- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
AbstractEnteropathogenic E. coli (E
Abstract
Enteropathogenic E. coli (EPEC) belongs to a group of bacterial pathogens that induce epithelial cell actin rearrangements resulting in pedestal formation beneath adherent bacteria. This requires the secretion of specific virulence proteins needed for signal transduction and intimate adherence. EPEC interaction induces tyrosine phosphorylation of a protein in the host membrane, Hp90, which is the receptor for the EPEC outer membrane protein, intimin. Hp90–intimin interaction is essential for intimate attachment and pedestal formation. Here, we demonstrate that Hp90 is actually a bacterial protein (Tir). Thus, this bacterial pathogen inserts its own receptor into mammalian cell surfaces, to which it then adheres to trigger additional host signaling events and actin nucleation. It is also tyrosine-phosphorylated upon transfer into the host cell.
Introduction
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a member of a group of pathogenic organisms that adhere to host cells and cause localized accumulation of host actin beneath adherent organisms, collectively known as attaching and effacing pathogens (3 and 4). Pathogens in this group include enterohemorrhagic E. coli (EHEC, the causative agent of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome) and several other human and animal pathogens. EPEC continues to be a significant cause of infantile diarrhea in developing nations, contributing to high morbidity and mortality. EPEC forms small microcolonies on the surface of infected epithelial cells, followed by intimate contact and localized degeneration of the epithelial brush border microvilli, cumulating in an attaching and effacing (A/E) lesion. The A/E lesion (or pedestal) is associated with the assembly of highly organized cytoskeletal structures in epithelial cells immediately beneath the adherent bacteria that include the cytoskeletal components actin, α-actinin, myosin light chain, ezrin, and talin (9 and 23).
Recently, several of the bacterial components involved in pedestal formation have been identified (reviewed inDonnenberg et al. 1997). EPEC possesses a virulence plasmid that encodes the bundle-forming pilus (BFP) (Stone et al. 1996) and a positive virulence factor regulator, Per (14 and 19). All of the genes that encode products that are necessary for pedestal formation are found within a 35 kb pathogenicity island in the E. coli chromosome (24 and 25). Within the LEE region are several genes whose products have different functions, including type III secretion apparatus proteins, secreted effector molecules and their chaperones, and intimin.
Type III secretion systems are being increasingly found in many pathogenic gram-negative organisms (26, 7 and 8), and the role of the EPEC type III secretion system is to secrete proteins necessary for formation of the A/E lesion (16 and 19). At least two proteins secreted by the EPEC secretion system, EspA and EspB, are necessary for activating EPEC-induced signals in epithelial cells (10, 19 and 21). These signals include calcium and inositol phosphate fluxes, and tyrosine phosphorylation of Hp90, a 90 kDa protein associated with mammalian cell membranes (27 and 11). Mutations in espA or espB, or those in the type III secretion system (sep and cfm), are unable to signal or induce binding of the EPEC adhesin intimin to epithelial cell surfaces ( Rosenshine et al. 1996b).
Intimin is the product of a bacterial chromosomal LEE locus, eaeA, and is a 94 kDa EPEC outer membrane protein that is needed for intimate adherence ( Jerse et al. 1990). Mutants defective in eaeA form immature A/E lesions and do not organize phosphotyrosine proteins and cytoskeletal components beneath adherent bacteria, although epithelial signal transduction is still activated ( Rosenshine et al. 1996b). Intimin participates in reorganization of the underlying host cytoskeleton after other bacterial factors (EspA and EspB) stimulate epithelial signal transduction. Intimin binding to host cells also stimulates a second wave of signal transduction inside the mammalian cell, including tyrosine phosphorylation of phospholipase Cγ ( Kenny and Finlay 1997). We have recently shown that in cultured cells, intimin binds to the tyrosine-phosphorylated form of Hp90, but only if mammalian cells have been preinfected with EPEC strains possessing an intact type III secretion system capable of secreting EspA and EspB ( Rosenshine et al. 1996b). However, little is known about the identity of Hp90, other than that it is tyrosine-phosphorylated following EPEC infection and that it serves as a receptor for intimin. Phosphotyrosine proteins (presumably Hp90) are concentrated at the tip of the pedestal immediately beneath EPEC, but phosphotyrosine residues are not surface-exposed in unpermeabilized cells ( Rosenshine et al. 1992). Biochemically, Hp90 behaves as an integral host membrane protein and appears to be highly conserved. It also appears to play a key role in organizing polymerized actin under the adherent bacteria once it binds intimin.
In this paper, we show that, surprisingly, Hp90 is not a mammalian membrane protein, but instead is a bacterial protein whose delivery to the host cell is facilitated by the type III–secreted products EspA and EspB and then functions as the intimin receptor.
Results
Antibodies to a 78 kDa EPEC-Secreted Protein Cross-React with Hp90
During our attempts to purify Hp90, we found that a polyclonal rabbit antiserum raised against EPEC recognized a protein that comigrated precisely with enriched Hp90 from mammalian cell membranes. This cross-reactive band was not present when HeLa cells were infected with mutants defective for type III secretion, which also do not cause Hp90 tyrosine phosphorylation (Rosenshine et al. 1992). We also found that following infections that used radiolabeling conditions that specifically label EPEC but not HeLa proteins (Kenny and Finlay 1995), anti-phosphotyrosine (PY) antibodies immunoprecipitated a radiolabeled protein that comigrated with Hp90. In contrast, no radiolabeled Hp90 was precipitated when HeLa cell proteins were labeled. These preliminary findings led us to pursue the hypothesis that Hp90 might be of bacterial origin.
If Hp90 was of bacterial origin, it is likely that EPEC should be able to secrete this protein. We have shown that EPEC secretes several proteins that are involved in activating host cell signals and other events needed for intimate binding (Kenny and Finlay 1995). EPEC does not appear to secrete any visible protein of 90 kDa, the molecular mass of Hp90. We have optimized the secretion of EPEC proteins (28 and 18) and found that, under special culture conditions, EPEC secretes two additional proteins of 72 and 78 kDa (our unpublished data), in addition to EspA (25 kDa), EspB (37 kDa), EspC (110 kDa), and two other proteins of 39 and 40 kDa (Kenny and Finlay 1995). We found that the 72 and 78 kDa bands had the same amino-terminal sequence, PIGNLGNNVNGNHLIPPAPPLPSQTDGAAR, which was unrelated to any known EPEC protein. Additionally, antibodies raised against the other EPEC-secreted proteins did not recognize these proteins. Higher levels of the secreted 72 and 78 kDa proteins occurred when multiple copies of the Per positive regulon and special growth conditions were used (see Experimental Procedures). Thus, polyclonal mouse and rat antibodies to the 78 kDa EPEC protein were generated (see Experimental Procedures) to determine if these antibodies could recognize Hp90.
EPEC-infected HeLa cells were fractionated (Kenny and Finlay 1997) using saponin to release cytoplasmic proteins and Triton X-100 to solubilize membrane proteins, and these fractions were probed with both anti-PY (to detect Hp90) and anti-EPEC 78 kDa protein antibodies. Both antibodies reacted with proteins that behaved as Hp90 within the mammalian cell membrane fraction from infected but not uninfected cells (Figure 1A). Both antibodies also reacted with a 90 kDa protein in the insoluble (bacteria and cytoskeleton) fraction, which represents Hp90 bound to bacteria (Rosenshine et al. 1992). In addition, anti-PY antibodies recognized Ep85, an 85 kDa tyrosine-phosphorylated EPEC protein, in the insoluble fraction (Rosenshine et al. 1992). The anti-EPEC 78 kDa antibodies, but not the anti-PY antibodies, also reacted with the bacterial form of the 78 kDa protein in the insoluble bacteria-containing fraction.
