The herpesvirus life cycle involves

The herpesvirus life cycle involves a step where newly formed capsids leave the nucleus by translocating across the intact nuclear envelope (NE). Little is known about the role of cellular factors during nuclear egress. We sought to identify novel cellular proteins that interact with the conserved herpes simplex virus-1 (HSV-1) pUL34 by performing a yeast two-hybrid screen. pUL34 was chosen due to its crucial and multifunctional role during nuclear egress. From 42 cellular factors that interacted with pUL34 in yeast, twelve were further evaluated in mammalian cells by co-localization studies using immunofluorescence. No specific co-location between the tested cellular factors and pUL34 was observed in infected cells, thus the screen failed to convincingly identify novel pUL34 interactors. In the second part of the thesis we addressed the functional significance of the cellular protein torsinA (TA) in the HSV-1 life cycle. We became interested in TA due to its role in maintaining normal NE morphology. We showed that perturbing the normal function of TA through overexpression impaired HSV-1 replication and caused a defect in capsid nuclear egress. In mouse embryonic fibroblasts that failed to express TA (TA-/-MEFs), HSV-1 replication was also inhibited, but a defect in capsid nuclear egress was not apparent. Strikingly, infection in TA-null MEFs induced a NE breakdown, the extent of which was dependent on viral products involved in nuclear egress. The viral growth defect and NE envelope breakdown, however, seem to be TA-null cell line specific rather than a functional consequence of TA loss as indicated by TA-/-MEFs reconstituted with TA and 293T with reduced TA levels. In conclusion, overexpression and loss of TA have different effects on the HSV-1 life cycle.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วงจรชีวิต herpesvirus เกี่ยวข้องกับขั้นตอนที่ capsids เพิ่งตั้งขึ้นใหม่ออกจากนิวเคลียสโดย translocating ทั่วซองจดหมายนิวเคลียร์เหมือนเดิม (NE) เล็ก ๆ น้อย ๆ เป็นที่รู้จักกันเกี่ยวกับบทบาทของปัจจัยโทรศัพท์มือถือในระหว่างการออกไปข้างนอกนิวเคลียร์ เราพยายามที่จะระบุตัวตนของเซลล์โปรตีนนวนิยายที่ติดต่อกับป่าสงวนเริม simplex ไวรัส-1 (HSV-1) pul34 โดยการดำเนินการยีสต์สองจอไฮบริดpul34 ได้รับการคัดเลือกเนื่องจากบทบาทสำคัญและมัลติฟังก์ชั่ในช่วงออกไปข้างนอกนิวเคลียร์ จากโทรศัพท์มือถือ 42 ปัจจัยที่มีความสัมพันธ์กับ pul34 