The term "รูปแปรผัน CDR" as used he

The term "รูปแปรผัน CDR" as used herein, refers to a CDR that has been modified by at least one, for example 1, 2 or 3, amino acid substitution(s), deletion(s) or addition(s), โดยที่ the modified โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน ซึ่ง ประกอบรวมด้วย the รูปแปรผัน CDR substantially retains the biological characteristics of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน pre-modification. It will be appreciated that each CDR
10 that can be modified may be modified alone or in combination with another CDR. In one aspect, the
modification is a substitution, particularly a conservative substitution, for example as shown in Table
2.
Table 2

Side chain Members
Hydrophobic Met, Ala, Val, Leu, Ile
Neutral hydrophilic Cys, Ser, Thr
Acidic Asp, Glu
Basic Asn, Gln, His, Lys, Arg
เรซิดิว that influence chain orientation Gly, Pro
Aromatic Trp, Tyr, Phe

15 For example, in a variant CDR, the amino acid เรซิดิว of the minimum binding unit may
remain the same, but the flanking เรซิดิว that ประกอบรวมด้วย the CDR as part of the Kabat or Chothia definition(s) may be substituted with a conservative amino acid เรซิดิว.
Such โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน ซึ่ง ประกอบรวมด้วย modified CDRs or minimum binding units as described above may be referred to herein as "functional รูปแปรผัน CDRs" or "functional binding unit
20 variants".
โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may be capable of binding SLAG-3. In one aspect, the equilibrium dissociation constant (KD) of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน-SLAG-3 interaction is 10nM or less, such as 1nM or less, for example between 1pM and 300, 400, 500pM or between
500pM and 1nM. A skilled person will appreciate that the smaller the KD numerical value, the 25 stronger the binding. The reciprocal of KD (i.e. 1/KD) is the equilibrium association constant (KA)
6





having units M-1. A skilled person will appreciate that the larger the KA numerical value, the stronger the binding.
In one aspect, the การประดิษฐ์นี้ provides โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน that are capable of
binding recombinant LAG-3 with a KD of less than 1nM, for example between 1pM and 300pM, when 5 determined by BiacoreTM surface Plasmon resonance analysis using recombinant human, or
cynomolgus macaque LAG-3 extracellular domains (ECDs) of SEQ ID NOs:51 and 52, respectively.
Furthermore, antigen binging proteins of the การประดิษฐ์นี้ may also be capable of
binding LAG-3 expressed on, for example, EL4 cells or activated human CD3+ T cells.
โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may also be capable of depleting LAG-3+ 10 activated T cells, in particular, CD4+LAG-3+ and CD8+LAG-3+ T cells. การลดปริมาณ of LAG-3+ T cells
may occur by, for example, antibody dependent cell mediated cytotoxic activity (ADCC) and/or complement-dependent cytotoxic activity (CDC).
In one aspect, the การประดิษฐ์นี้ provides โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน that are capable of
causing greater than 40% การลดปริมาณ of antigen specific CD4 and/or CD8 LAG-3+ human T cells by 15 ADCC in an in-vitro assay using primary human T cells.
ในลักษณะ ต่อไป, the การประดิษฐ์นี้ provides โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน that, at a concentration of 0.1pg/mL, are capable of causing greater than 50% การลดปริมาณ in an in vitro ADCC assay using europium-labelled LAG-3 expressing EL4 cells as target cells and human PBMCs as
effector cells, โดยที่ the effector : target ratio is no greater than 50:1 and the assay is run for a 20 period of 2 hours. % cell lysis is calculated based on europium release from LAG-3 expressing EL4
cells.
The interaction between the constant region of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน and various Fc
receptors (FcR) ที่รวมถึง FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) and FcyRIII (CD16) is believed to mediate
the effector functions, such as ADCC and CDC, of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน. Significant biological 25 effects can be a consequence of effector functionality. Usually, the ability to mediate effector
function requires binding of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน to an antigen and not all antigen binding
proteins will mediate every effector function.
Effector function can be measured in a number of ways ที่รวมถึง for example via binding of
the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน, for example antibody, of the การประดิษฐ์นี้ via FcyRIII to Natural 30 Killer cells or via FcyRI to monocytes/macrophages to measure for ADCC effector function. For
example an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ can be assessed for ADCC effector
function in a Natural Killer cell assay. Examples of such assays can be found in Shields et al, 2001
The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276, p6591-6604; Chappel et al, 1993 The Journal of
Biological Chemistry, Vol 268, p25124-25131; Lazar et al, 2006 PNAS, 103; 4005-4010.
35 Examples of assays to determine CDC function รวมถึง thos described in 1995 J Imm Meth
184:29-38.
In one aspect of the การประดิษฐ์นี้, the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน is an antibody.
7





The term "antibody" as used herein refers to molecules with an อิมมูโนโกลบูลิน-like domain and รวมถึง โมโนโคลนอล (for example IgG, IgM, IgA, IgD or IgE), recombinant, polyclonal, chimeric, ฮิวเมไนซ์, bispecific and heteroconjugate antibodies; a single variable domain (e.g., VL), a domain
antibody (dAb®), antigen binding ชิ้นส่วนย่อย, immunologically effective ชิ้นส่วนย่อย, Fab, F(ab')2, Fv, 5 disulphide linked Fv, single chain Fv, closed conformation multispecific antibody, disulphide-linked
scFv, diabodies, TANDABSTM, etc. and modified versions of any of the foregoing (for a summary of
alternative "antibody" formats see Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, No. 9,
1126-1136). Alternative antibody formats รวมถึง alternative scaffolds in which the one or more
CDRs of any molecules in accordance with the disclosure can be arranged onto a suitable non-
10 อิมมูโนโกลบูลิน protein scaffold or skeleton, such as an affibody, a SpA scaffold, an LDL receptor
class A domain, an avimer (see, e.g., U.S. Patent Application Publication Nos. 2005/0053973,
2005/0089932, 2005/0164301) or an EGF domain.