Enteropathogenic E. coli (EPEC) belongs to a group of bacterial pathogens that induce epithelial cell actin rearrangements resulting in pedestal formation beneath adherent bacteria. This requires the secretion of specific virulence proteins needed for signal transduction and intimate adherence. EPEC interaction induces tyrosine phosphorylation of a protein in the host membrane, Hp90, which is the receptor for the EPEC outer membrane protein, intimin. Hp90–intimin interaction is essential for intimate attachment and pedestal formation. Here, we demonstrate that Hp90 is actually a bacterial protein (Tir). Thus, this bacterial pathogen inserts its own receptor into mammalian cell surfaces, to which it then adheres to trigger additional host signaling events and actin nucleation. It is also tyrosine-phosphorylated upon transfer into the host cell.
Introduction
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a member of a group of pathogenic organisms that adhere to host cells and cause localized accumulation of host actin beneath adherent organisms, collectively known as attaching and effacing pathogens (3 and 4). Pathogens in this group include enterohemorrhagic E. coli (EHEC, the causative agent of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome) and several other human and animal pathogens. EPEC continues to be a significant cause of infantile diarrhea in developing nations, contributing to high morbidity and mortality. EPEC forms small microcolonies on the surface of infected epithelial cells, followed by intimate contact and localized degeneration of the epithelial brush border microvilli, cumulating in an attaching and effacing (A/E) lesion. The A/E lesion (or pedestal) is associated with the assembly of highly organized cytoskeletal structures in epithelial cells immediately beneath the adherent bacteria that include the cytoskeletal components actin, α-actinin, myosin light chain, ezrin, and talin (9 and 23).
Recently, several of the bacterial components involved in pedestal formation have been identified (reviewed inDonnenberg et al. 1997). EPEC possesses a virulence plasmid that encodes the bundle-forming pilus (BFP) (Stone et al. 1996) and a positive virulence factor regulator, Per (14 and 19). All of the genes that encode products that are necessary for pedestal formation are found within a 35 kb pathogenicity island in the E. coli chromosome (24 and 25). Within the LEE region are several genes whose products have different functions, including type III secretion apparatus proteins, secreted effector molecules and their chaperones, and intimin.
Type III secretion systems are being increasingly found in many pathogenic gram-negative organisms (26, 7 and 8), and the role of the EPEC type III secretion system is to secrete proteins necessary for formation of the A/E lesion (16 and 19). At least two proteins secreted by the EPEC secretion system, EspA and EspB, are necessary for activating EPEC-induced signals in epithelial cells (10, 19 and 21). These signals include calcium and inositol phosphate fluxes, and tyrosine phosphorylation of Hp90, a 90 kDa protein associated with mammalian cell membranes (27 and 11). Mutations in espA or espB, or those in the type III secretion system (sep and cfm), are unable to signal or induce binding of the EPEC adhesin intimin to epithelial cell surfaces ( Rosenshine et al. 1996b).
Intimin is the product of a bacterial chromosomal LEE locus, eaeA, and is a 94 kDa EPEC outer membrane protein that is needed for intimate adherence ( Jerse et al. 1990). Mutants defective in eaeA form immature A/E lesions and do not organize phosphotyrosine proteins and cytoskeletal components beneath adherent bacteria, although epithelial signal transduction is still activated ( Rosenshine et al. 1996b). Intimin participates in reorganization of the underlying host cytoskeleton after other bacterial factors (EspA and EspB) stimulate epithelial signal transduction. Intimin binding to host cells also stimulates a second wave of signal transduction inside the mammalian cell, including tyrosine phosphorylation of phospholipase Cγ ( Kenny and Finlay 1997). We have recently shown that in cultured cells, intimin binds to the tyrosine-phosphorylated form of Hp90, but only if mammalian cells have been preinfected with EPEC strains possessing an intact type III secretion system capable of secreting EspA and EspB ( Rosenshine et al. 1996b). However, little is known about the identity of Hp90, other than that it is tyrosine-phosphorylated following EPEC infection and that it serves as a receptor for intimin. Phosphotyrosine proteins (presumably Hp90) are concentrated at the tip of the pedestal immediately beneath EPEC, but phosphotyrosine residues are not surface-exposed in unpermeabilized cells ( Rosenshine et al. 1992). Biochemically, Hp90 behaves as an integral host membrane protein and appears to be highly conserved. It also appears to play a key role in organizing polymerized actin under the adherent bacteria once it binds intimin.
In this paper, we show that, surprisingly, Hp90 is not a mammalian membrane protein, but instead is a bacterial protein whose delivery to the host cell is facilitated by the type III–secreted products EspA and EspB and then functions as the intimin receptor.
Results
Antibodies to a 78 kDa EPEC-Secreted Protein Cross-React with Hp90
During our attempts to purify Hp90, we found that a polyclonal rabbit antiserum raised against EPEC recognized a protein that comigrated precisely with enriched Hp90 from mammalian cell membranes. This cross-reactive band was not present when HeLa cells were infected with mutants defective for type III secretion, which also do not cause Hp90 tyrosine phosphorylation (Rosenshine et al. 1992). We also found that following infections that used radiolabeling conditions that specifically label EPEC but not HeLa proteins (Kenny and Finlay 1995), anti-phosphotyrosine (PY) antibodies immunoprecipitated a radiolabeled protein that comigrated with Hp90. In contrast, no radiolabeled Hp90 was precipitated when HeLa cell proteins were labeled. These preliminary findings led us to pursue the hypothesis that Hp90 might be of bacterial origin.
If Hp90 was of bacterial origin, it is likely that EPEC should be able to secrete this protein. We have shown that EPEC secretes several proteins that are involved in activating host cell signals and other events needed for intimate binding (Kenny and Finlay 1995). EPEC does not appear to secrete any visible protein of 90 kDa, the molecular mass of Hp90. We have optimized the secretion of EPEC proteins (28 and 18) and found that, under special culture conditions, EPEC secretes two additional proteins of 72 and 78 kDa (our unpublished data), in addition to EspA (25 kDa), EspB (37 kDa), EspC (110 kDa), and two other proteins of 39 and 40 kDa (Kenny and Finlay 1995). We found that the 72 and 78 kDa bands had the same amino-terminal sequence, PIGNLGNNVNGNHLIPPAPPLPSQTDGAAR, which was unrelated to any known EPEC protein. Additionally, antibodies raised against the other EPEC-secreted proteins did not recognize these proteins. Higher levels of the secreted 72 and 78 kDa proteins occurred when multiple copies of the Per positive regulon and special growth conditions were used (see Experimental Procedures). Thus, polyclonal mouse and rat antibodies to the 78 kDa EPEC protein were generated (see Experimental Procedures) to determine if these antibodies could recognize Hp90.
EPEC-infected HeLa cells were fractionated (Kenny and Finlay 1997) using saponin to release cytoplasmic proteins and Triton X-100 to solubilize membrane proteins, and these fractions were probed with both anti-PY (to detect Hp90) and anti-EPEC 78 kDa protein antibodies. Both antibodies reacted with proteins that behaved as Hp90 within the mammalian cell membrane fraction from infected but not uninfected cells (Figure 1A). Both antibodies also reacted with a 90 kDa protein in the insoluble (bacteria and cytoskeleton) fraction, which represents Hp90 bound to bacteria (Rosenshine et al. 1992). In addition, anti-PY antibodies recognized Ep85, an 85 kDa tyrosine-phosphorylated EPEC protein, in the insoluble fraction (Rosenshine et al. 1992). The anti-EPEC 78 kDa antibodies, but not the anti-PY antibodies, also reacted with the bacterial form of the 78 kDa protein in the insoluble bacteria-containing fraction.