ในยีสต์สิบสองได้รับการประเมินต่อไปในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมโดยการศึกษาร่วมแปลโดยใช้วิธี immunofluorescence ไม่เฉพาะเจาะจง co-location ระหว่างปัจจัยโทรศัพท์มือถือที่ผ่านการทดสอบและ pul34 พบว่าในเซลล์ที่ติดเชื้อ,ดังนั้นหน้าจอล้มเหลวที่จะตะล่อมระบุนวนิยาย pul34 interactors ในส่วนที่สองของวิทยานิพนธ์เราที่สำคัญการทำงานของโทรศัพท์มือถือ Torsina โปรตีน (TA) ในวงจรชีวิตของ HSV-1 เรากลายเป็นที่สนใจในตาเนื่องจากบทบาทของตัวเองในการรักษาลักษณะทางสัณฐานวิทยา ne ปกติเราแสดงให้เห็นว่ารบกวนการทำงานปกติของตาแสดงออกผ่านการด้อยค่าการจำลองแบบ HSV-1 และก่อให้เกิดข้อบกพร่องในการออกไปข้างนอกนิวเคลียร์ capsid ในเซลล์ตัวอ่อนเมาส์ที่ล้มเหลวด่วน ta (ta-/-mefs), HSV-1 ทำแบบจำลองยังสามารถยับยั้ง แต่ข้อบกพร่องในการออกไปข้างนอกนิวเคลียร์ capsid ไม่ชัดเจน เปี๊ย, การติดเชื้อใน TA-null MEFS เหนี่ยวนำให้เกิดการสลาย ne,ขอบเขตของการซึ่งขึ้นอยู่กับผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องกับการติดเชื้อไวรัสออกไปข้างนอกนิวเคลียร์ ข้อบกพร่องการเจริญเติบโตของเชื้อไวรัสและรายละเอียดซองจดหมาย ne แต่ดูเหมือนจะเป็นสายพันธุ์ของเซลล์ TA-โมฆะเฉพาะเจาะจงมากกว่าผลการทำงานของการสูญเสียตาตามที่ระบุไว้โดย ta-/-mefs สร้างขึ้นด้วยตาและ 293T มีระดับตาที่ลดลง ในข้อสรุป,แสดงออกและการสูญเสียตามีผลกระทบที่แตกต่างกันเกี่ยวกับวงจรชีวิตของ HSV-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วงจรชีวิตสไวรัสเกี่ยวข้องกับขั้นตอนที่ capsids รูปแบบใหม่จากที่นิวเคลียส โดย translocating ข้ามซองนิวเคลียร์เหมือนเดิม (NE) ทราบเกี่ยวกับบทบาทของโทรศัพท์มือถือตัวน้อยระหว่าง egress นิวเคลียร์ เราพยายามที่จะระบุโปรตีนเซลนวนิยายที่โต้ตอบได้ โดยการทำหน้าจอสองผสมยีสต์นำเริมไวรัส 1 (HSV-1) pUL34 pUL34 ถูกเลือกเนื่องจากบทบาทความสำคัญ และโดยระหว่าง egress นิวเคลียร์ จาก 42 โทรศัพท์มือถือตัวที่ interacted กับ pUL34 ในยีสต์ twelve ได้เพิ่มเติมประเมินใน mammalian เซลล์ โดยใช้ immunofluorescence ศึกษาร่วมแปล ไม่ตั้งร่วมเฉพาะระหว่างปัจจัยทดสอบโทรศัพท์มือถือและ pUL34 ถูกพบในเซลล์ที่ติดเชื้อ ดังนั้น หน้าจอล้มเหลว convincingly ระบุ interactors pUL34 นวนิยาย ในส่วนสองของวิทยานิพนธ์เราระบุความสำคัญหน้าที่ของโปรตีนเซล torsinA (TA) ในวงจรชีวิตของ HSV-1 เรากลายเป็นสนใจในต้าเนื่องจากบทบาทของมันในการรักษาสัณฐานวิทยา NE ปกติ เราพบว่า perturbing การทำงานปกติของ TA ผ่าน overexpression ผู้พิการทางการจำลองแบบ HSV 1 และเกิดข้อบกพร่องใน capsid egress นิวเคลียร์ ใน fibroblasts ตัวอ่อนเมาส์ที่ล้มเหลวในการแสดง TA (TA-/ -MEFs), ยังถูกห้ามจำลองแบบ HSV-1 แต่ไม่ปรากฏข้อบกพร่องใน capsid egress นิวเคลียร์ กว่า ติดเชื้อใน