนมากของแอนติบอดี ความตั้งใจหลักคือ (i) เพื่อลดการรุกราน (ii) การฉีดวัคซีนที่มีรูปแบบพื้นเมืองของโปรตีนและ (iii) เพื่อหลีกเลี่ยงการแสดงออกของโปรตีนและการทำให้บริสุทธิ์ก่อนหน้า ดังนั้นไก่ได้รับวัคซีนที่มีการแสดงออกพาหะดีเอ็นเอเข้ารหัสสำหรับโดเมนอนุรักษ์ของโปรตีนที่เลือกส่งเป็นครั้งแรกโดยปืนยีน สี่สัปดาห์หลังจากที่เริ่มต้นการสร้างภูมิคุ้มกันโรคภูมิคุ้มกันเฉพาะที่พบในไข่แดงเป็นการพิสูจน์โดยการย้อมสีอิมมูโนของเซลล์ที่ติดเชื้อ poxvirus เฉพาะ titre IGY เพิ่มขึ้นถึง 1: 80,000 และมีเสถียรภาพมานานกว่า 120 วัน ด้วยการตรวจสอบนี้เรานำเสนอขั้นตอนสากลสำหรับการออกแบบและการผลิต IGY ที่สามารถนำมาใช้สำหรับปัญหาต่างๆในอนาคต. คำสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รหัส orthopoxviruses โปรตีนเซลล์มากมาย โครงสร้างและหน้าที่ซึ่งมีการชี้แจงอย่างไม่พอเพียง . แอนติบอดีเป็นเครื่องมือที่มีศักยภาพเพื่อการศึกษาโปรตีนดังกล่าวให้ข้อสรุปตำแหน่งโปรตีนและแน่นอนเวลาของการแสดงออก อย่างไรก็ตาม การผลิตแอนติบอดีที่พบในหนู หรือกระต่ายต้องมีการแสดงออกของโปรตีนที่น่าเบื่อและฉีดยารวมทั้งการเก็บเลือดในช่วงเวลาปกติ

เพื่อลดความซับซ้อนของขั้นตอนนี้ igy แอนติบอดีต่อโปรตีน poxviral ( f1l และ p28 ) ถูกสร้างขึ้นโดยคนไก่ เพราะการดึงจากไข่ช่วยให้การผลิตหลักของยอดเงินขนาดใหญ่ของแอนติบอดี ความตั้งใจหลักคือ ( 1 ) ลดการผ่าตัด( 2 ) การฉีดภูมิคุ้มกันโรคกับรูปแบบดั้งเดิมของโปรตีน และ ( 3 ) เพื่อหลีกเลี่ยงการแสดงออกของโปรตีนก่อนหน้า และบริสุทธิ์ ดังนั้น ไก่เป็น immunised กับดีเอ็นเอการแสดงออกของเวกเตอร์การเข้ารหัสสำหรับโดเมนของโปรตีนสามารถเลือกส่งเป็นครั้งแรก โดยปืนยีน .สี่สัปดาห์หลังจากเริ่มต้นหลายแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงที่พบในไข่แดง พิสูจน์แล้วว่าเป็นวิธีการของ poxvirus ติดเชื้อเซลล์ การ titre igy เฉพาะกุหลาบ 1:80000 และมั่นคงมากกว่า 120 วัน กับการสืบสวนนี้ เราได้นำเสนอขั้นตอนสากลสำหรับ igy การออกแบบและการผลิตที่สามารถใช้สำหรับปัญหาต่างๆในอนาคต

คำสำคัญ