0/5000
บทคัดย่อEnteropathogenic E. coli (EPEC) เป็นกลุ่มของโรคแบคทีเรียที่ก่อให้เกิดเซลล์ epithelial แอกติน rearrangements เกิดก่อเชิงใต้นฤมลแบคทีเรีย การหลั่งของโปรตีน virulence เฉพาะที่จำเป็นสำหรับสัญญาณ transduction และติดอย่างใกล้ชิด โต้ตอบ EPEC แท้จริง tyrosine phosphorylation ของโปรตีนในเยื่อโฮสต์ Hp90 ซึ่งเป็นตัวรับสำหรับโปรตีนเยื่อหุ้มภายนอก EPEC, intimin Hp90 – intimin โต้ตอบเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับใกล้ชิดก่อตัวแนบและเชิง ที่นี่ เราแสดงว่า Hp90 จริงแบคทีเรียโปรตีน (เทิร์นานอก) ดัง ศึกษานี้แบคทีเรียแทรกตัวรับตัวเองลงใน mammalian เซลล์ผิว ที่นั้นแล้วสอดคล้องทำให้เกิด nucleation แอกตินและโฮสต์เพิ่มเติมเหตุการณ์ตามปกติ นอกจากนี้ยังถูก phosphorylated tyrosine เมื่อโอนย้ายไปยังเซลล์โฮสต์แนะนำEnteropathogenic Escherichia coli (EPEC) เป็นสมาชิกของกลุ่มของสิ่งมีชีวิตอุบัติที่ยึดติดกับเซลล์โฮสต์ และทำให้เกิดการสะสมถิ่นของแอกตินโฮสต์ภายใต้ชีวิตนฤมล เรียกโดยรวมว่าแนบ และ effacing โรค (3 และ 4) โรคในกลุ่มนี้ได้แก่ enterohemorrhagic E. coli (EHEC ตัวแทนสาเหตุการ colitis เลือดออกและอาการยูรีเมีย hemolytic) และหลายอื่น ๆ มนุษย์ และสัตว์โรค EPEC ยังคงเป็นสาเหตุสำคัญของโรคอุจจาระร่วง infantile ในการพัฒนาประเทศ สนับสนุนสูง morbidity และตาย EPEC ฟอร์มเล็ก microcolonies บนพื้นผิวของเซลล์ epithelial ติดไวรัส ตาม ด้วยการสนิทสนม และภาษาท้องถิ่นเสื่อมการแปรง epithelial ขอบ microvilli สะสมในใบแนบ และ effacing แผล (A/E) แผล A/E (หรือเชิง) จะเชื่อมโยงกับแอสเซมบลีของโครงสร้าง cytoskeletal ที่สูงจัดในเซลล์ epithelial ทันทีใต้แบคทีเรียนฤมลที่ประกอบ ด้วยคอมโพเนนต์ cytoskeletal แอกติน α-actinin โซ่ไฟไมโอซิน ezrin, talin (9 และ 23)เมื่อเร็ว ๆ นี้ หลายส่วนประกอบแบคทีเรียที่เกี่ยวข้องกับการก่อตัวเชิงได้รับการระบุ (ทบทวน inDonnenberg et al. 1997) EPEC มี plasmid virulence ที่จแมป pilus เป็นกลุ่ม (BFP) (หินร้อยเอ็ด al. 1996) และมี virulence บวกปัจจัยควบคุม ต่อ (14 และ 19) ยีนที่เข้ารหัสผลิตภัณฑ์ที่จำเป็นสำหรับผู้แต่งเชิงทั้งหมดที่พบภายในเกาะ pathogenicity 35 kb ในโครโมโซม E. coli (24 และ 25) ในภูมิภาคลีมียีนหลายผลิตภัณฑ์มีฟังก์ชันต่าง ๆ รวมทั้งโปรตีนชนิด III หลั่งเครื่อง โมเลกุล secreted effector และ chaperones และ intiminชนิด III หลั่งระบบขึ้นอยู่ในหลายอุบัติแบคทีเรียแกรมลบสิ่งมีชีวิต (26, 7 และ 8), และบทบาทของชนิด EPEC III ระบบหลั่งจะหลั่งโปรตีนจำเป็นสำหรับการก่อตัวของรอยโรค A/E (16 และ 19) โปรตีนน้อยสอง secreted EPEC หลั่งระบบ EspA และ EspB จำเป็นสำหรับการเรียกใช้สัญญาณเกิด EPEC ใน epithelial เซลล์ (10, 19 และ 21) สัญญาณเหล่านี้ได้แก่แคลเซียม และ inositol fluxes ฟอสเฟต และ tyrosine phosphorylation ของ Hp90 โปรตีน kDa 90 ที่เกี่ยวข้องกับเยื่อหุ้มเซลล์ mammalian (27 และ 11) กลายพันธุ์ espA หรือ espB หรือในระบบหลั่ง III (sep และเย็น 500w), ชนิดไม่สามารถสัญญาณ หรือก่อให้เกิดการผูก intimin adhesin EPEC กับ epithelial เซลล์ผิว (Rosenshine et al. 1996b)Intimin เป็นผลิตภัณฑ์ของการแบคทีเรียของโครโมโซมลีโลกัสโพล eaeA และมีโปรตีนเมมเบรนนอก EPEC 94 kDa ต้องการต่าง ๆ อย่างใกล้ชิด (Jerse et al. 1990) สายพันธุ์ที่มีข้อบกพร่องใน eaeA เป็น immature A/E ได้ และไม่จัดระเบียบ phosphotyrosine โปรตีนและส่วนประกอบ cytoskeletal ใต้แบคทีเรียนฤมล แม้ว่าสัญญาณ epithelial transduction ยังเปิด (Rosenshine et al. 1996b) Intimin เข้าร่วมในลูกจ้างของ cytoskeleton โฮสต์ต้นหลังจากปัจจัยอื่น ๆ แบคทีเรีย (EspA และ EspB) กระตุ้นสัญญาณ epithelial transduction Intimin รวมโฮสต์เซลล์ยังกระตุ้นคลื่นสองของ transduction สัญญาณภายในเซลล์ mammalian รวม tyrosine phosphorylation ของ phospholipase Cγ (เคนนีและ Finlay 1997) เราเพิ่งได้แสดงว่า ในเซลล์อ่าง intimin binds ไปยังแบบฟอร์ม tyrosine phosphorylated ของ Hp90 แต่เฉพาะเซลล์ mammalian ได้ preinfected กับสายพันธุ์ EPEC มีชนิดของการเชื่อมระบบหลั่ง III สามารถ secreting EspA และ EspB (Rosenshine et al. 1996b) อย่างไรก็ตาม น้อยเป็นที่รู้จักเกี่ยวกับตัวตนของ Hp90 ใช่ว่า ถูก tyrosine phosphorylated ติดเชื้อ EPEC ดังต่อไปนี้ และจะทำหน้าที่เป็นตัวรับสำหรับ intimin วิลเลียม Phosphotyrosine (น่า Hp90) เข้มข้นที่แนะนำของเชิงใต้ EPEC ทันที แต่ตก phosphotyrosine ไม่สัมผัสกับพื้นผิวในเซลล์ unpermeabilized (Rosenshine et al. 1992) Biochemically, Hp90 ทำงานเป็นมีโฮสต์เป็นเมมเบรนโปรตีน และดูเหมือนจะมีอยู่สูง นอกจากนี้ยังปรากฏการเล่นบทบาทสำคัญในการจัดระเบียบแอกติน polymerized ภายใต้แบคทีเรียนฤมลเมื่อมัน binds intiminในเอกสารนี้ แสดง ที่จู่ ๆ Hp90 ไม่โปรตีนเมมเบรน mammalian แต่แทน โปรตีนจากแบคทีเรียที่ส่งไปยังเซลล์โฮสต์จะอาศัยชนิด III – secreted ผลิตภัณฑ์ EspA และ EspB แล้ว หน้าที่เป็นตัวรับ intiminผลลัพธ์แอนตี้การ kDa 78 Cross-React โปรตีน EPEC-Secreted กับ Hp90ในระหว่างความพยายามของเราจะบริสุทธิ์ Hp90 เราพบว่า antiserum กระต่าย polyclonal ที่ขึ้นกับ EPEC รู้จักโปรตีนที่ comigrated กับ Hp90 อุดมจากเยื่อหุ้มเซลล์ mammalian แม่นยำ วงนี้ cross-reactive ไม่อยู่เมื่อมีการติดเชื้อเซลล์ HeLa กับสายพันธุ์ข้อบกพร่องสำหรับชนิด III หลั่ง ซึ่งยัง ทำ Hp90 tyrosine phosphorylation (Rosenshine et al. 1992) เรายังพบว่า เชื้อที่ใช้ radiolabeling ต่อเงื่อนไขที่เฉพาะป้ายชื่อ EPEC แต่ไม่ HeLa โปรตีน (เคนนีและ Finlay 1995) immunoprecipitated