2. Experimental2.1. Plant materialS

2. Experimental
2.1. Plant material
Samples of dried leaves of H. perforatum (St. John’s wort), L.angustifolia (lavender), M. sylvestris (tall mallow), M. officinalis(lemon balm), S. officinalis (sage) and R. officinalis (rosemary) were purchased in commercials stores.
2.2. Chemical
Rosmarinic acid was purchased from Extrasynthese (Genay,France). Acetonitrile was acquired from Merck (Darmstadt, Germany).Trichloroacetic acid and ethanol absolute were obtained from Panreac (Barcelona, Spain). Methanol and 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl
(DPPH) were purchased from Sigma–Aldrich (Steinheim,Germany).
2.3. Ultrasonic extracts preparation
The extracts were prepared by weighing 1 g of dry leaves, added to 10 mL of absolute ethanol and placed in a 250 mL Erlenmeyer conical flask. The ultrasound bath (Sonorex Super RK 510 H; Bandelin, Berlin, Germany) was operated at frequency of 35 kHz with
maximum input power of 320 W, for 15 min, at room temperature.
During the ultrasound irradiation the temperature rise was controlled by adding ice to the water bath to decrease and maintain the temperature during the whole extraction procedure. The filtrated extracts were dried on the rotary evaporator.
2.4. TLC-DPPH analysis
A TLC (Thin Layer Chromatography) was performed by applying 10 lL of each of the extracts (1 mg/mL) to silica gel GF254 using ethanol as eluent. After drying, the TLC plates were sprayed with a 0.2% (v/v) DPPH solution in methanol. Ascorbic acid was used
as positive control and ethanol as negative control. Extracts with the capacity to reduce DPPH appeared as yellow spots against a purple background [19].
2.5. DPPH antioxidant assay
DPPH method was used to evaluate the radical scavenging activity. 10 lL of each extract sample were added to a 990 lLof DPPH solution (0.002% in methanol). The mixture was incubated for 30 min at room temperature and the absorbance was measured at 517 nm against a corresponding blank and the antioxidant activity was calculated (Eq. (1)) as:
2.6. HPLC analysis
For each plant sample, a solution of 10 mg of dry extract per mL of methanol was prepared.From a 10 mM rosmarinic acid methanolic standard solution, it was prepared by dilution eight other new standards of 0.05, 0.10,0.30, 0.50, 0.70, 1.0, 1.5 and 2.0 mM.
The HPLC quantification was carried out in an Agilent Technologies 1100 equipped with a LiChrospher100, RP-18 (250  4 mm,5lm) column, from Merck. The extracts were analyzed injecting 20 lL and using a gradient composed of solution A (methanol),solution B (acetonitrile) and solution C (0.3% trichloroacetic acid in water) as follows: 0 min, 15% A, 5% B and 80% C; 20 min, 80%A, 10% B and 10% C and 25 min, 80% A, 10% B and 10% C. The flow rate was set at 1 mL/min. The standards were run under the same
