; Vector Laboratories,Burlingame, C

; Vector Laboratories,
Burlingame, CA, USA) overnight at 4C. Primary antibody
was detected using a biotin-labeled secondary antibody
(anti-mouse; Vector Laboratories) and the ABC kit (Vector
Laboratories). For color development, SG substrate was used.
Sections stained for the presence of Ki-67 were counterstained
with nuclear fast red (Sigma–Aldrich, St. Louis, MO,
USA) to visualize cell nuclei. Control sections were incubated
with normal mouse IgG in place of primary antibody.
Immunostaining of eNOS protein was performed using
procedures described previously [15]. Fixed tissues were
paraffin embedded briefly. Then, 5-mm thick tissue sections
were deparaffinized, rehydrated, and incubated with 3%
H2O2 in methanol to eliminate endogenous peroxidase
activity. The sections were then treated with blocking buffer
containing 3% normal horse serum (ABC kit, Vector Laboratories)
for 20 min, to block nonspecific binding of antibodies.
Slides were incubated overnight at 4C in PBS containing a
monoclonal eNOS/NOS Type III antibody (1:500 dilution;
Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA). The primary
antibody was detected using a biotin-labeled secondary
antibody (anti-mouse IgG biotinylated antibody) and an
avidin-biotinylated horseradish peroxidase macromolecular
complex (Vector Laboratories). For the control specimens,
the primary antibody was replaced with normal mouse IgG.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

; เวกเตอร์ ห้องปฏิบัติการเบอร์ลินเกม CA, USA) ค้างคืนที่แอนติบอดีหลัก 4 เซลเซียสตรวจพบโดยใช้แอนติบอดีรองที่ชื่อไบโอติน(ป้องกันเมาส์ เวกเตอร์ Laboratories) และชุด ABC (เวกเตอร์ห้องปฏิบัติการ) การพัฒนาสี พื้นผิวจำนวนถูกใช้ส่วนที่ย้อมของ Ki-67 ถูก counterstainedสีแดงเร็วนิวเคลียร์ (Sigma-Aldrich เซนต์หลุยส์ MOประเทศสหรัฐอเมริกา) เห็นภาพนิวเคลียสของเซลล์ ส่วนควบคุมได้รับการกกด้วยเมาส์ปกติ IgG แทนแอนติบอดีหลักImmunostaining eNOS โปรตีนทำโดยใช้วิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [15] เนื้อเยื่อถาวรได้พาราฟินฝังตัวสั้น ๆ ส่วนเนื้อเยื่อที่หนาแล้ว 5 มม.มี deparaffinized, rehydrated และรับการกก ด้วย 3%H2O2 ในเมทานอลเพื่อกำจัดฮอสภายนอกกิจกรรม ส่วนได้รับการรักษาแล้ว มีการบล็อคบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยซีรั่มม้าปกติ 3% (ชุด ABC ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์)สำหรับ 20 นาที บล็อกแบบผูกของแอนติบอดีภาพนิ่งที่ได้รับการกกค้างคืนที่ 4 C ใน PBS ที่ประกอบด้วยความแอนติบอดีชนิด III eNOS และชุดหมายเลขที่โมโน (เจือจาง 1: 500ส่งห้องปฏิบัติการ เล็กซิงตัน KY สหรัฐอเมริกา) หลักตรวจพบแอนติบอดีใช้รองชื่อไบโอตินแอนติบอดี (ป้องกันเมาส์ IgG biotinylated แอนติบอดี) และavidin biotinylated ดิชฮอส macromolecularคอมเพล็กซ์ (ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์) สำหรับตัวควบคุมแอนติบอดีหลักถูกแทนที่ ด้วยเมาส์ปกติ IgG