แอนตี้ต่อต้าน-phosphotyrosine (PY) โปรตีน radiolabeled ที่ comigrated กับ Hp90 ในทางตรงกันข้าม Hp90 radiolabeled ไม่ถูกตกตะกอนเมื่อเซลล์ HeLa โปรตีนที่ชื่อ ค้นพบเบื้องต้นเหล่านี้นำเราไล่สมมติฐานที่ Hp90 อาจเป็นจุดเริ่มต้นของเชื้อแบคทีเรียถ้า Hp90 ของแบคทีเรีย เป็นไปได้ว่า EPEC ควรจะหลั่งโปรตีนนี้ เราได้แสดงว่า EPEC secretes โปรตีนต่าง ๆ ที่เกี่ยวข้องในการเปิดใช้งานโฮสต์เซลล์สัญญาณและกิจกรรมอื่น ๆ ที่จำเป็นสำหรับการรวมอย่างใกล้ชิด (เคนนีและ Finlay 1995) ไม่ EPEC จะ หลั่งโปรตีนใด ๆ มองเห็นของ 90 kDa มวลโมเลกุลของ Hp90 เรามีปรับการหลั่งโปรตีน EPEC (28 และ 18) และพบว่า ภายใต้เงื่อนไขพิเศษวัฒนธรรม EPEC secretes โปรตีนเพิ่มเติมสองของ 72 และ 78 kDa (ยกเลิกการประกาศข้อมูล), นอกจาก EspA (25 kDa), EspB (37 kDa), EspC (110 kDa), และโปรตีนอื่น ๆ สองของ 39 และ 40 kDa (เคนนีและ Finlay 1995) เราพบว่า วง kDa 72 และ 78 มีการเทอร์มินัลอะมิโนลำดับ PIGNLGNNVNGNHLIPPAPPLPSQTDGAAR ซึ่งเป็นโปรตีนใด ๆ EPEC รู้จักเห็น นอกจากนี้ แอนตี้ขึ้นกับอื่น ๆ EPEC secreted โปรตีนไม่รู้จักโปรตีนเหล่านี้ ระดับสูง secreted 72 และ 78 kDa โปรตีนเกิดขึ้นเมื่อหลายคัดลอกของ regulon บวกต่อ และใช้เงื่อนไขพิเศษในการเจริญเติบโต (ดูขั้นตอนการทดลอง) ดังนั้น มีสร้างแอนตี้เมาส์และหนูกับโปรตีน EPEC 78 kDa polyclonal (ดูขั้นตอนการทดลอง) เพื่อกำหนดว่าถ้าแอนตี้เหล่านี้สามารถจดจำ Hp90ติดเชื้อ EPEC เซลล์ HeLa ได้ fractionated (เคนนีและ Finlay 1997) ใช้ saponin ลั่นโปรตีน cytoplasmic และไตรตั้น X-100 solubilize เมมเบรนโปรตีน และเศษเหล่านี้ได้พิสูจน์กับ PY ป้องกัน (การตรวจ Hp90) และต่อต้าน EPEC 78 kDa โปรตีนแอนตี้ แอนตี้ทั้งปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับโปรตีนที่ทำงานเป็น Hp90 ภายในเศษ mammalian เยื่อเซลล์จากเซลล์ที่ติดเชื้อ แต่เชื้อไม่ (รูปที่ 1A) แอนตี้ทั้งยังปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับโปรตีน 90 kDa ในเศษส่วนไม่ละลาย (แบคทีเรียและ cytoskeleton) ซึ่งแสดงถึง Hp90 กับแบคทีเรีย (Rosenshine et al. 1992) นอกจากนี้ แอนตี้ต่อต้าน-PY รู้ Ep85 มี 85 kDa tyrosine phosphorylated EPEC โปรตีน เศษส่วนที่ไม่ละลายน้ำ (Rosenshine et al. 1992) แอนตี้ kDa ป้องกัน-EPEC 78 แต่ไม่ที่ PY ต่อต้านแอนตี้ นอกจากนี้ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับฟอร์มแบคทีเรียโปรตีน 78 kDa ในเศษส่วนที่ประกอบด้วยแบคทีเรียขึ้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
Abstract
Enteropathogenic E. coli (EPEC) belongs to a group of bacterial pathogens that induce epithelial cell actin rearrangements resulting in pedestal formation beneath adherent bacteria. This requires the secretion of specific virulence proteins needed for signal transduction and intimate adherence. EPEC interaction induces tyrosine phosphorylation of a protein in the host membrane, Hp90, which is the receptor for the EPEC outer membrane protein, intimin. Hp90–intimin interaction is essential for intimate attachment and pedestal formation. Here, we demonstrate that Hp90 is actually a bacterial protein (Tir). Thus, this bacterial pathogen inserts its own receptor into mammalian cell surfaces, to which it then adheres to trigger additional host signaling events and actin nucleation. It is also tyrosine-phosphorylated upon transfer into the host cell.
Introduction
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a member of a group of pathogenic organisms that adhere to host cells and cause localized accumulation of host actin beneath adherent organisms, collectively known as attaching and effacing pathogens (3 and 4). Pathogens in this group include enterohemorrhagic E. coli (EHEC, the causative agent of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome) and several other human and animal pathogens. EPEC continues to be a significant cause of infantile diarrhea in developing nations, contributing to high morbidity and mortality. EPEC forms small microcolonies on the surface of infected epithelial cells, followed by intimate contact and localized degeneration of the epithelial brush border microvilli, cumulating in an attaching and effacing (A/E) lesion. The A/E lesion (or pedestal) is associated with the assembly of highly organized cytoskeletal structures in epithelial cells immediately beneath the adherent bacteria that include the cytoskeletal components actin, α-actinin, myosin light chain, ezrin, and talin (9 and 23).
Recently, several of the bacterial components involved in pedestal formation have been identified (reviewed inDonnenberg et al. 1997). EPEC possesses a virulence plasmid that encodes the bundle-forming pilus (BFP) (Stone et al. 1996) and a positive virulence factor regulator, Per (14 and 19). All of the genes that encode products that are necessary for pedestal formation are found within a 35 kb pathogenicity island in the E. coli chromosome (24 and 25). Within the LEE region are several genes whose products have different functions, including type III secretion apparatus proteins, secreted effector molecules and their chaperones, and intimin.