ในลักษณะ ต่อไป, the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน is a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี.
A "ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี" refers to a type of engineered antibody having its CDRs derived 15 from a non-human donor อิมมูโนโกลบูลิน, the remaining อิมมูโนโกลบูลิน-derived parts of the
molecule being derived from one (or more) human อิมมูโนโกลบูลิน(s). In addition, framework
support เรซิดิว may be altered to preserve binding affinity (see, e.g., Queen et al., Proc. Natl Acad
Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)). A suitable human
acceptor antibody may be one selected from a conventional database, e.g., the KABAT® database, 20 Los Alamos database, and Swiss Protein database, by homology to the nucleotide and amino acid
sequences of the donor antibody. A human antibody characterized by a homology to the framework
regions of the donor antibody (on an amino acid basis) may be suitable to provide a heavy chain
constant region and/or a heavy chain variable framework region for insertion of the donor CDRs. A
suitable acceptor antibody capable of donating light chain constant or variable framework regions
25 may be selected in a similar manner. It should be noted that the acceptor antibody heavy and light
chains are not required to originate from the same acceptor antibody. The prior art describes
several ways of producing such ฮิวเมไนซ์ antibodies — see for example EP-A-0239400 and EP-A-
054951.
In yet a further aspect, the ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี has a human antibody constant region that 30 is an IgG1, for example, the heavy chain constant region of SEQ ID No. 46.
It will be understood that the การประดิษฐ์นี้ further provides ฮิวเมไนซ์ antibodies which
ประกอบรวมด้วย a) a ลำดับสายเบา of SEQ ID NO. 5 or a ลำดับสายเบา with at least 75%,
80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identity to any of SEQ ID NO. 5 and b) a heavy
chain sequence of SEQ ID NO. 10 or a ลำดับสายหนัก with at least 75%, 80%, 85%, 90%, 35 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identity to any of SEQ ID NO. 10.





ในลักษณะ ต่อไป, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, ซึ่ง ประกอบรวมด้วย
a) a ลำดับสายเบา with at least 90% identity to SEQ ID NO. 5, and b) a ลำดับสายหนัก with at least 90% identity to SEQ ID NO. 10.
ในลักษณะ ต่อไป, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, ซึ่ง ประกอบรวมด้วย 5 a) a ลำดับสายเบา with at least 95% identity to SEQ ID NO. 5, and b) a heavy chain
sequence with at least 95% identity to SEQ ID NO. 10.
In yet a further aspect, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a) a ลำดับสายเบา with at least 97% identity to SEQ ID NO. 5, and b) a ลำดับสายหนัก with at least 97% identity to SEQ ID NO. 10.
10 In yet a further aspect, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, which
ประกอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คำว่า "รูปแปรผัน CDR" ใช้นี้ ถึง CDR ที่มีการปรับเปลี่ยนน้อยหนึ่ง ตัวอย่าง 1, 2 หรือ 3 กรดอะมิโน substitution(s), deletion(s) หรือ addition(s) โดยที่ปรับเปลี่ยนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งประกอบรวมด้วยรูปแปรผัน CDR มากยังคงลักษณะทางชีวภาพของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนก่อนปรับเปลี่ยน จะนิยมที่แต่ละ CDR10 ที่สามารถปรับเปลี่ยนได้อาจปรับเปลี่ยนเพียงอย่างเดียว หรือร่วมกับใน CDR. อีกแง่มุมหนึ่ง ในปรับเปลี่ยนเป็นการทดแทน โดยเฉพาะอย่างยิ่งหัวเก่าทดแทน เช่นเป็นแสดงในตาราง2ตารางที่ 2ห่วงโซ่ด้านสมาชิกHydrophobic พบ อลา วาล ลือ เมาThr Cys, Ser, hydrophilic กลางกรด Asp, GluAsn พื้นฐาน Gln เขา Lys อาร์กิวเมนต์ของค่าเรซิดิวที่มีอิทธิพลต่อโซ่แนว Gly, Proหอม Trp, Tyr เพ15 ตัวอย่าง ในตัวแปร CDR เรซิดิวกรดอะมิโนหน่วยรวมต่ำสุดอาจยังคง เหมือนกัน แต่ flanking เรซิดิว CDR ประกอบรวมด้วยที่เป็นส่วนหนึ่งของการ Kabat หรือนิยาม Chothia อาจถูกทดแทน ด้วยเรซิดิวเป็นกรดอะมิโนหัวเก่าCDRs การปรับเปลี่ยนดังกล่าวโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งประกอบรวมด้วย หรือหน่วยรวมต่ำสุดที่อธิบายข้างต้นอาจจะเรียกว่านี้ "ทำงานรูปแปรผัน CDRs" หรือ "หน่วยงานรวมตัวแปร 20"โปรตีนแอนติเจนยึดเกาะของการประดิษฐ์นี้อาจสามารถผูก SLAG-3 ในด้านหนึ่ง คง dissociation สมดุล (KD) ของการโต้ตอบโปรตีนแอนติเจน-SLAG-3 ยึดเกาะเป็น 10nM หรือ น้อย เช่น 1nM หรือ น้อย ตัวอย่างระหว่าง 1 pM และ 300, 400, 500 pM หรือระหว่าง500 pM และ 1nM ผู้เชี่ยวชาญจะชื่นชอบที่ค่าเลข KD ขนาดเล็ก 25 ที่แข็งแกร่งการรวม ส่วนกลับของ KD (เช่น 1/KD) จะคงความสัมพันธ์ของสมดุล (KA)6 มีหน่วย M-1 ผู้เชี่ยวชาญจะขอบคุณที่ใหญ่มากค่ะเป็นตัวเลขค่า ผูกที่แข็งแกร่งในด้านหนึ่ง การประดิษฐ์นี้ช่วยให้แอนติเจนยึดเกาะโปรตีนที่มีความสามารถในการ ผูกความล่าช้า 3 recombinant กับ KD น้อยกว่า 1nM ตัวอย่างระหว่าง 1 pM และ 300 น. เมื่อ 5 ตาม BiacoreTM ผิววิเคราะห์การสั่นพ้อง Plasmon ใช้วททชมนุษย์ หรือ cynomolgus macaque ตัวความล่าช้า 3 extracellular โดเมน (ECDs) รหัสลำดับหมายเลข: 51 และ 52 ตามลำดับนอกจากนี้ ตรวจหาโปรตีน binging ของการประดิษฐ์นี้อาจจะสามารถ ผูกความล่าช้า 3 แสดงบน ตัวอย่าง EL4 เซลล์ หรือเรียกมนุษย์เซลล์ CD3 + T โปรตีนแอนติเจนยึดเกาะของการประดิษฐ์นี้อาจยังไม่สามารถพึ่งความล่าช้า-T เซลล์ โดยเฉพาะ CD4 + ความล่าช้าในการเรียกใช้งาน 3 + 10-3 + และ CD8 + ความล่าช้า-3 + T เซลล์ได้ การลดปริมาณของความล่าช้า-3 + T เซลล์อาจเกิดขึ้น โดย เช่น แอนติบอดีขึ้นเซลล์ mediated cytotoxic กิจกรรม (ADCC) และ/หรือขึ้นอยู่กับการเสริมกิจกรรม cytotoxic (CDC)ในด้านหนึ่ง การประดิษฐ์นี้ช่วยให้แอนติเจนยึดเกาะโปรตีนที่มีความสามารถในการ สาเหตุมากกว่า 40% การลดปริมาณของการตรวจหา CD4 / CD8 เฉพาะความล่าช้า-3 + T เซลล์มนุษย์ โดย ADCC 15 ในการทดสอบในหลอดใช้ T เซลล์มนุษย์หลักการในลักษณะต่อไป การประดิษฐ์นี้ให้โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน ที่ที่ความเข้มข้นของ 0.1pg / mL มีความสามารถมากกว่าการลดปริมาณ 50% ในการทดสอบ ADCC ในใช้ยูโรเพียมมันช่วงห่าง 3 แสดง EL4 เซลล์เป็นเซลล์เป้าหมายและ PBMCs มนุษย์เป็นสาเหตุeffector เซลล์ โดยที่ effector ที่: เป้าหมายอัตราส่วนไม่มากกว่า 50:1 และการทดสอบรันสำหรับรอบระยะเวลา 20 ชั่วโมง 2 lysis เซลล์%จะถูกคำนวณตามยูโรเพียมปล่อยจากความล่าช้า 3 แสดง EL4 เซลล์การโต้ตอบระหว่างแคว้นแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนคงและสโมสรต่าง ๆ ที่รวมถึง receptors (FcR) FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) และ FcyRIII (CD16) เชื่อกันว่าเป็นสื่อกลาง effector ฟังก์ชัน ADCC และ CDC ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน ผล 25 ชีวภาพอย่างมีนัยสำคัญได้ส่งผลต่อฟังก์ชัน effector มักจะ ความสามารถในการบรรเทา effector ฟังก์ชันต้องผูกของแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนเพื่อการตรวจหาและตรวจหาไม่ผูก โปรตีนจะบรรเทาทุกฟังก์ชัน effectorสามารถวัดจำนวนที่รวมถึงวิธีเช่นผ่านรวมฟังก์ชัน effector การโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน เช่นแอนติบอดี ของการประดิษฐ์นี้ ผ่าน FcyRIII ไปยังเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ 30 หรือ ผ่าน FcyRI เพื่อ monocytes/บังเอิญ วัด ADCC effector ฟังก์ชัน สำหรับ อย่างแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้สามารถถูกประเมิน ADCC effector ฟังก์ชันในการวิเคราะห์ธรรมชาติทำลายเซลล์ ตัวอย่างของ assays ดังกล่าวสามารถพบได้ในโล่ et al, 2001 ในสมุดรายวันของชีวภาพเคมี 276, p6591-6604 Chappel et al, 1993 สมุดรายวัน ชีวภาพเคมี Vol 268, p25124-25131 Lazar