MEFs เป็น null TA เกิดแบ่ง NE ขอบเขตที่ถูกขึ้นอยู่กับผลิตภัณฑ์เกี่ยวข้องกับนิวเคลียร์ egress ไวรัส ข้อบกพร่องไวรัสเจริญเติบโตและการแบ่งซอง NE ไร ดูเหมือนจะ เป็น null TA เซลล์บรรทัดเฉพาะแทนเวรทำงานขาดทุน TA ตามที่ระบุ โดย TA/MEFs reconstituted TA และ 293T TA มีระดับลดลง ในสรุป overexpression และสูญเสียตามีลักษณะพิเศษต่าง ๆ ในวงจรชีวิตของ HSV-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วงจรชีวิต herpesvirus ที่เกี่ยวข้องกับขั้นตอนที่ capsids ที่ได้รับรูปออกจากจุดศูนย์กลางโดย translocating อื่นๆไม่ว่าจะในซองจดหมายนิวเคลียร์(ไมล์ด้านทิศตะวันออกเฉียงเหนือ) เป็นที่รู้จักกันดีเกี่ยวกับบทบาทของปัจจัยเซลลูลาร์ในระหว่างการออกอาวุธนิวเคลียร์ เราพยายามที่จะระบุโปรตีนเซลลูลาร์นวนิยายที่มีปฏิสัมพันธ์กับไวรัส Simplex งูสวัดสงวนไว้ที่ 1 ( hsv - 1 )ปูล 34 โดยการทำเชื้อสองหน้าจอแบบไฮบริดปูล 34 จะได้รับเลือกเนื่องจากมีบทบาทสำคัญและอเนกประสงค์ได้ในระหว่างการออกอาวุธนิวเคลียร์ จาก 42 ปัจจัยเซลลูลาร์ที่ได้สำหรับปูล 34 ในเชื้อยีสต์เป็นสิบสองได้รับการประเมินในระดับเซลล์เกี่ยวกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมโดยการศึกษาร่วมกัน - การแปลเอกสารข้อมูลเกี่ยวกับการใช้ immunofluorescence เพิ่มเติม เฉพาะความร่วมมือระหว่างที่ตั้งที่ไม่มีปัจจัยเซลลูลาร์ได้รับการทดสอบแล้วและปั่น 34 พบว่าในเซลล์ที่ติดเชื้อดังนั้นหน้าจอที่ล้มเหลวในการระบุ 34 interactors ปูลนวนิยายน่าเชื่อ ในส่วนที่สองของวิทยานิพนธ์ที่เราส่งไปมีความสำคัญประโยชน์ใช้สอยของเซลลูลาร์โปรตีน torsina ( Ta ))ที่อยู่ในวงจรชีวิต hsv - 1 ที่ เราจะกลายเป็นมีส่วนได้เสียในตาเนื่องจากมีบทบาทในการรักษารูปร่างลักษณะของหินด้านทิศตะวันออกเฉียงเหนือปกติเราจะแสดงให้เห็นว่าตลอดเวลาหน้าที่ตามปกติของตาผ่าน overexpression สำหรับผู้มีสายตาผิดปกติ hsv - 1 จำลองแบบและเกิดจากข้อบกพร่องในการออกอาวุธนิวเคลียร์ capsid ใน fibroblasts ก่อหวอดเมาส์ที่ล้มเหลวในการแสดงมาบตาพุด( Ta - / - mefs ) 1 Replication hsv ก็ถูกระงับแต่ข้อบกพร่องในการออกอาวุธนิวเคลียร์ capsid ชัดเจนไม่ได้ จับตาการติดเชื้อใน mefs ตา - ไม่มีผลทำให้เกิดอาการทางด้านทิศตะวันออกเฉียงเหนือด้วยที่เพียงเท่านี้ของซึ่งก็ขึ้นอยู่กับตัวสินค้าเป็นไวรัสมีส่วนร่วมในการออกอาวุธนิวเคลียร์ การขยายตัวเป็นไวรัสที่พบข้อบกพร่องและทางด้านทิศตะวันออกเฉียงเหนือด้วยซองจดหมายรายละเอียด,อย่างไรก็ตามดูเหมือนว่าจะมีตา - ไม่มีค่าบริการข้อมูลของสถานีฐานคู่สายที่เจาะจงมากกว่าผลที่เต็มไปด้วยประโยชน์ใช้สอยของตาการสูญเสียตามที่ระบุไว้โดยมาบตาพุด - / - mefs reconstituted พร้อมด้วยตาและ– 293 T พร้อมด้วยระดับตาลดลง. ในบทสรุปการสูญเสียและ overexpression ของตามีผลแตกต่างกันในวงจรชีวิต hsv - 1 ที่