Type III secretion systems are being increasingly found in many pathogenic gram-negative organisms (26, 7 and 8), and the role of the EPEC type III secretion system is to secrete proteins necessary for formation of the A/E lesion (16 and 19). At least two proteins secreted by the EPEC secretion system, EspA and EspB, are necessary for activating EPEC-induced signals in epithelial cells (10, 19 and 21). These signals include calcium and inositol phosphate fluxes, and tyrosine phosphorylation of Hp90, a 90 kDa protein associated with mammalian cell membranes (27 and 11). Mutations in espA or espB, or those in the type III secretion system (sep and cfm), are unable to signal or induce binding of the EPEC adhesin intimin to epithelial cell surfaces ( Rosenshine et al. 1996b).
Intimin is the product of a bacterial chromosomal LEE locus, eaeA, and is a 94 kDa EPEC outer membrane protein that is needed for intimate adherence ( Jerse et al. 1990). Mutants defective in eaeA form immature A/E lesions and do not organize phosphotyrosine proteins and cytoskeletal components beneath adherent bacteria, although epithelial signal transduction is still activated ( Rosenshine et al. 1996b). Intimin participates in reorganization of the underlying host cytoskeleton after other bacterial factors (EspA and EspB) stimulate epithelial signal transduction. Intimin binding to host cells also stimulates a second wave of signal transduction inside the mammalian cell, including tyrosine phosphorylation of phospholipase Cγ ( Kenny and Finlay 1997). We have recently shown that in cultured cells, intimin binds to the tyrosine-phosphorylated form of Hp90, but only if mammalian cells have been preinfected with EPEC strains possessing an intact type III secretion system capable of secreting EspA and EspB ( Rosenshine et al. 1996b). However, little is known about the identity of Hp90, other than that it is tyrosine-phosphorylated following EPEC infection and that it serves as a receptor for intimin. Phosphotyrosine proteins (presumably Hp90) are concentrated at the tip of the pedestal immediately beneath EPEC, but phosphotyrosine residues are not surface-exposed in unpermeabilized cells ( Rosenshine et al. 1992). Biochemically, Hp90 behaves as an integral host membrane protein and appears to be highly conserved. It also appears to play a key role in organizing polymerized actin under the adherent bacteria once it binds intimin.
In this paper, we show that, surprisingly, Hp90 is not a mammalian membrane protein, but instead is a bacterial protein whose delivery to the host cell is facilitated by the type III–secreted products EspA and EspB and then functions as the intimin receptor.
Results
Antibodies to a 78 kDa EPEC-Secreted Protein Cross-React with Hp90
During our attempts to purify Hp90, we found that a polyclonal rabbit antiserum raised against EPEC recognized a protein that comigrated precisely with enriched Hp90 from mammalian cell membranes. This cross-reactive band was not present when HeLa cells were infected with mutants defective for type III secretion, which also do not cause Hp90 tyrosine phosphorylation (Rosenshine et al. 1992). We also found that following infections that used radiolabeling conditions that specifically label EPEC but not HeLa proteins (Kenny and Finlay 1995), anti-phosphotyrosine (PY) antibodies immunoprecipitated a radiolabeled protein that comigrated with Hp90. In contrast, no radiolabeled Hp90 was precipitated when HeLa cell proteins were labeled. These preliminary findings led us to pursue the hypothesis that Hp90 might be of bacterial origin.
If Hp90 was of bacterial origin, it is likely that EPEC should be able to secrete this protein. We have shown that EPEC secretes several proteins that are involved in activating host cell signals and other events needed for intimate binding (Kenny and Finlay 1995). EPEC does not appear to secrete any visible protein of 90 kDa, the molecular mass of Hp90. We have optimized the secretion of EPEC proteins (28 and 18) and found that, under special culture conditions, EPEC secretes two additional proteins of 72 and 78 kDa (our unpublished data), in addition to EspA (25 kDa), EspB (37 kDa), EspC (110 kDa), and two other proteins of 39 and 40 kDa (Kenny and Finlay 1995). We found that the 72 and 78 kDa bands had the same amino-terminal sequence, PIGNLGNNVNGNHLIPPAPPLPSQTDGAAR, which was unrelated to any known EPEC protein. Additionally, antibodies raised against the other EPEC-secreted proteins did not recognize these proteins. Higher levels of the secreted 72 and 78 kDa proteins occurred when multiple copies of the Per positive regulon and special growth conditions were used (see Experimental Procedures). Thus, polyclonal mouse and rat antibodies to the 78 kDa EPEC protein were generated (see Experimental Procedures) to determine if these antibodies could recognize Hp90.
EPEC-infected HeLa cells were fractionated (Kenny and Finlay 1997) using saponin to release cytoplasmic proteins and Triton X-100 to solubilize membrane proteins, and these fractions were probed with both anti-PY (to detect Hp90) and anti-EPEC 78 kDa protein antibodies. Both antibodies reacted with proteins that behaved as Hp90 within the mammalian cell membrane fraction from infected but not uninfected cells (Figure 1A). Both antibodies also reacted with a 90 kDa protein in the insoluble (bacteria and cytoskeleton) fraction, which represents Hp90 bound to bacteria (Rosenshine et al. 1992). In addition, anti-PY antibodies recognized Ep85, an 85 kDa tyrosine-phosphorylated EPEC protein, in the insoluble fraction (Rosenshine et al. 1992). The anti-EPEC 78 kDa antibodies, but not the anti-PY antibodies, also reacted with the bacterial form of the 78 kDa protein in the insoluble bacteria-containing fraction.
Enteropathogenic E. coli (EPEC) belongs to a group of bacterial pathogens that induce epithelial cell actin rearrangements resulting in pedestal formation beneath adherent bacteria. This requires the secretion of specific virulence proteins needed for signal transduction and intimate adherence. EPEC interaction induces tyrosine phosphorylation of a protein in the host membrane, Hp90, which is the receptor for the EPEC outer membrane protein, intimin. Hp90–intimin interaction is essential for intimate attachment and pedestal formation. Here, we demonstrate that Hp90 is actually a bacterial protein (Tir). Thus, this bacterial pathogen inserts its own receptor into mammalian cell surfaces, to which it then adheres to trigger additional host signaling events and actin nucleation. It is also tyrosine-phosphorylated upon transfer into the host cell.
Introduction
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a member of a group of pathogenic organisms that adhere to host cells and cause localized accumulation of host actin beneath adherent organisms, collectively known as attaching and effacing pathogens (3 and 4). Pathogens in this group include enterohemorrhagic E. coli (EHEC, the causative agent of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome) and several other human and animal pathogens. EPEC continues to be a significant cause of infantile diarrhea in developing nations, contributing to high morbidity and mortality. EPEC forms small microcolonies on the surface of infected epithelial cells, followed by intimate contact and localized degeneration of the epithelial brush border microvilli, cumulating in an attaching and effacing (A/E) lesion. The A/E lesion (or pedestal) is associated with the assembly of highly organized cytoskeletal structures in epithelial cells immediately beneath the adherent bacteria that include the cytoskeletal components actin, α-actinin, myosin light chain, ezrin, and talin (9 and 23).
Recently, several of the bacterial components involved in pedestal formation have been identified (reviewed inDonnenberg et al. 1997). EPEC possesses a virulence plasmid that encodes the bundle-forming pilus (BFP) (Stone et al. 1996) and a positive virulence factor regulator, Per (14 and 19). All of the genes that encode products that are necessary for pedestal formation are found within a 35 kb pathogenicity island in the E. coli chromosome (24 and 25). Within the LEE region are several genes whose products have different functions, including type III secretion apparatus proteins, secreted effector molecules and their chaperones, and intimin.