et al, 2006 PNAS, 103 4005-4010ตัวอย่างที่ 35 ของ assays เพื่อกำหนด CDC ฟังก์ชันรวมถึง thos ใน 1995 เจอิ่มจาก184:29-38ในด้านหนึ่งของการการประดิษฐ์นี้ โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนเป็นแอนติบอดีที่ 7 คำว่า "แอนติบอดี" นี้ใช้อ้างถึงโมเลกุลโดเมนเช่นอิมมูโนโกลบูลินและโมโนโคลนอลรวมถึง (เช่น IgG ระบาดของโรค อิกะ IgD หรือ IgE), วททช polyclonal, chimeric ฮิวเมไนซ์ bispecific และ heteroconjugate แอ นตี้ เดียวตัวแปรโดเมน (เช่น VL), โดเมนแอนติบอดี (บคอ ®), ตรวจหารวมชิ้นส่วนย่อย immunologically ผลชิ้นส่วนย่อย Fab, F(ab') 2, Fv, Fv, Fv ปิด conformation แอนติบอดี multispecific, disulphide ลิงค์เดียวโซ่เชื่อมโยง 5 disulphide scFv, diabodies, TANDABSTM ฯลฯ และการปรับเปลี่ยนรุ่นของกลาย (สำหรับสรุป รูปแบบอื่น "แอนติบอดี" ดู Holliger และฮัดสัน เทคโนโลยีชีวภาพธรรมชาติ ปี 2005, Vol 23 หมายเลข 9 1126-1136) . รวมถึง scaffolds อื่นซึ่งรูปแบบแอนติบอดีอื่นหนึ่งหรือมากกว่า CDRs ของโมเลกุลใด ๆ ตามการเปิดเผยข้อมูลที่สามารถจัดลงที่เหมาะสมไม่10 อิมมูโนโกลบูลินโปรตีนนั่งร้านหรือโครงกระดูก การ affibody นั่งร้านสปา ตัวรับ LDLคลาโดเมน การ avimer (ดู เช่น สหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรโปรแกรมพิมพ์ชุด 2005/00539732005/0089932, 2005/0164301) หรือโดเมนมี EGF ด้วยในลักษณะต่อไป โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนฮิวเมไนซ์แอนติบอดีได้"ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี" แสดงถึงชนิดของแอนติบอดีออกแบบ CDRs ของมา 15 เป็นผู้บริจาคไม่ใช่มนุษย์อิมมูโนโกลบูลิน ส่วนเหลือมาอิมมูโนโกลบูลินส่วน โมเลกุลที่มา อิมมูโนโกลบูลิน(s) บุคคลหนึ่ง (หรือมากกว่า) นอกจากนี้ กรอบ เรซิดิวสนับสนุนอาจมีการเปลี่ยนแปลงเพื่อรักษาความสัมพันธ์ผูก (ดู เช่น ควีนและ al., Proc. Natl Acad สหรัฐอเมริกาวิทยาศาสตร์วิศวกรรม 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al. ชีวภาพ/เทคโนโลยี 9:421 (1991)) บุคคลที่เหมาะสม acceptor แอนติบอดีอาจเลือกจากฐานข้อมูลทั่วไป เช่น KABAT ®ฐานข้อมูล ฐานข้อมูล Los Alamos 20 และฐาน ข้อมูลโปรตีนสวิส โดย homology นิวคลีโอไทด์และกรดอะมิโน ลำดับของแอนติบอดีผู้บริจาค แอนติบอดีเป็นมนุษย์โดย homology กับกรอบ ภูมิภาคของแอนติบอดีผู้บริจาค (ตามกรดอะมิโน) อาจจะเหมาะสมเพื่อให้โซ่หนัก คงภูมิภาคหรือบริเวณกรอบตัวแปรโซ่หนักสำหรับแทรกการบริจาค CDRs A suitable acceptor antibody capable of donating light chain constant or variable framework regions25 may be selected in a similar manner. It should be noted that the acceptor antibody heavy and lightchains are not required to originate from the same acceptor antibody. The prior art describesseveral ways of producing such ฮิวเมไนซ์ antibodies — see for example EP-A-0239400 and EP-A-054951.In yet a further aspect, the ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี has a human antibody constant region that 30 is an IgG1, for example, the heavy chain constant region of SEQ ID No. 46. It will be understood that the การประดิษฐ์นี้ further provides ฮิวเมไนซ์ antibodies whichประกอบรวมด้วย a) a ลำดับสายเบา of SEQ ID NO. 5 or a ลำดับสายเบา with at least 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identity to any of SEQ ID NO. 5 and b) a heavy chain sequence of SEQ ID NO. 10 or a ลำดับสายหนัก with at least 75%, 80%, 85%, 90%, 35 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identity to any of SEQ ID NO. 10. ในลักษณะ ต่อไป, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, ซึ่ง ประกอบรวมด้วยa) a ลำดับสายเบา with at least 90% identity to SEQ ID NO. 5, and b) a ลำดับสายหนัก with at least 90% identity to SEQ ID NO. 10.