conditions using solutions in methanol and the detection was carried out at 270 nm. All analyzes were performed in triplicate [21].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. ทดลอง2.1. พืชวัสดุตัวอย่างของใบแห้งของ H. perforatum (St. John's wort), L.angustifolia (ลาเวนเดอร์), ม.อิน (mallow สูง), M. officinalis (สะระแหน่), S. officinalis (sage) และ R. officinalis (โรสแมรี่) ซื้อในร้านค้าโฆษณา2.2. เคมีกรด Rosmarinic ซื้อจาก Extrasynthese (Genay ฝรั่งเศส) Acetonitrile ถูกซื้อจากเมอร์ค (ดาร์มสตัดท์ เยอรมัน) Trichloroacetic กรดและเอทานอลที่แน่นอนได้รับจาก Panreac (บาร์เซโลนา สเปน) เมทานอลและ 2.2 นไดฟีนิลได-1picrylhydrazyl(DPPH) ซื้อจาก Sigma-Aldrich (Steinheim เยอรมนี)2.3. การเตรียมสารสกัดจากอัลตราโซนิกสารสกัดถูกเตรียม โดยชั่งน้ำหนัก 1 กรัมของใบแห้ง เพิ่มแน่นอนเอทานอล 10 มิลลิลิตร และวางไว้ใน flask กรวยใน Erlenmeyer 250 มล. การอาบน้ำอัลตร้าซาวด์ (Sonorex Super RK 510 ชม.; ดำเนินการ Bandelin เบอร์ลิน เยอรมนี) ที่ความถี่ของ 35 kHz ด้วยกำลังขับสูงสุดของ 320 W, 15 นาที ที่อุณหภูมิห้องในระหว่างฉายรังสีอัลตร้าซาวด์ อุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นถูกควบคุม โดยการเพิ่มน้ำแข็งอาบน้ำเพื่อลด และรักษาอุณหภูมิในระหว่างกระบวนการสกัดทั้งหมด สารสกัดจาก filtrated ที่แห้งกับเครื่องระเหยแบบหมุน2.4 วิเคราะห์ TLC DPPHTLC (บาง Layer Chromatography) ทำ โดยใช้ 10 lL ของสารสกัด (1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) กับซิลิกาเจล GF254 โดยใช้เอทานอลเป็น eluent แต่ละ หลังจากการอบแห้ง แผ่น TLC ถูกพ่นสารละลาย DPPH 0.2% (v/v) ในเมทานอล ใช้กรดแอสคอร์บิคควบคุมบวกและเอทานอลเป็นตัวควบคุมค่าลบ สารสกัดที่ มีความจุลด DPPH ปรากฏเป็นจุดสีเหลืองกับสีม่วงพื้นหลัง [19]2.5. DPPH assay สารต้านอนุมูลอิสระวิธี DPPH ถูกใช้ในการประเมินกิจกรรมการ scavenging รุนแรง 10 lL ของแต่ละอย่างแยกเพิ่มโซลูชัน DPPH 990 lLof (0.002% ในเมทานอล) ส่วนผสมมี incubated 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และค่าที่ถูกวัดที่ 517 nm กับช่องว่างที่สอดคล้องกันและกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระถูกคำนวณ (Eq. (1)) โดย:2.6. วิเคราะห์ HPLCอย่างพืช ถูกเตรียมสารละลาย 10 มิลลิกรัมของสารสกัดแห้งต่อมิลลิลิตรของเมทานอล จาก 10 มม. rosmarinic กรด methanolic สารละลายมาตรฐาน มันถูกเตรียมเจือจางแปดมาตรฐานอื่น ๆ ใหม่ 0.05, 0.10,0.30, 0.50, 0.70, 1.0, 1.5 และ 2.0 mMHPLC quantification ได้ดำเนินการใน 1100 เทคโนโลยี Agilent ที่มี LiChrospher100 คอลัมน์ RP-18 (250 มม. 4, 5lm) จากเมอร์ค สารสกัดได้วิเคราะห์การฉีด 20 lL และใช้การไล่ระดับสีประกอบด้วยโซลูชัน A (เมทานอล), โซลูชัน B (acetonitrile) และโซลูชัน C (0.3% trichloroacetic กรดในน้ำ) เป็นดังนี้: 0 นาที 15% A, 5% B และ 80% C 20 นาที 80 A %, 10% B และ 10% C และนาที 25, A 80%, 10% B และ 10% ค การตัดค่าเสื่อมราคาถูกกำหนดที่ 1 มิลลิลิตร/นาที มาตรฐานถูกเรียกใช้ภายใต้เหมือนกันเงื่อนไขโดยใช้โซลูชั่นในเมทานอลและตรวจหาการดำเนินการที่ 270 nm ทั้งหมดวิเคราะห์ดำเนินการลข้อ [21]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. การทดลอง
2.1 วัสดุจากพืช
ตัวอย่างใบแห้งของเอช perforatum (สาโทเซนต์จอห์น) L.angustifolia (Lavender), M. sylvestris (ชบาสูง), เอ็มของ cinalis Fi (มะนาวบาล์ม), เอสของ cinalis Fi (เก่ง) และอาร์ของ cinalis Fi (โรสแมรี่) กำลังซื้อในร้านค้าโฆษณา.
2.2 เคมี
กรด Rosmarinic ซื้อจาก Extrasynthese (Genay ฝรั่งเศส) acetonitrile ได้มาจากเมอร์ (Darmstadt, เยอรมนี) กรด .Trichloroacetic และเอทานอลที่แน่นอนได้รับจาก Panreac (บาร์เซโลน่า, สเปน) เมทานอลและ 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl
(DPPH) ที่ซื้อมาจาก Sigma-Aldrich (Steinheim, เยอรมนี).