Type III secretion systems are being increasingly found in many pathogenic gram-negative organisms (26, 7 and 8), and the role of the EPEC type III secretion system is to secrete proteins necessary for formation of the A/E lesion (16 and 19). At least two proteins secreted by the EPEC secretion system, EspA and EspB, are necessary for activating EPEC-induced signals in epithelial cells (10, 19 and 21). These signals include calcium and inositol phosphate fluxes, and tyrosine phosphorylation of Hp90, a 90 kDa protein associated with mammalian cell membranes (27 and 11). Mutations in espA or espB, or those in the type III secretion system (sep and cfm), are unable to signal or induce binding of the EPEC adhesin intimin to epithelial cell surfaces ( Rosenshine et al. 1996b).
Intimin is the product of a bacterial chromosomal LEE locus, eaeA, and is a 94 kDa EPEC outer membrane protein that is needed for intimate adherence ( Jerse et al. 1990). Mutants defective in eaeA form immature A/E lesions and do not organize phosphotyrosine proteins and cytoskeletal components beneath adherent bacteria, although epithelial signal transduction is still activated ( Rosenshine et al. 1996b). Intimin participates in reorganization of the underlying host cytoskeleton after other bacterial factors (EspA and EspB) stimulate epithelial signal transduction. Intimin binding to host cells also stimulates a second wave of signal transduction inside the mammalian cell, including tyrosine phosphorylation of phospholipase Cγ ( Kenny and Finlay 1997). We have recently shown that in cultured cells, intimin binds to the tyrosine-phosphorylated form of Hp90, but only if mammalian cells have been preinfected with EPEC strains possessing an intact type III secretion system capable of secreting EspA and EspB ( Rosenshine et al. 1996b). However, little is known about the identity of Hp90, other than that it is tyrosine-phosphorylated following EPEC infection and that it serves as a receptor for intimin. Phosphotyrosine proteins (presumably Hp90) are concentrated at the tip of the pedestal immediately beneath EPEC, but phosphotyrosine residues are not surface-exposed in unpermeabilized cells ( Rosenshine et al. 1992). Biochemically, Hp90 behaves as an integral host membrane protein and appears to be highly conserved. It also appears to play a key role in organizing polymerized actin under the adherent bacteria once it binds intimin.
In this paper, we show that, surprisingly, Hp90 is not a mammalian membrane protein, but instead is a bacterial protein whose delivery to the host cell is facilitated by the type III–secreted products EspA and EspB and then functions as the intimin receptor.
Results
Antibodies to a 78 kDa EPEC-Secreted Protein Cross-React with Hp90
During our attempts to purify Hp90, we found that a polyclonal rabbit antiserum raised against EPEC recognized a protein that comigrated precisely with enriched Hp90 from mammalian cell membranes. This cross-reactive band was not present when HeLa cells were infected with mutants defective for type III secretion, which also do not cause Hp90 tyrosine phosphorylation (Rosenshine et al. 1992). We also found that following infections that used radiolabeling conditions that specifically label EPEC but not HeLa proteins (Kenny and Finlay 1995), anti-phosphotyrosine (PY) antibodies immunoprecipitated a radiolabeled protein that comigrated with Hp90. In contrast, no radiolabeled Hp90 was precipitated when HeLa cell proteins were labeled. These preliminary findings led us to pursue the hypothesis that Hp90 might be of bacterial origin.
If Hp90 was of bacterial origin, it is likely that EPEC should be able to secrete this protein. We have shown that EPEC secretes several proteins that are involved in activating host cell signals and other events needed for intimate binding (Kenny and Finlay 1995). EPEC does not appear to secrete any visible protein of 90 kDa, the molecular mass of Hp90. We have optimized the secretion of EPEC proteins (28 and 18) and found that, under special culture conditions, EPEC secretes two additional proteins of 72 and 78 kDa (our unpublished data), in addition to EspA (25 kDa), EspB (37 kDa), EspC (110 kDa), and two other proteins of 39 and 40 kDa (Kenny and Finlay 1995). We found that the 72 and 78 kDa bands had the same amino-terminal sequence, PIGNLGNNVNGNHLIPPAPPLPSQTDGAAR, which was unrelated to any known EPEC protein. Additionally, antibodies raised against the other EPEC-secreted proteins did not recognize these proteins. Higher levels of the secreted 72 and 78 kDa proteins occurred when multiple copies of the Per positive regulon and special growth conditions were used (see Experimental Procedures). Thus, polyclonal mouse and rat antibodies to the 78 kDa EPEC protein were generated (see Experimental Procedures) to determine if these antibodies could recognize Hp90.
EPEC-infected HeLa cells were fractionated (Kenny and Finlay 1997) using saponin to release cytoplasmic proteins and Triton X-100 to solubilize membrane proteins, and these fractions were probed with both anti-PY (to detect Hp90) and anti-EPEC 78 kDa protein antibodies. Both antibodies reacted with proteins that behaved as Hp90 within the mammalian cell membrane fraction from infected but not uninfected cells (Figure 1A). Both antibodies also reacted with a 90 kDa protein in the insoluble (bacteria and cytoskeleton) fraction, which represents Hp90 bound to bacteria (Rosenshine et al. 1992). In addition, anti-PY antibodies recognized Ep85, an 85 kDa tyrosine-phosphorylated EPEC protein, in the insoluble fraction (Rosenshine et al. 1992). The anti-EPEC 78 kDa antibodies, but not the anti-PY antibodies, also reacted with the bacterial form of the 78 kDa protein in the insoluble bacteria-containing fraction.
การแปล กรุณารอสักครู่..
นามธรรม
enteropathogenic E . coli ( epec ) อยู่ในกลุ่มของแบคทีเรียก่อโรคที่ทำให้เซลล์เยื่อบุผิว actin rearrangements เป็นผลในการพัฒนาภายใต้แท่นติดแบคทีเรีย ต้องมีการหลั่งโปรตีนเฉพาะโรคที่จำเป็นสำหรับการส่งสัญญาณและใกล้ชิดการยึดมั่น epec ปฏิสัมพันธ์ทำให้ซีนฟอสโฟริเลชันของโปรตีนในเยื่อ hp90 โฮสต์ , ,ซึ่งเป็นยาสำหรับ epec ผิวนอกของโปรตีน อินติมิน . hp90 –อินติมินปฏิสัมพันธ์เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการสร้างความผูกพันใกล้ชิดและแท่น ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่า hp90 เป็นจริงโปรตีนแบคทีเรีย ( TIR ) ดังนั้น , เชื้อโรคแบคทีเรียนี้แทรกตัวรับในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมพื้นผิวของตัวเอง ,ซึ่งก็สอดคล้องกับการเรียกเพิ่มเติมโฮสต์เหตุการณ์และ actin nucleation . มันเป็นซีนฟอสฟอรีเลเตตเมื่อโอนเข้าไปในเซลล์โฮสต์
บทนำ
enteropathogenic Escherichia coli ( epec ) เป็นสมาชิกของกลุ่มของสิ่งมีชีวิตเชื้อโรคที่ยึดติดกับโฮสต์เซลล์และทำให้เกิดการสะสมของแอกทินโฮสต์ภายใต้สานุศิษย์เป็นสิ่งมีชีวิตซึ่งเรียกว่าการ effacing และเชื้อโรค ( 3 และ 4 ) โรคในกลุ่มนี้ ได้แก่ enterohemorrhagic E . coli ( EHEC , ตัวแทนของ hemorrhagic colitis และสาเหตุ hemolytic โรคไตวายเรื้อรัง และโรคอื่น ๆ ) มนุษย์และสัตว์หลาย epec ยังคงเป็นสาเหตุสำคัญของอุจจาระร่วงในทารกในประเทศกำลังพัฒนา สาเหตุการเจ็บป่วยสูงและอัตราการตายepec รูปแบบ microcolonies ขนาดเล็กบนพื้นผิวของเซลล์เยื่อติดเชื้อตามถิ่นติดต่อใกล้ชิดและการเสื่อมของเยื่อแปรงชายแดนพบ cumulating ในการ effacing ( A / E ) และรอยโรคA / E การบาดเจ็บ ( หรือแท่น ) เกี่ยวข้องกับการจัดระเบียบอย่างมากไซโตร กเลตัลโครงสร้างในเซลล์เยื่อได้ทันทีภายใต้สานุศิษย์แบคทีเรีย ได้แก่ แอลฟาไซโตร กเลตัล actin ส่วนประกอบ , actinin myosin light chain Ezrin , , , และ talin ( 9 และ 23 ) .