ในลักษณะ ต่อไป, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, ซึ่ง ประกอบรวมด้วย 5 a) a ลำดับสายเบา with at least 95% identity to SEQ ID NO. 5, and b) a heavy chain sequence with at least 95% identity to SEQ ID NO. 10.In yet a further aspect, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a) a ลำดับสายเบา with at least 97% identity to SEQ ID NO. 5, and b) a ลำดับสายหนัก with at least 97% identity to SEQ ID NO. 10.10 In yet a further aspect, the การประดิษฐ์นี้ provides a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี, whichประกอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คำว่า "รูปแปรผัน CDR" ที่ใช้ในที่นี้หมายถึง CDR ที่ได้รับการแก้ไขโดยอย่างน้อยหนึ่งเช่น 1, 2 หรือ 3 แทนกรดอะมิโน (s), ลบ (s) หรือเพิ่ม (s), โดย ที่ปรับเปลี่ยนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งประกอบรวมด้วยรูปแปรผัน CDR อย่างมีนัยสำคัญยังคงรักษาลักษณะทางชีวภาพของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนก่อนการปรับเปลี่ยน มันจะได้รับการชื่นชมว่าแต่ละ CDR
10 ที่สามารถปรับเปลี่ยนอาจมีการเปลี่ยนแปลงเพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับผบอีก ในแง่มุมหนึ่งที่การปรับเปลี่ยนเป็นลงสนาม, โดยเฉพาะอย่างยิ่งทดแทนอนุรักษ์นิยมเช่นดังแสดงในตารางที่2 ตารางที่ 2 ห่วงโซ่ด้านสมาชิกHydrophobic Met, Ala วาล, Leu, เกาะกลางน้ำCys, Ser, นั่นเป็นกรดงูเห่า, Glu พื้นฐาน Asn, Gln ของเขา, ลิซ, Arg เรซิดิวที่วางแนวทางห่วงโซ่อิทธิพล Gly โปรหอมTrp, เทอร์, เพ15 ตัวอย่างเช่นในตัวแปร CDR เป็นกรดอะมิโนเรซิดิวของหน่วยผูกพันขั้นต่ำอาจจะยังคงอยู่เดียวกัน แต่ขนาบเรซิดิวที่ประกอบรวมด้วย CDR เป็นส่วนหนึ่งของ Kabat หรือนิยาม Chothia (s) อาจถูกแทนที่ด้วยกรดอะมิโนที่อนุรักษ์นิยมเรซิดิว. ดังกล่าวโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งประกอบรวมด้วย CDRs การแก้ไข หรือหน่วยงานที่มีผลผูกพันขั้นต่ำตามที่อธิบายไว้ข้างต้นอาจจะเรียกในที่นี้ว่า "การทำงานรูปแปรผัน CDRs" หรือ "หน่วยที่มีผลผูกพันการทำงาน20 สายพันธุ์". โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้อาจจะเป็นความสามารถในการมีผลผูกพันตะกรัน-3 ในแง่มุมหนึ่งที่แยกตัวออกสมดุลคงที่ (KD) ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน -SLAG-3 การทำงานร่วมกันเป็น 10nm หรือน้อยกว่าเช่น 1nM หรือน้อยกว่าตัวอย่างเช่นระหว่าง 01:00 และ 300, 400, 500pM หรือระหว่าง500pM และ 1nM คนที่มีฝีมือจะได้ชื่นชมว่ามีขนาดเล็ก KD ค่าตัวเลขที่แข็งแกร่ง 25 มีผลผูกพัน ซึ่งกันและกันของ KD (เช่น 1 / KD) เป็นสมาคมสมดุลคงที่ (KA) 6 หน่วยมี M-1 คนที่มีฝีมือจะได้ชื่นชมว่ามีขนาดใหญ่ KA ค่าตัวเลขที่แข็งแกร่งผูกพัน. ในแง่มุมหนึ่งที่การประดิษฐ์นี้มีโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนที่มีความสามารถในการมีผลผูกพัน LAG-3 recombinant กับ KD น้อยกว่า 1nM ยกตัวอย่างเช่น ระหว่าง 01:00 และ 300pM เมื่อ 5 กำหนดโดยพื้นผิว BiacoreTM วิเคราะห์เสียงสะท้อน Plasmon ใช้ recombinant มนุษย์หรือ cynomolgus ลิง LAG-3 โดเมน extracellular (ECDs) ของ SEQ ID Nos. 51 และ 52 ตามลำดับนอกจากนี้แอนติเจนbinging โปรตีนของการประดิษฐ์นี้ อาจยังมีความสามารถในการผูกLAG-3 แสดงบนตัวอย่างเช่นเซลล์ EL4 หรือเปิดใช้งานของมนุษย์ CD3 + T เซลล์. โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้ก็อาจจะเป็นความสามารถในการทำลาย LAG-3 + 10 เปิดใช้งาน T เซลล์โดยเฉพาะอย่างยิ่ง , CD4 + LAG-3 + และ CD8 + LAG-3 + T เซลล์ การลดปริมาณของ LAG-3 + T เซลล์อาจเกิดขึ้นโดยยกตัวอย่างเช่นขึ้นอยู่กับมือถือแอนติบอดี้กิจกรรมพิษพึ่ง(ADCC) และ / หรือกิจกรรมพิษเสริมขึ้นอยู่กับ (CDC). ในแง่มุมหนึ่งที่การประดิษฐ์นี้มีโปรตีนยึดเกาะ แอนติเจนที่มีความสามารถในการก่อให้เกิดมากขึ้นกว่า40% การลดปริมาณของแอนติเจน CD4 ที่เฉพาะเจาะจงและ / หรือ CD8 LAG-3 + T เซลล์ของมนุษย์ 15 ADCC ในการทดสอบในหลอดทดลองในการใช้ของมนุษย์หลัก T เซลล์. ในลักษณะต่อไปนี้การ ประดิษฐ์นี้มีโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนว่าที่ความเข้มข้นของ 0.1pg บาร์ / มิลลิลิตรมีความสามารถในการก่อให้เกิดมากขึ้นกว่า 50% การลดปริมาณในการทดสอบในหลอดทดลองโดยใช้ ADCC ยูโรเพียมติดฉลาก LAG-3 แสดงเซลล์ EL4 เป็นเซลล์เป้าหมายและมนุษย์ PBMCs เป็นเซลล์effector, โดยที่ effector อัตราส่วนเป้าหมายคือไม่เกิน 50: 1 และการทดสอบจะดำเนินการเป็นระยะเวลา 20 2 ชั่วโมง % สลายเซลล์ที่มีการคำนวณบนพื้นฐานของการเปิดตัวยูโรเพียมจาก LAG-3 แสดง EL4 เซลล์. การทำงานร่วมกันระหว่างภูมิภาคอย่างต่อเนื่องของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนและ Fc ต่างๆผู้รับ(FCR) ที่รวมถึง FcyRI (CD64) FcyRII (CD32) และ FcyRIII (CD16) เชื่อว่าจะเป็นสื่อกลางในการทำงานeffector เช่น ADCC และ CDC ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน อย่างมีนัยสำคัญทางชีวภาพ 25 ผลกระทบที่อาจจะเป็นผลมาจากการทำงาน effector โดยปกติแล้วความสามารถในการเป็นสื่อกลางใน effector ฟังก์ชั่นต้องมีผลผูกพันของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนกับแอนติเจนและไม่แอนติเจนทั้งหมดมีผลผูกพันโปรตีนจะเป็นสื่อกลางในทุกฟังก์ชั่น effector. ฟังก์ชั่น Effector สามารถวัดได้ในหลายวิธีที่รวมถึงตัวอย่างเช่นผ่านทางที่มีผลผูกพันของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนสำหรับแอนติบอดีตัวอย่างของการประดิษฐ์นี้ผ่าน FcyRIII 30 เซลล์ผู้ฆ่าธรรมชาติหรือผ่านทาง FcyRI เพื่อ monocytes / ขนาดใหญ่ในการวัดการทำงาน effector ADCC สำหรับตัวอย่างโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้สามารถประเมิน ADCC effector ฟังก์ชั่นในการทดสอบนักฆ่าเซลล์ธรรมชาติ ตัวอย่างของการตรวจดังกล่าวสามารถพบได้ในโล่ et al, 2001 วารสารชีววิทยาเคมีฉบับ 276 p6591-6604; Chappel et al, 1993 วารสารชีววิทยาเคมีฉบับที่268, p25124-25131; เกลลาซาร์ et al, 2006 PNAS 103; . 4005-4010 35 ตัวอย่างของการตรวจเพื่อตรวจสอบการทำงานของ CDC รวมถึง Thos อธิบายไว้ในปี 1995 อิมเจปรุงยา184. 29-38 ในแง่มุมหนึ่งของการประดิษฐ์นี้ที่โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนเป็นแอนติบอดี. 7 คำว่า "แอนติบอดี้ "ที่ใช้ในที่นี้หมายถึงโมเลกุลที่มีอิมมูโนโกลบูลินเหมือนโดเมนและรวมถึงโมโนโคลนอล (เช่น IgG, IgM, IgA, IgD หรือ IgE) recombinant, โพลี, ลูกผสม, ฮิว เมไนซ์, bispecific และแอนติบอดี heteroconjugate; โดเมนตัวแปรเดียว (เช่น VL) โดเมนแอนติบอดี(dAb®) แอนติเจนผูกพันชิ้นส่วนย่อยที่มีประสิทธิภาพภูมิคุ้มกันชิ้นส่วนย่อย, Fab, f (AB) 2 Fv 5 disulphide Fv เชื่อมโยงห่วงโซ่เดียว Fv, ปิดโครงสร้างแอนติบอดี multispecific, disulphide ที่เชื่อมโยงscFv, diabodies, TANDABSTM ฯลฯ และรุ่นที่มีการปรับเปลี่ยนใด ๆ ของดังกล่าวข้างต้น (สำหรับบทสรุปของทางเลือก"แอนติบอดี" รูปแบบที่เห็น Holliger ฮัดสัน, ธรรมชาติเทคโนโลยีชีวภาพปี 2005 ฉบับที่ 23 ฉบับที่ 9 , 1126-1136) รูปแบบแอนติบอดี้ทางเลือกรวมถึงโครงทางเลือกที่หนึ่งหรือมากกว่าCDRs ของโมเลกุลใด ๆ ให้สอดคล้องกับการเปิดเผยข้อมูลสามารถจัดลงบนที่เหมาะสมไม่ใช่10 อิมมูโนโกลบูลินนั่งร้านโปรตีนหรือโครงกระดูกเช่น affibody ที่ นั่งร้านสปารับ LDL ระดับโดเมนการ Avimer (ดูเช่นสหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรแอพลิเคชันที่ตีพิมพ์ Nos. 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301) หรือโดเมน EGF. ในลักษณะต่อไปนี้โปรตีนยึดเกาะ แอนติเจนเป็นฮิวเมไนซ์แอนติบอดี. เป็น "ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี" หมายถึงชนิดของแอนติบอดีวิศวกรรมมี CDRs ที่มา 15 จากผู้บริจาคที่ไม่ใช่มนุษย์อิมมูโนโกลบูลินที่เหลืออิ มมูโนโกลบูลินส่วน -derived ของโมเลกุลถูกมาจากหนึ่ง(หรือมากกว่า) มนุษย์อิมมูโนโกลบูลิน (s) นอกจากนี้กรอบการสนับสนุนเรซิดิวอาจมีการเปลี่ยนแปลงที่จะรักษาความสัมพันธ์ที่ใกล้ชิดผูกพัน (ดูเช่นสมเด็จพระราชินี, et al, พร Natl Acad.. วิทย์สหรัฐอเมริกา, 86:. 