2.3 สารสกัดจากอัลตราโซนิกการเตรียม
สารสกัดถูกจัดทำขึ้นโดยการชั่งน้ำหนัก 1 กรัมของใบแห้งเพิ่ม 10 มลเอทานอลที่แน่นอนและอยู่ใน 250 มล Erlenmeyer กรวย FL ถาม อาบน้ำอัลตราซาวนด์ (Sonorex ซูเปอร์ RK 510 H; Bandelin, เบอร์ลิน, เยอรมนี) เป็นผู้ดำเนินการที่ความถี่ 35 เฮิร์ทซ์กับ
กำลังไฟฟ้าเข้าสูงสุด 320 W, 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง.
ในระหว่างการฉายรังสีอัลตราซาวนด์อุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นถูกควบคุมโดยการเพิ่ม น้ำแข็งอ่างน้ำเพื่อลดและรักษาอุณหภูมิในระหว่างขั้นตอนการสกัดทั้ง สารสกัด Fi ltrated แห้งในเครื่องระเหยแบบหมุน.
2.4 TLC-DPPH วิเคราะห์
เอาใจใส่ (ทินเลเยอร์โคร) ได้ดำเนินการโดยใช้ 10 LL ของแต่ละสารสกัด (1 mg / ml) เพื่อซิลิกาเจล GF254 ใช้เอทานอลเป็นตัวชะ หลังจากการอบแห้งแผ่น TLC ถูกพ่นด้วย 0.2% (V v /) สารละลาย DPPH ในเมทานอล วิตามินซีได้ถูกใช้ใน
การควบคุมในเชิงบวกและเอทานอลเป็นตัวควบคุมเชิงลบ สารสกัดที่มีความจุในการลด DPPH ปรากฏเป็นจุดสีเหลืองกับพื้นหลังสีม่วง [19].
2.5 สารต้านอนุมูลอิสระ DPPH ทดสอบ
วิธี DPPH ถูกใช้ในการประเมินผลกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ 10 LL ของตัวอย่างสารสกัดแต่ละถูกเพิ่มเข้าไปในการแก้ปัญหา 990 lLof DPPH (0.002% ในเมทานอล) ส่วนผสมที่ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ 517 นาโนเมตรที่สอดคล้องกับที่ว่างเปล่าและฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่คำนวณได้ (สมการ (1).) รวม:
2.6 วิเคราะห์ HPLC
สำหรับตัวอย่างแต่ละโรงงาน, การแก้ปัญหาของ 10 มิลลิกรัมของสารสกัดแห้งต่อมิลลิลิตรเมทานอลเป็น prepared.From เมทานอลกรดสารละลายมาตรฐานขนาด 10 MM rosmarinic มันถูกจัดทำขึ้นโดยการลดสัดส่วนแปดมาตรฐานใหม่อื่น ๆ 0.05, 0.10,0.30, 0.50, 0.70, 1.0, 1.5 และ 2.0 มม.
HPLC quanti ไอออนบวก Fi ได้ดำเนินการใน Agilent Technologies 1100 พร้อมกับ LiChrospher100, RP-18 (250? 4 มม 5lm) คอลัมน์จากเมอร์ สารสกัดที่ได้มาวิเคราะห์การฉีด 20 LL และการใช้การไล่ระดับสีที่ประกอบด้วยการแก้ปัญหา (เมทานอล), การแก้ปัญหา B (acetonitrile) และวิธีการแก้ปัญหา C (0.3% กรดไตรคลอโรในน้ำ) เป็นดังนี้: 0 นาทีที่ 15% และ 5% B และ 80 C%; 20 นาที, 80% A, B 10% และ 10% C และ 25 นาที, 80% A, B 10% และ 10% ซีอัตราโอ๊ยชั้นตั้งอยู่ที่ 1 มิลลิลิตร / นาที มาตรฐานที่ได้รับการทำงานภายใต้เดียวกัน
