MATERIALS AND METHODSConstruction o

MATERIALS AND METHODS
Construction of binary vector for rice
transformation
The OSB2 gene of 1,365 bp isolated from
cDNA prepared from total RNA of young leaves of
black rice variety Khum (collected from Nong-Tao-
Kham village, Sansai district, Chiang Mai, Thailand)
was revealed by our previous report (Inta et al.,
2013). The OSB2 gene was cloned in pGEM-T Easy
(Promega, USA) and digested by EcoRI. Then the
EcoRI-cut OSB2 gene was blunt ended by using
End-ItTM DNA End-Repair Kit (Epicentre, USA) and
inserted into p2CA (pUC19 containing a dual 35s
promoter and a nos terminator) to construct the
cassette of OSB2 gene under the control of a dual
35s promoter and a nos terminator. The gene
cassette (dual 35sP::OSB2::Tnos) was cloned into a
binary vector pCAMBIA1305.1 (Cambia, Australia)
at HindIII/EcoRI sites to construct pPI01_B2S which
contained hygromycin phosphotransferase (hptII) as
a selectable marker gene and β-glucuronidase
(GUSPlus) as a reporter gene (Figure 1). The
pPI01_B2S was introduced into Agrobacterium
tumefaciens strain AGL1 to be used for transformation
of rice.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการสร้างเวกเตอร์ไบนารีสำหรับข้าวการเปลี่ยนแปลงยีน OSB2 ของ 1,365 bp โดดเดี่ยวเตรียมจากอาร์เอ็นเอทั้งหมดของใบอ่อนของ cDNAข้าวหลากหลายคุ้ม (รวบรวมจากหนอง -เทา - ดำคำหมู่ อำเภอสันทราย เชียงใหม่ ไทยถูกเปิดเผย โดยรายงานของเราก่อนหน้านี้ (Inta et al.,2013) ยีน OSB2 ถูกโคลนใน Easy pGEM-T(Promega สหรัฐอเมริกา) และเจ่า ด้วย EcoRI นั้นมียีน OSB2 EcoRI ตัดทื่อสิ้นสุดโดยชุดปลายซ่อมแซมดีเอ็นเอสิ้น ItTM (ลอต สหรัฐอเมริกา) และใส่เข้าไปใน p2CA (pUC19 ประกอบด้วย 35s คู่โปรโมเตอร์และเป็นหมายเลขเทอร์มิเนเตอร์) เพื่อสร้างการเทปของยีน OSB2 ภายใต้การควบคุมของคู่ความ35s โปรโมเตอร์และเทอร์มิเนเตอร์ชุดหมายเลขที่ ยีนเทป (dual 35sP::OSB2::Tnos) ถูกโคลนเข้าไปในตัวpCAMBIA1305.1 เวกเตอร์แบบไบนารี (Cambia ออสเตรเลีย)ที่เว็บไซต์ HindIII/EcoRI จะสร้าง pPI01_B2S ที่มี hygromycin phosphotransferase (hptII) เป็นยีนเครื่องหมายเลือกและβ-glucuronidase(GUSPlus) เป็นยีนโปรแกรมรายงาน (รูปที่ 1) ที่pPI01_B2S ถูกนำเข้าสู่อโกรแบคทีเรียมAGL1 จะใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงสายพันธุ์ tumefaciensของข้าว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการก่อสร้างเวกเตอร์ไบนารีข้าวเปลี่ยนแปลงยีนของOSB2 1,365 bp ที่แยกได้จากcDNA ที่เตรียมจาก RNA รวมของใบอ่อนของข้าวสีดำหลากหลายคุ้ม(เก็บมาจากหนอง Tao- หมู่บ้านขามอำเภอสันทรายจังหวัดเชียงใหม่ประเทศไทย) เป็น เปิดเผยในรายงานก่อนหน้านี้ (Inta et al., 2013) ยีน OSB2 เป็นโคลนใน pGEM-T ง่าย(Promega สหรัฐอเมริกา) และย่อยโดย EcoRI แล้วOSB2 EcoRI ตัดยีนทื่อจบลงด้วยการใช้ปลายItTM ดีเอ็นเอ End-ซ่อมแซมชุด (ศูนย์กลางสหรัฐอเมริกา) และแทรกเข้าไปในp2CA (pUC19 ที่มีคู่ 35s โปรโมเตอร์และเทอร์มิ Nos) เพื่อสร้างเทปยีนOSB2 ภายใต้ การควบคุมของคู่ก่อการ35s และเทอร์มิกัดกร่อน ยีนเทป (คู่ 35sP :: OSB2 :: TNOs) เป็นโคลนเป็นเวกเตอร์ไบนารีpCAMBIA1305.1 (Cambia, ออสเตรเลีย) ที่เว็บไซต์ HindIII / EcoRI จะสร้าง pPI01_B2S ซึ่งมีphosphotransferase ไฮโกร (hptII) เป็นยีนเครื่องหมายเลือกและβ- glucuronidase (GUSPlus) เป็นยีนนักข่าว (รูปที่ 1) pPI01_B2S ถูกนำเข้าสู่ Agrobacterium tumefaciens AGL1 สายพันธุ์ที่จะใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงของข้าว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการก่อสร้างเวกเตอร์ไบนารีสำหรับ


แปลงข้าว osb2 ยีน 1365 BP ที่แยกจาก cDNA ที่เตรียมจากอาร์เอ็นเอทั้งหมด

คุ้มต่าง ๆของใบอ่อนของข้าวสีดำ ( รวบรวมจากหนองเต่า -
คำหมู่บ้าน อำเภอสันทราย เชียงใหม่ )
ถูกเปิดเผยโดยรายงานก่อนหน้านี้ของเรา ( inta และ al . ,
2013 ) การโคลนยีนใน osb2
( promega pgem-t , ง่ายสหรัฐอเมริกา ) และย่อยด้วย . แล้วตัดด้วย
osb2 ยีนทื่อสิ้นสุดโดยใช้
จบ ittm DNA จบชุดซ่อม ( แผ่นดินไหว , USA ) และแทรกลงใน p2ca
( puc19 ที่มีการ Dual 35s
และ NOS Terminator ) สร้าง
เทปของยีน osb2 ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์และ NOS คู่
35s คนเหล็ก ยีน
เทป ( Dual 35sp : : osb2 : : tnos ) ถูกโคลนเข้าไป
pcambia1305 เวกเตอร์ไบนารี1 ( cambia , ออสเตรเลีย )
- / เว็บไซต์ที่สร้างด้วย ppi01_b2s ซึ่งมียีนต้านยา hygromycin phosphotransferase

( hptii ) เป็นยีนเครื่องหมายคัดเลือก และบีตา - ที่มีอวัยวะ
( gusplus ) เป็นนักข่าวจีน ( รูปที่ 1 )
ppi01_b2s Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ที่ใช้เป็น

agl1 ที่จะใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงของข้าว