10029-10032 (1989) ฮอดจ์สันและอัลไบโอ / เทคโนโลยี 9: 421 (1991)) มนุษย์ที่เหมาะสมแอนติบอดีตัวรับอาจจะเป็นหนึ่งที่เลือกจากฐานข้อมูลเดิมเช่นฐานข้อมูลKABAT® 20 Los Alamos ฐานข้อมูลและฐานข้อมูลโปรตีนสวิสโดยที่คล้ายคลึงกันกับเบสและกรดอะมิโนลำดับของแอนติบอดีผู้บริจาค แอนติบอดีมนุษย์ลักษณะที่คล้ายคลึงกันกับกรอบภูมิภาคของแอนติบอดีผู้บริจาค (บนพื้นฐานกรดอะมิโน) อาจจะเหมาะสมที่จะให้ห่วงโซ่หนักภูมิภาคอย่างต่อเนื่องและ/ หรือห่วงโซ่หนักภูมิภาคกรอบตัวแปรสำหรับการแทรกของผู้บริจาค CDRs แอนติบอดีใบเสร็จที่เหมาะสมมีความสามารถในการบริจาคห่วงโซ่แสงคงที่หรือภูมิภาคกรอบตัวแปร25 อาจจะเลือกในลักษณะที่คล้ายกัน มันควรจะตั้งข้อสังเกตว่าแอนติบอดีใบเสร็จหนักและเบาโซ่ไม่จำเป็นต้องมาจากแอนติบอดีใบเสร็จเดียวกัน ศิลปะก่อนอธิบายหลายวิธีในการผลิตเช่นฮิวเมไนซ์แอนติบอดี - ดูตัวอย่าง EP-A-0239400 และ EP-A- 054951. แต่ในด้านที่ต่อไปที่ฮิวเมไนซ์แอนติบอดีมีภูมิภาคแอนติบอดีของมนุษย์อย่างต่อเนื่อง ที่ 30 เป็น IgG1 ตัวอย่างเช่นภูมิภาคห่วงโซ่หนักอย่างต่อเนื่องของ ID SEQ ฉบับที่ 46 ก็จะมีการเข้าใจว่าการประดิษฐ์นี้ต่อไปให้ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี้ที่ประกอบรวมด้วยก) ลำดับสายเบาของ SEQ ID NO 5 หรือลำดับสายเบาที่มีอย่างน้อย 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% หรือ 99% ตัวตนใด ๆ ของ ID SEQ NO 5 และ b) หนักลำดับห่วงโซ่ของSEQ ID NO 10 หรือลำดับสายหนักที่มีอย่างน้อย 75%, 80%, 85%, 90%, 35, 95%, 96%, 97%, 98% หรือ 99% ตัวตนใด ๆ ของ ID SEQ NO 10. ในลักษณะต่อไปนี้การประดิษฐ์นี้ให้ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี, ซึ่งประกอบรวมด้วยก) ลำดับสายเบาที่มีอย่างน้อย 90% ตัวตนกับ ID SEQ NO 5 และข) ลำดับสายหนักที่มีอย่างน้อย 90% ตัวตนกับ ID SEQ NO 10. ในลักษณะต่อไปนี้การประดิษฐ์นี้ให้ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี, ซึ่งประกอบรวมด้วย 5 ก) ลำดับสายเบาที่มีอย่างน้อย 95% ตัวตนกับ ID SEQ NO 5 และ b) ห่วงโซ่หนักลำดับที่มีตัวตนอย่างน้อย95% กับ ID SEQ NO 10. แต่ในลักษณะต่อไปนี้การประดิษฐ์นี้ให้ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี, ซึ่งประกอบรวมด้วยก) ลำดับสายเบาที่มีอย่างน้อย 97% ตัวตนกับ ID SEQ NO 5 และข) ลำดับสายหนักที่มีอย่างน้อย 97% ตัวตนกับ ID SEQ NO 10. 10 ยังเป็นลักษณะต่อไปนี้การประดิษฐ์นี้ให้ฮิวเมไนซ์แอนติบอดีซึ่งประกอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

" ระยะ รูปแปรผัน CDR " ที่ใช้ในที่นี้ หมายถึง การ CDR ที่ได้รับการแก้ไขอย่างน้อยหนึ่ง เช่น 1 , 2 หรือ 3 , กรดอะมิโนทดแทน ( s ) , ลบ ( s ) หรือ 2 ( s )โดยที่แก้ไขโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งประกอบรวมด้วยที่รูปแปรผัน CDR อย่างมากมีลักษณะทางชีวภาพของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนก่อนการแก้ไข มันจะได้รับการชื่นชมว่า แต่ละ CDR
10 ที่สามารถแก้ไขได้ อาจต้องดัดแปลงคนเดียวหรือใช้ร่วมกับข้อมูลอื่น ในด้านหนึ่ง ,
การปรับเปลี่ยนทดแทน โดยเฉพาะอย่างยิ่งการอนุลักษณ์ ตัวอย่างดังแสดงใน ตารางที่ 2 ตาราง
2


ข้างโซ่สมาชิก
) เจอ เอ๋ วาล ลิว , ด้วย
เป็นกลางน้ำภาวะ เซอร์ , thr

พื้นฐานซึ่งเป็น ASP , asn , gln . ของเขา , , , ไม่ดี
เรซิดิวที่มีอิทธิพลต่อทิศทาง GLY โซ่ , โปร
หอม TRP , tyr , เพ

15 ตัวอย่างเช่นใน CDR แตกต่างกรดอะมิโนเรซิดิวของหน่วยรวมขั้นต่ำอาจ
ยังคงเหมือนเดิม แต่ที่ประกอบรวมด้วย flanking เรซิดิว CDR เป็นส่วนหนึ่งของ คาบัต หรือ chothia คำนิยาม ( s ) อาจจะทดแทนด้วย
เรซิดิวกรดอะมิโนอนุรักษ์เช่นโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งประกอบรวมด้วยแก้ไข CDRs หรือหน่วยผูกพันขั้นต่ำตามที่อธิบายไว้ข้างต้นอาจจะเรียกในที่นี้ว่า " CDRs " รูปแปรผันการทำงาน หรือ " หน่วยผูกพันการทำงาน
20 สายพันธุ์ "
โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้อาจจะสามารถผูก slag-3 . ในด้านหนึ่งการสมดุลคงที่ ( KD ) ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน - ปฏิสัมพันธ์ slag-3 เป็น 10nm หรือน้อยกว่า เช่น 1NM หรือน้อยกว่าตัวอย่างเช่นระหว่างบ่ายโมงและ 300 , 400 , 500pm หรือระหว่าง
และ 500pm 1NM . คนที่มีฝีมือจะชื่นชมว่ามีขนาดเล็กลงและตัวเลขมูลค่า 25 ยิ่งผูกพัน ส่วนกลับของ KD ( เช่น1 / KD ) คือค่าคงที่สมดุลสมาคม ( KA )
6





มีหน่วย m-1 คนที่มีฝีมือจะชื่นชมที่ใหญ่ขึ้น กะ ตัวเลขมูลค่าที่แข็งแกร่งผูก .