เงื่อนไขการใช้โซลูชั่นในเมทานอลและการตรวจสอบได้ดำเนินการที่ 270 นาโนเมตร การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า [21]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . ทดลอง2.1 . วัสดุจากพืชตัวอย่างของใบแห้ง ( h perforatum เซนต์ John " s Wort ) l.angustifolia ( ลาเวนเดอร์ ) , ม. sylvestris ( จำพวกสูง ) ม. ของจึง cinalis ( สะระแหน่ ) , S . ของจึง cinalis ( ปราชญ์ ) และ อาร์ ของจึง cinalis ( โรส ) ซื้อในโฆษณาร้านค้า2.2 . เคมีrosmarinic กรดถูกซื้อจาก extrasynthese ( genay , ฝรั่งเศส ) ไนได้มาจากเมอร์ค ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) trichloroacetic acid และเอทานอลที่แน่นอนได้จาก panreac ( บาร์เซโลนา ) 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl เมทานอลและ( dpph ) ซื้อจาก Sigma –ดิช ( steinheim , เยอรมัน )2.3 ด้วยสารสกัดจากเตรียมสารสกัดที่เตรียมได้โดยการชั่งน้ำหนัก 1 กรัมของใบแห้ง เพิ่ม 10 มล. สัมบูรณ์และเอทานอลอยู่ใน 250 ml เออร์เลนเมเยอร์รูปกรวยflถาม อัลตราซาวด์บาท ( sonorex ซูเปอร์ RK 510 H ; bandelin , เบอร์ลิน , เยอรมนี ) คือทำงานที่ความถี่ 3 kHz ด้วยการป้อนพลังงานสูงสุด 320 W สำหรับ 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องในระหว่างการฉายรังสีอัลตราซาวนด์ขึ้นอุณหภูมิถูกควบคุมโดยเติมน้ำแข็งให้นํ้าลดและรักษาอุณหภูมิในขั้นตอนการสกัดทั้งหมด จึง ltrated สารสกัดแห้งในเครื่องระเหยแบบหมุน2.4 . การวิเคราะห์ tlc-dpphเป็น TLC ( Thin layer chromatography ) กำหนด โดยจะใช้ 10 ของแต่ละสารสกัดจาก ( 1 mg / ml ) gf254 ซิลิกาเจลที่ใช้เอทานอลเป็นนี้ หลังจากการอบแห้ง , TLC แผ่นพ่น 0.2% ( v / v ) dpph สารละลายเมทานอล ใช้กรดแอสคอร์บิคเป็นตัวควบคุมบวกและเอทานอลเป็นตัวควบคุมลบ สารสกัดที่มีความสามารถในการลด dpph ปรากฏเป็นจุดสีเหลืองกับสีม่วงพื้นหลัง [ 19 ]2.5 dpph antioxidant assayวิธี dpph ประเมินผลเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาในกิจกรรม 10 จะของแต่ละสารสกัดจากจำนวนเพิ่มเป็น 582 llof dpph โซลูชั่น ( 0.002 % เมทานอล ) ส่วนผสมจะถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และค่าวัดที่ 517 nm กับที่ว่างที่สอดคล้องกันและสารต้านอนุมูลอิสระคำนวณ ( อีคิว ( 1 ) ) โดย :2.6 การวิเคราะห์ HPLCสำหรับแต่ละโรงงานตัวอย่างซึ่งเป็นโซลูชั่น 10 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร สารสกัดแห้งของเมทานอลที่เตรียมไว้ จาก 10 มม. rosmarinic เมทานอลกรดมาตรฐานโซลูชั่น มันถูกเตรียมโดยการเจือจางแปดอื่น ๆมาตรฐานใหม่ของทาง 0.10, 0.30 , 0.60 , 0.70 , 1.0 , 1.5 และ 2.0 มม.พบในการไฟฟ้าจึงได้ดําเนินการในเทคโนโลยี Agilent 1100 พร้อม lichrospher100 rp-18 ( 4 , 250 มิลลิเมตร 5lm ) คอลัมน์ จากบริษัทเมอร์ค สารสกัดที่นำมาฉีด 20 จะใช้ไล่ระดับ ประกอบด้วย โซลูชั่น ( เมทานอล ) สารละลาย ( ไน ) และโซลูชั่น C ( 0.3 % กรดไตรคลอโรอะซิติกในน้ำ ) เป็นดังนี้ : 0 นาที 15 % , 5 % B และ 80 % C ; 20 นาที 80 % เป็น 10 % B และ 10 % C 25 นาที 80 % เป็น 10 % และ 10 % C flโอ้วคะแนนเท่ากับ 1 มิลลิลิตร / นาที มาตรฐานก็วิ่งตามเหมือนกันเงื่อนไขการใช้โซลูชั่นในเมทานอลและสามารถดำเนินการที่ 270 นาโนเมตร ทั้งหมดที่วิเคราะห์ได้ทั้งสามใบ [ 21 ]