Fourteen of the separated bands whi

Fourteen of the separated bands which represented major globulin
subunits or polypeptides were manually excised from the gel
and the gel pieces were de-stained with 50 mM NH4HCO3 in 50%
(v/v) acetonitrile (ACN) and dried for 10 min with 100% ACN and
then under vacuum for 30 min. Gel pieces were rehydrated in
30 lL 50mM NH4HCO3 containing 30 ng/lL sequencing-grade
trypsin (Promega) and incubated for 1 h at 4 C. After brief centrifugation,
excess trypsin solution was removed and samples were
incubated at 37 C for 16 h. On the following day, 30 lL 50% (v/v)
ACN with 1% (v/v) formic acid was added to the gel pieces which
were incubated for 1 h at 37 C. The supernatant containing the
peptides was collected after brief centrifugation. This was repeated
once. The combined supernatant was dried under vacuum before
reconstituted in 20 lL 1% (v/v) formic acid.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใน 14 ของวงดนตรีที่แยกต่างหากที่แสดงกลอบูลินที่สำคัญsubunits หรือเปปไทด์ได้ด้วยตนเอง excised จากเจและชิ้นเจได้ยกเลิกสีกับ 50 mM NH4HCO3 ใน 50%(v/v) acetonitrile (ACN) และแห้งสำหรับ 10 นาที 100% ACN และจากนั้น ภายใต้สุญญากาศสำหรับ 30 นาทีเจ ชิ้นถูก rehydrated ใน30 จะ 50 มม. NH4HCO3 ประกอบด้วย 30 ng/จะ จัดลำดับผลการเรียนทริปซิน (Promega) และ incubated สำหรับ h 1 ที่ค. 4 หลังจากย่อ centrifugationทริปซินส่วนเกินแก้ปัญหาถูกเอาออก และเก็บตัวอย่างดีincubated ที่ 37 C สำหรับ 16 h ในวันต่อไปนี้ จะ 30 50% (v/v)ACN กับกรดฟอร์มิก 1% (v/v) ถูกเพิ่มเข้าไปเจชิ้นซึ่งมี incubated สำหรับ h 1 ที่ 37 เซลเซียส ประกอบด้วย supernatantเปปไทด์ถูกเก็บหลังจากย่อ centrifugation นี้ถูกทำซ้ำครั้ง Supernatant รวมถูกอบแห้งภายใต้สุญญากาศก่อนreconstituted ในกรดฟอร์มิก 1% (v/v) จะ 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สิบสี่ของวงดนตรีที่แยกออกจากกันซึ่งเป็นตัวแทนของโกลบูลิสำคัญหน่วยย่อยหรือ polypeptides ถูกตัดด้วยตนเองจากเจลและชิ้นเจลถูกยกเลิกการย้อมด้วยสี50 มิลลิ NH4HCO3 ใน 50% (v / v) acetonitrile (ACN) และแห้งเป็นเวลา 10 นาทีกับ 100% ACN และจากนั้นภายใต้สูญญากาศเป็นเวลา30 นาที ชิ้นเจลได้รับการคืนรูปในวันที่ 30 จะมี 50mm NH4HCO3 30 ng / LL ลำดับชั้น trypsin (Promega) และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส หลังจากการหมุนเหวี่ยงสั้น ๆการแก้ปัญหา trypsin ส่วนเกินจะถูกลบออกและตัวอย่างที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมง ในวันต่อไปนี้ 30 จะ 50% (v / v) ACN 1% (v / v) กรดถูกบันทึกอยู่ในชิ้นเจลซึ่งถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สารละลายที่มีเปปไทด์ที่ถูกเก็บรวบรวมหลังจากการหมุนเหวี่ยงสั้น ๆ นี้ซ้ำครั้งเดียว สารละลายรวมแห้งภายใต้สูญญากาศก่อนที่จะสร้างขึ้นใน 20 จะ 1% (v / v) กรด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สิบสี่ของแยกวง ซึ่งเป็นตัวแทนหน่วยย่อยโปรตีนได้ด้วยตนเองที่สาขาหรือ

และตัดจากเจลเจลชิ้น de เปื้อน 50 mm nh4hco3 50 %
( v / v ) ไน ( ACN ) และแห้งสำหรับ 10 นาทีกับ 100% ACN และ
ภายใต้สุญญากาศเป็นเวลา 30 นาที เจลชิ้นได้ทำการ รีไฮเดรทมใน
30 จะ 50mm nh4hco3 ที่มี 30 ng / จะจัดลำดับเกรด
เอนไซม์ ( promega ) และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน 4  C หลังจากปั่นสั้นๆ สารละลายส่วนเกินออกทริป

ตัวอย่างและบ่มที่ 37  C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง ในวันต่อไปนี้ 30 จะ 50 เปอร์เซ็นต์ ( v / v )
ACN ด้วย 1% ( v / v ) กรดคือ เพิ่ม เจลชิ้นซึ่งถูกบ่ม
เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส  สูงที่มี
เปปรวบรวมหลังจากปั่นสั้นๆ นี้ซ้ำ
ครั้งโดยรวมก็แห้งภายใต้สูญญากาศสูงก่อน
สร้างใน 20 จะ 1% ( v / v ) กรด .