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

; เวกเตอร์ห้องปฏิบัติการ,
เบอร์ลิน, CA, USA) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส แอนติบอดีประถมศึกษา
ได้รับการตรวจพบการใช้ไบโอตินที่ติดฉลากรองแอนติบอดี
(anti-เมาส์เวกเตอร์ห้องปฏิบัติการ) และชุดเอบีซี (เวกเตอร์
ห้องปฏิบัติการ) สำหรับการพัฒนาสีพื้นผิว SG ถูกนำมาใช้.
ส่วนการย้อมสีการปรากฏตัวของ Ki-67 ถูก counterstained
กับนิวเคลียร์สีแดงอย่างรวดเร็ว (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO,
USA) เพื่อให้มองเห็นนิวเคลียสของเซลล์ ส่วนการควบคุมถูกบ่ม
กับ IgG เมาส์ปกติในสถานที่ของแอนติบอดีหลัก.
immunostaining ของ eNOS โปรตีนถูกดำเนินการโดยใช้
วิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้า [15] เนื้อเยื่อคงถูก
พาราฟินฝังตัวในเวลาสั้น ๆ จากนั้น 5 มมส่วนเนื้อเยื่อหนา
ถูก deparaffinized, rehydrated และบ่มกับ 3%
H2O2 ในเมทานอลเพื่อขจัด peroxidase ภายนอก
กิจกรรม ส่วนที่ได้รับการรักษาแล้วด้วยการปิดกั้นบัฟเฟอร์
ที่มี 3% ม้าปกติซีรั่ม (ชุด ABC, เวกเตอร์ห้องปฏิบัติการ)
เป็นเวลา 20 นาทีเพื่อป้องกันการเชิญชมผลผูกพันของแอนติบอดี.
สไลด์ถูกบ่มค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียสในพีบีเอสที่มี
โมโนโคลนอล eNOS / NOS ประเภทที่สาม แอนติบอดี (1: 500 เจือจาง;
Transduction ห้องปฏิบัติการ, Lexington, เคนทักกี, สหรัฐอเมริกา) หลัก
แอนติบอดีที่ตรวจพบการใช้ไบโอตินที่ติดฉลากรอง
แอนติบอดี (anti-เมาส์ IgG แอนติบอดีไบโอติน) และ
avidin-biotinylated peroxidase มะรุมโมเลกุล
ที่ซับซ้อน (เวกเตอร์ห้องปฏิบัติการ) สำหรับตัวอย่างควบคุม
แอนติบอดีหลักก็ถูกแทนที่ด้วยเมาส์ปกติ IgG

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

; ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์เทลอาวีฟ , CA , USA ) ค้างคืนที่ 4C . แอนติบอดีประถมศึกษาพบว่าระดับแอนติบอดีที่ใช้ไบโอติน( ป้องกันเมาส์ ; ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ ( เวกเตอร์ ) และชุด ABCห้องปฏิบัติการ ) การพัฒนาสี SG พื้นผิวที่ใช้ส่วนคราบสำหรับการปรากฏตัวของ ki-67 เป็น counterstainedนิวเคลียร์อย่างรวดเร็ว–สีแดง ( ซิกม่า Aldrich เซนต์ หลุยส์ โมสหรัฐอเมริกา ) จะเห็นเซลล์ นิวเคลียส ส่วนที่ควบคุมอุณหภูมิกับ IgG เมาส์ปกติในสถานที่ของแอนติบอดีประถมศึกษาimmunostaining ของการใช้โปรตีนไนตริกออกไซด์ซินเทสขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 15 ] เนื้อเยื่อถาวรคือพาราฟินฝังตัวอยู่ในเวลาสั้นๆ แล้ว 5-mm เนื้อเยื่อส่วนหนาเป็น deparaffinized ได้ทำการ รีไฮเดรทม , และแยก 3 เปอร์เซ็นต์มี H2O2 ในเมทานอลเพื่อขจัดโครงสร้างกิจกรรม ส่วน จึงถือว่ามีการปิดกั้น กันชนเซรั่มที่มี 3 % ปกติม้า ( ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ชุด ABC )20 นาที เพื่อป้องกันการติดเชื้อผูกพันของแอนติบอดีภาพนิ่งที่ถูกบ่มค้างคืนที่ 4C ในช่องที่มีโมโนโคลนอลแอนติบอดีชนิด III / NOS นอส ( เจือจาง 1 : 500 ;ผ่านห้องปฏิบัติการ , เล็กซิงตัน , เคียว , USA ) ปฐมภูมิแอนติบอดีพบว่ารองใช้ไบโอตินแอนติบอดี ( antibody IgG anti mouse ไล ) และวิดินไลเปอร์ macromolecular มะรุมซับซ้อน ( ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ สำหรับตัวอย่างควบคุมการสร้างแอนติบอดี IgG ถูกแทนที่ด้วยเมาส์ธรรมดา