เมื่อเร็วๆ นี้หลายองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องกับการก่อตัวของเชื้อแบคทีเรียฐานได้รับการระบุ ( ดู indonnenberg et al . 1997 ) epec ครบถ้วนภัยสังคมสายพันธุ์ที่ encodes มัดเป็นขน ( คำสารภาพ ) ( หิน et al . 1996 ) และเป็นปัจจัยบวกต่อโรคควบคุม ( 14 และ 19 )ทั้งหมดของยีนที่เข้ารหัสผลิตภัณฑ์ที่จำเป็นในการสร้างฐานที่พบภายใน 35 กิโลเขตเกาะใน E . coli โครโมโซม ( 24 และ 25 ) ภายในภูมิภาค ลี มียีนหลายที่มีผลิตภัณฑ์ที่มีฟังก์ชั่นต่าง ๆรวมทั้งอุปกรณ์ประเภทที่ 3 การหลั่งโปรตีนที่หลั่ง ( โมเลกุลและผู้ดูแลของพวกเขา , และอินติมิน
ระบบการหลั่ง 3 ชนิดจะถูกมากขึ้นที่พบในสิ่งมีชีวิตและเชื้อโรคมากมาย ( 26 , 7 และ 8 ) และบทบาทของประเภท epec 3 ระบบคือการหลั่งโปรตีนที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาของรอยโรค ( E / 16 และ 19 ) อย่างน้อยสองโปรตีนที่หลั่งมาจากระบบการหลั่ง epec , เอสปา และ espb ที่จําเป็นสําหรับการกระตุ้น , epec สัญญาณในเซลล์เยื่อ ( 1019 และ 21 ) สัญญาณเหล่านี้ ได้แก่ แคลเซียม และฟอสเฟตต่อ Inositol และไทโรซีนฟอสโฟริเลชันของ hp90 , 90 kDa โปรตีนเกี่ยวข้องกับเยื่อหุ้มเซลล์ ( 27 ) และ 11 ) การกลายพันธุ์ในเอสปาหรือ espb หรือผู้ที่อยู่ในประเภทที่ 3 ( และระบบการหลั่งเพื่อ cfm ) ไม่สามารถที่จะส่งสัญญาณหรือก่อให้เกิดข้อผูกพันของ epec adhesin อินติมินในเซลล์เยื่อบุผิวพื้นผิว ( rosenshine et al .
1996b )อินติมินเป็นผลิตภัณฑ์ของตน eaea โครโมโซมแบคทีเรียลี , และ 94 กิโล epec ผิวนอกของโปรตีนที่จำเป็นสำหรับการใกล้ชิด ( jerse et al . 1990 ) สายพันธุ์ eaea บกพร่องในรูปแบบอ่อน E / แผลและไม่ได้จัดโปรตีน phosphotyrosine และส่วนประกอบไซโตร กเลตัลใต้ติดแบคทีเรียถึงแม้ว่าการส่งสัญญาณเหล่านี้ยังใช้งาน ( rosenshine et al . 1996b ) อินติมินมีส่วนร่วมในการปรับโครงสร้างของบริษัทโฮสต์ขาดตอนหลังจากที่ปัจจัยแบคทีเรียอื่น ๆ ( Espa espb และ ) กระตุ้นสัญญาณเปลี่ยนลำดับ อินติมินผูกพันกับโฮสต์เซลล์และกระตุ้นคลื่นที่สองของสัญญาณภายในเซลล์การควบคุมพลังงาน ,รวมซีนฟอสโฟริเลชันของ phospholipase C γ ( Kenny และฟินเลย์ 1997 ) เราได้รับเมื่อเร็ว ๆนี้แสดงให้เห็นว่าในการเพาะเลี้ยงเซลล์ อินติมินที่ผูกกับซีนฟอสฟอรีเลเตตรูป hp90 แต่ถ้าเลี้ยงเซลล์ได้ preinfected กับ epec สายพันธุ์ครอบครองครบถ้วนสามประเภทของระบบการหลั่งได้หลั่ง และ espb ( Espa rosenshine et al . 1996b ) อย่างไรก็ตามเป็นที่รู้จักกันเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับเอกลักษณ์ของ hp90 นอกเหนือจากนั้นมันเป็นซีนฟอสฟอรีเลเตตดังต่อไปนี้การติดเชื้อ epec และว่ามันทำหน้าที่เป็นรีเซพเตอร์สำหรับอินติมิน . โปรตีน phosphotyrosine ( สันนิษฐาน hp90 ) เป็นกระจุกที่ปลายของฐานทันทีภายใต้ epec แต่ phosphotyrosine ตกค้างไม่ได้พื้นผิวสัมผัส unpermeabilized เซลล์ ( rosenshine et al . 1992 ) biochemically ,hp90 ทำตัวเป็นโฮสต์ integral membrane protein และปรากฏเป็นในเชิงอนุรักษ์ . มันยังปรากฏบทบาทสําคัญในการจัดระเบียบ polymerized actin ภายใต้สานุศิษย์แบคทีเรียเมื่อมันผูกอินติมิน
ในกระดาษนี้เราแสดงให้เห็นว่า จู่ ๆ hp90 ไม่ใช่เฉพาะโปรตีนเมมเบรน ,
enteropathogenic E . coli ( epec ) อยู่ในกลุ่มของแบคทีเรียก่อโรคที่ทำให้เซลล์เยื่อบุผิว actin rearrangements เป็นผลในการพัฒนาภายใต้แท่นติดแบคทีเรีย ต้องมีการหลั่งโปรตีนเฉพาะโรคที่จำเป็นสำหรับการส่งสัญญาณและใกล้ชิดการยึดมั่น epec ปฏิสัมพันธ์ทำให้ซีนฟอสโฟริเลชันของโปรตีนในเยื่อ hp90 โฮสต์ , ,ซึ่งเป็นยาสำหรับ epec ผิวนอกของโปรตีน อินติมิน . hp90 –อินติมินปฏิสัมพันธ์เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการสร้างความผูกพันใกล้ชิดและแท่น ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่า hp90 เป็นจริงโปรตีนแบคทีเรีย ( TIR ) ดังนั้น , เชื้อโรคแบคทีเรียนี้แทรกตัวรับในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมพื้นผิวของตัวเอง ,ซึ่งก็สอดคล้องกับการเรียกเพิ่มเติมโฮสต์เหตุการณ์และ actin nucleation . มันเป็นซีนฟอสฟอรีเลเตตเมื่อโอนเข้าไปในเซลล์โฮสต์
บทนำ
enteropathogenic Escherichia coli ( epec ) เป็นสมาชิกของกลุ่มของสิ่งมีชีวิตเชื้อโรคที่ยึดติดกับโฮสต์เซลล์และทำให้เกิดการสะสมของแอกทินโฮสต์ภายใต้สานุศิษย์เป็นสิ่งมีชีวิตซึ่งเรียกว่าการ effacing และเชื้อโรค ( 3 และ 4 ) โรคในกลุ่มนี้ ได้แก่ enterohemorrhagic E . coli ( EHEC , ตัวแทนของ hemorrhagic colitis และสาเหตุ hemolytic โรคไตวายเรื้อรัง และโรคอื่น ๆ ) มนุษย์และสัตว์หลาย epec ยังคงเป็นสาเหตุสำคัญของอุจจาระร่วงในทารกในประเทศกำลังพัฒนา สาเหตุการเจ็บป่วยสูงและอัตราการตายepec รูปแบบ microcolonies ขนาดเล็กบนพื้นผิวของเซลล์เยื่อติดเชื้อตามถิ่นติดต่อใกล้ชิดและการเสื่อมของเยื่อแปรงชายแดนพบ cumulating ในการ effacing ( A / E ) และรอยโรคA / E การบาดเจ็บ ( หรือแท่น ) เกี่ยวข้องกับการจัดระเบียบอย่างมากไซโตร กเลตัลโครงสร้างในเซลล์เยื่อได้ทันทีภายใต้สานุศิษย์แบคทีเรีย ได้แก่ แอลฟาไซโตร กเลตัล actin ส่วนประกอบ , actinin myosin light chain Ezrin , , , และ talin ( 9 และ 23 ) .