ในแง่มุมหนึ่ง การประดิษฐ์นี้ให้แอนติเจนยึดเกาะโปรตีนที่มีความสามารถในการจับกับโปรตีน
lag-3 KD น้อยกว่า 1NM ตัวอย่าง และ 300pm 01 ,ตอนที่ 5 โดยกำหนด biacoretm พื้นผิว PLASMON ( การวิเคราะห์โดยใช้ recombinant มนุษย์หรือลิง cynomolgus
lag-3 โดเมนและสร้างของ seq id หมายเลข : 51 และ 52 ตามลำดับ
นอกจากนี้ แอนติเจน binging โปรตีนของการประดิษฐ์นี้อาจมีความสามารถ
ผูก lag-3 ที่แสดงในตัวอย่าง el4 เซลล์หรือกระตุ้นมนุษย์ทันทีที เซลล์
โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้อาจยังสามารถใช้ lag-3 10 กระตุ้นเซลล์ T โดยเฉพาะ CD4 CD8 T lag-3 lag-3 และเซลล์ การลดปริมาณของ lag-3 เซลล์ T
อาจเกิดขึ้นด้วย เช่น แอนติบอดีกลุ่มเซลล์ ( พิษต่อเซลล์มะเร็ง ( adcc ) และ / หรือเสริมพิษต่อเซลล์มะเร็งขึ้นอยู่กับ ( CDC ) .
ในแง่มุมหนึ่งการการประดิษฐ์นี้ให้โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนที่มีความสามารถของ
ก่อให้เกิดมากกว่า 40% การลดปริมาณของแอนติเจนที่เฉพาะเจาะจง และ / หรือ lag-3 CD4 CD8 T เซลล์มนุษย์ 15 adcc ในร่างกายโดยใช้หลักมนุษย์เซลล์ T .
ในลักษณะต่อไป , การประดิษฐ์นี้ให้โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนนั้นที่ระดับความเข้มข้น 0.1pg/ml , สามารถก่อให้เกิดมากกว่า 50% การลดปริมาณในหลอด adcc assay โดยใช้ยูโรเปียม labelled lag-3 แสดง el4 เซลล์เป็นเซลล์เป้าหมายและมนุษย์ PBMCs
( เป็นเซลล์ โดยที่ที่แสดงออกต่อเป้าหมายไม่เกิน 50 : 1 และทดสอบวิ่ง 20 รอบระยะเวลา 2 ชั่วโมง% การสลายเซลล์จะถูกคำนวณบนพื้นฐานของยูโรเปียมปล่อยจาก lag-3 แสดงเซลล์ el4
.
ปฏิสัมพันธ์ระหว่างภูมิภาคคงที่ของโปรตีนและยึดเกาะแอนติเจนตัวรับ FC
ต่างๆ ( FCR ) ที่รวมถึง fcyri ( cd64 ) fcyrii ( cd32 ) และ fcyriii ( cd16 ) เชื่อกันว่าไกล่เกลี่ย
( ฟังก์ชันเช่น adcc และ กรมควบคุมโรคของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน . ที่สำคัญทางชีวภาพ 25 ผลสามารถเป็นผลของโต้งการทํางาน โดยปกติแล้ว ความสามารถในการไกล่เกลี่ยฟังก์ชัน (
ต้องผูกพันของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนเป็นแอนติเจนและไม่ทั้งหมดจะเป็นโปรตีนแอนติเจนผูกพัน
(
ทุกฟังก์ชันฟังก์ชัน ( สามารถวัดได้ในหลายวิธี ตัวอย่างเช่นผ่านทางที่รวมถึง (
โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนตัวอย่างเช่นแอนติบอดี้ของการประดิษฐ์นี้ผ่าน fcyriii ธรรมชาติ 30 นักฆ่าเซลล์หรือผ่าน fcyri เพื่อโมโนไซท / macrophages เพื่อวัดสำหรับฟังก์ชัน ( adcc . สำหรับ
ยกตัวอย่าง โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้สามารถถูกประเมินสำหรับ adcc โต้ง
ฟังก์ชันในธรรมชาติฆ่าเซลล์แบคทีเรีย ตัวอย่างของวิธีการดังกล่าวสามารถพบได้ในโล่ et al , 2001
วารสารเคมีชีวภาพ ฉบับที่ 276 , p6591-6604 ; แชปเปิ้ล et al , 2536 วารสาร
เคมี ชีวภาพ ฉบับที่ 268 , p25124-25131 ; เลเซอร์ et al , พีเอ็นเอจำกัด103 ; 4005-4010 .
3 ตัวอย่างของวิธีการกำหนดฟังก์ชันรวมถึง CDC ( อธิบายไว้ใน 1995 J อิมเมท 184:29-38
.
ในแง่มุมหนึ่งของการประดิษฐ์นี้ , โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนเป็นแอนติบอดี
7





คำว่า " แอนติบอดี " ที่ใช้ในที่นี้หมายถึงโมเลกุลที่มีอิมมูโนโกลบูลิน - ชอบโดเมนและรวมถึงโมโนโคลนอล ( เช่น IgA IgM , IgG , igd หรือ IgE ) , แบบที่ใช้ฮิวเมไนซ์ , , , , และ bispecific heteroconjugate แอนติบอดี ; โดเมนตัวแปรเดียว ( เช่น VL ) , โดเมน
( ป้าย®แอนติบอดี รวมชิ้นส่วนย่อย ) , แอนติเจน ,immunologically มีประสิทธิภาพชิ้นส่วนย่อย FAB , F ( ab ) 2 , FV , 5 = เชื่อมโยง FV FV , โซ่เดียว ปิดโครงสร้าง multispecific แอนติบอดี , =
scfv diabodies tandabstm , เชื่อมโยง , ฯลฯ และการแก้ไขใด ๆของรุ่นก่อน ( สรุป
" ทางเลือก " แอนติบอดี " รูปแบบและธรรมชาติดู holliger ฮัดสัน เทคโนโลยีชีวภาพ , 2005 , 23 , Vol . 9
1126-1136 )