เมื่อเร็วๆ นี้หลายองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องกับการก่อตัวของเชื้อแบคทีเรียฐานได้รับการระบุ ( ดู indonnenberg et al . 1997 ) epec ครบถ้วนภัยสังคมสายพันธุ์ที่ encodes มัดเป็นขน ( คำสารภาพ ) ( หิน et al . 1996 ) และเป็นปัจจัยบวกต่อโรคควบคุม ( 14 และ 19 )ทั้งหมดของยีนที่เข้ารหัสผลิตภัณฑ์ที่จำเป็นในการสร้างฐานที่พบภายใน 35 กิโลเขตเกาะใน E . coli โครโมโซม ( 24 และ 25 ) ภายในภูมิภาค ลี มียีนหลายที่มีผลิตภัณฑ์ที่มีฟังก์ชั่นต่าง ๆรวมทั้งอุปกรณ์ประเภทที่ 3 การหลั่งโปรตีนที่หลั่ง ( โมเลกุลและผู้ดูแลของพวกเขา , และอินติมิน
ระบบการหลั่ง 3 ชนิดจะถูกมากขึ้นที่พบในสิ่งมีชีวิตและเชื้อโรคมากมาย ( 26 , 7 และ 8 ) และบทบาทของประเภท epec 3 ระบบคือการหลั่งโปรตีนที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาของรอยโรค ( E / 16 และ 19 ) อย่างน้อยสองโปรตีนที่หลั่งมาจากระบบการหลั่ง epec , เอสปา และ espb ที่จําเป็นสําหรับการกระตุ้น , epec สัญญาณในเซลล์เยื่อ ( 1019 และ 21 ) สัญญาณเหล่านี้ ได้แก่ แคลเซียม และฟอสเฟตต่อ Inositol และไทโรซีนฟอสโฟริเลชันของ hp90 , 90 kDa โปรตีนเกี่ยวข้องกับเยื่อหุ้มเซลล์ ( 27 ) และ 11 ) การกลายพันธุ์ในเอสปาหรือ espb หรือผู้ที่อยู่ในประเภทที่ 3 ( และระบบการหลั่งเพื่อ cfm ) ไม่สามารถที่จะส่งสัญญาณหรือก่อให้เกิดข้อผูกพันของ epec adhesin อินติมินในเซลล์เยื่อบุผิวพื้นผิว ( rosenshine et al .
1996b )อินติมินเป็นผลิตภัณฑ์ของตน eaea โครโมโซมแบคทีเรียลี , และ 94 กิโล epec ผิวนอกของโปรตีนที่จำเป็นสำหรับการใกล้ชิด ( jerse et al . 1990 ) สายพันธุ์ eaea บกพร่องในรูปแบบอ่อน E / แผลและไม่ได้จัดโปรตีน phosphotyrosine และส่วนประกอบไซโตร กเลตัลใต้ติดแบคทีเรียถึงแม้ว่าการส่งสัญญาณเหล่านี้ยังใช้งาน ( rosenshine et al . 1996b ) อินติมินมีส่วนร่วมในการปรับโครงสร้างของบริษัทโฮสต์ขาดตอนหลังจากที่ปัจจัยแบคทีเรียอื่น ๆ ( Espa espb และ ) กระตุ้นสัญญาณเปลี่ยนลำดับ อินติมินผูกพันกับโฮสต์เซลล์และกระตุ้นคลื่นที่สองของสัญญาณภายในเซลล์การควบคุมพลังงาน ,รวมซีนฟอสโฟริเลชันของ phospholipase C γ ( Kenny และฟินเลย์ 1997 ) เราได้รับเมื่อเร็ว ๆนี้แสดงให้เห็นว่าในการเพาะเลี้ยงเซลล์ อินติมินที่ผูกกับซีนฟอสฟอรีเลเตตรูป hp90 แต่ถ้าเลี้ยงเซลล์ได้ preinfected กับ epec สายพันธุ์ครอบครองครบถ้วนสามประเภทของระบบการหลั่งได้หลั่ง และ espb ( Espa rosenshine et al . 1996b ) อย่างไรก็ตามเป็นที่รู้จักกันเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับเอกลักษณ์ของ hp90 นอกเหนือจากนั้นมันเป็นซีนฟอสฟอรีเลเตตดังต่อไปนี้การติดเชื้อ epec และว่ามันทำหน้าที่เป็นรีเซพเตอร์สำหรับอินติมิน . โปรตีน phosphotyrosine ( สันนิษฐาน hp90 ) เป็นกระจุกที่ปลายของฐานทันทีภายใต้ epec แต่ phosphotyrosine ตกค้างไม่ได้พื้นผิวสัมผัส unpermeabilized เซลล์ ( rosenshine et al . 1992 ) biochemically ,hp90 ทำตัวเป็นโฮสต์ integral membrane protein และปรากฏเป็นในเชิงอนุรักษ์ . มันยังปรากฏบทบาทสําคัญในการจัดระเบียบ polymerized actin ภายใต้สานุศิษย์แบคทีเรียเมื่อมันผูกอินติมิน
ในกระดาษนี้เราแสดงให้เห็นว่า จู่ ๆ hp90 ไม่ใช่เฉพาะโปรตีนเมมเบรน ,
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- field study
- คุณเพิ่งตื่น
- แล้วเจอกัน
- ทุกครั้งที่ผมอยู่กับเขาผมจะทะเลาะกันตลอด
- i m plan to go out
- ฉันเห็นข้อมูลของคุณ ระบุว่าคุณอยู่ในเมือ
- But I prefer the sea.
- มิตรภาพเป็นสิ่งสำคัญ
- Evaluation of weight loss and TS
- An experiment was conducted to assess th
- consistent
- An experiment was conducted to assess th
- หลับฝันดีนะฝันเห็นกันด้วยนะแล้วเราไปเจอก
- display
- The ASEAN is important with economic Tha
- To be honest I hardly leftWell, I will g
- ตัน ภาสกรนที
- จนกระทั่งได้รับเอกราชในเดือนมิถุนายน 196
- To be honest I hardly leftWell, I will g
- tourist guide (noun)
- by now
- the remaining dried fat-free tissue were
- A few are having picnics or flying kites
- น้ำทะเลเป็นสีเขียวมรกต
