Preparation of ENU SolutionENU is v

Preparation of ENU Solution
ENU is very sensitive to light, humidity, and pH. Dilute a new container of ENU prior to each weekly injection and protect from light using a foil wrap. Inject mice (Step 7) within 3 h of diluting the ENU.
Dissolving and Diluting ENU
1. In an efficient chemical fume hood, dissolve the ENU by injecting 10 mL of 95% ethanol into the ISOPAC container of ENU. Gently agitate the suspension until the ENU goes into solution. Use the warmth from your hands to warm the containment vessel.
Handlers should wear plastic gloves, lab coats, and masks.
The solution should be clear and yellow in color when the ENU is completely dissolved. This will take up to 10 min.
See Troubleshooting.
2. Dilute the ENU using one of the following methods:
i. For a standard solution, inject 90 mL of phosphate/citrate buffer into the ISOPAC container vented with an 18-gauge needle. Mix thoroughly.
ii. To prepare a more dilute solution, remove 5 mL of ENU from the ISOPAC container prior to dilution and place it directly into 50 mL of inactivating solution (e.g., 0.1 M KOH or alkaline sodium thiosulfate). Discard after a minimum of 2 h. Inject 95 mL of phosphate/citrate buffer into the ISOPAC container.
A more dilute solution is preferable for injection of small quantities of ENU per mouse.
Determining Concentration by Spectrophotometry
Because the amount of ENU per container varies, the concentration of each prepared ENU solution must be determined empirically. Measurement of concentration also controls for dilution errors.
3. Transfer 400 μL of the suspended ENU to a disposable plastic cuvette and bring the volume to 2000 μL with phosphate/citrate buffer (a 1:5 dilution). Prepare a 1:50 dilution of 95% ethanol in phosphate/citrate buffer (also in a plastic disposable cuvette) to use as a blank. Determine the OD398nm of the ENU relative to the blank.
The OD at this wavelength will vary depending upon the concentration of the ENU solution.
4. Calculate the concentration of the ENU in solution based upon the observation that a 1 mg/mL solution gives an OD398nm of 0.72.
To ensure that the spectrophotometer is working appropriately, perform a wavelength scan from 350 to 450 nm. This scan should give a peak reading at OD398. We recommend performing the scan at least once per year.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเตรียมการของโซลูชัน ENUENU มีมากความไวต่อแสง ความชื้น และ pH Dilute คอนเทนเนอร์ใหม่ ENU ก่อนฉีดยาแต่ละสัปดาห์ และปกป้องจากแสงที่ใช้ห่อฟอยล์ ฉีดหนู (ขั้นตอนที่ 7) ภายใน 3 h ของ diluting ENUยุบและ Diluting ENU1. ในสารเคมีมีประสิทธิภาพดูดไอ ละลาย ENU หมาย โดย injecting 10 mL ของเอทานอล 95% เป็นคอนเทนเนอร์ ISOPAC ของ ENU ค่อย ๆ กวนการระงับจนกว่า ENU จะแก้ปัญหา ใช้ความอบอุ่นจากมือของคุณอุ่นเรือบรรจุตัวควรสวมถุงมือพลาสติก เสื้อในห้องปฏิบัติการ และรูปแบบการแก้ปัญหาควรจะชัดเจน และสีเหลืองเมื่อ ENU จะสังเกต ซึ่งจะใช้เวลาถึง 10 นาทีดูการแก้ไขปัญหา2. dilute ENU ใช้หนึ่งในวิธีต่อไปนี้:i. การแก้ไขปัญหามาตรฐาน ฉีด 90 mL บัฟเฟอร์ฟอสเฟต/ซิเตรตเป็นคอนเทนเนอร์ ISOPAC vented กับเข็มวัด 18 ตัว ผสมอย่างทั่วถึงครั้งที่สองเพื่อเตรียมแก้ไขปัญหา dilute มากขึ้น ออก 5 mL ของ ENU คอนเทนเนอร์ ISOPAC ก่อนเจือจาง และวางลง 50 mL ของยกโซลูชั่น (เช่น 0.1 M เกาะหรือ thiosulfate โซเดียมอัลคาไลน์) ยกเลิกหลังอย่างน้อย 2 h. ใส่ 95 mL บัฟเฟอร์ฟอสเฟต/ซิเตรตเป็นคอนเทนเนอร์ ISOPACโซลูชันการ dilute มากขึ้นกว่าการฉีดปริมาณเล็กน้อย ENU ต่อเมาส์ได้กำหนดความเข้มข้น โดย Spectrophotometryเนื่องจากจำนวน ENU ต่อคอนเทนเนอร์ไปจน ความเข้มข้นของแต่ละเตรียม ENU ต้องสามารถกำหนด empirically วัดความเข้มข้นยังควบคุมข้อผิดพลาดในการเจือจาง3. μL 400 ของ ENU ระงับโอนย้ายไป cuvette พลาสติกผ้าอ้อม และให้ปริมาณ 2000 μL กับบัฟเฟอร์ฟอสเฟต/ซิเตรต (เจือจาง 1:5) เตรียม 1:50 เจือจางของเอทานอล 95% ในฟอสเฟต/ซิเตรตบัฟเฟอร์ (ยังใน cuvette ผ้าอ้อมพลาสติก) เพื่อใช้เป็นช่องว่าง กำหนด OD398nm ของ ENU สัมพันธ์กับว่างOD ที่ความยาวคลื่นนี้จะแตกต่างกันขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของโซลูชัน ENU4. คำนวณความเข้มข้นของ ENU ในโซลูชันตามสังเกตว่า โซลูชัน 1 mg/mL ให้มี OD398nm 0.72เพื่อให้แน่ใจว่า เครื่องทดสอบกรดด่างตัวทำงานอย่างเหมาะสม ทำการสแกนความยาวคลื่นจาก 350 ถึง 450 nm การสแกนนี้ควรให้อ่านที่ OD398 สูงสุด ขอแนะนำให้ทำการสแกนอย่างน้อยหนึ่งครั้งต่อปี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การจัดทำโซลูชั่นเเมีความสำคัญมากต่อแสงความชื้นและพีเอช เจือจางภาชนะใหม่ของเก่อนที่จะมีการฉีดในแต่ละสัปดาห์และปกป้องจากแสงที่ใช้ห่อฟอยล์ ฉีดหนู (ขั้นตอนที่ 7) ภายใน 3 ชั่วโมงเจือจางเ.
ละลายและเจือจางเ
1 ในตู้ดูดควันสารเคมีที่มีประสิทธิภาพละลาย ENU โดยการฉีด 10 มิลลิลิตรของเอทานอล 95% ลงในภาชนะ ISOPAC ของเ ค่อยๆรณรงค์ระงับจนกว่า ENU จะเข้าสู่การแก้ปัญหา ใช้ความอบอุ่นจากมือของคุณเพื่อให้ความอบอุ่นเรือบรรจุ. the
จัดการควรสวมใส่ถุงมือพลาสติก, เสื้อห้องแล็บและหน้ากาก.
การแก้ปัญหาควรมีความชัดเจนและสีเหลืองเมื่อเละลายอย่างสมบูรณ์ ซึ่งจะใช้เวลาถึง 10 นาที.
ดูการแก้ไขปัญหา.
2 เจือจางเใช้หนึ่งในวิธีต่อไปนี้:
ฉัน สำหรับการแก้ปัญหามาตรฐานฉีด 90 มิลลิลิตรฟอสเฟต / บัฟเฟอร์ซิเตรตลงในภาชนะ ISOPAC ระบายอากาศที่มีเข็ม 18 วัด ผสมอย่างทั่วถึง.
ii เพื่อเตรียมความพร้อมการแก้ปัญหาที่เจือจางมากขึ้นลบ 5 มิลลิลิตร ENU จากภาชนะ ISOPAC ก่อนที่จะมีการลดสัดส่วนและวางไว้โดยตรงใน 50 มลยับยั้งของการแก้ปัญหา (เช่น 0.1 M เกาะอัลคาไลน์หรือโซเดียมไทโอซัลเฟต) หลังจากที่ทิ้งอย่างน้อย 2 ชั่วโมง ฉีด 95 มิลลิลิตรฟอสเฟต / บัฟเฟอร์ซิเตรตลงในภาชนะ ISOPAC.
ทางออกที่เจือจางมากขึ้นเป็นที่นิยมสำหรับการฉีดในปริมาณเล็ก ๆ ของเต่อเมาส์.
กำหนดความเข้มข้นโดย Spectrophotometry
เพราะปริมาณของเต่อภาชนะที่แตกต่างกัน, ความเข้มข้นของแต่ละเตรียมการแก้ปัญหา ENU ต้อง สังเกตุได้รับการพิจารณา การวัดความเข้มข้นยังควบคุมสำหรับข้อผิดพลาดเจือจาง.
3 โอนเงิน 400 ไมโครลิตรของเระงับไปยัง cuvette พลาสติกทิ้งและนำปริมาณ 2000 ไมโครลิตรกับฟอสเฟต / บัฟเฟอร์ซิเตรต (1: 5 เจือจาง) เตรียม 1:50 ลดสัดส่วนของเอทานอล 95% ในฟอสเฟต / บัฟเฟอร์ซิเตรต (ยังอยู่ใน cuvette ทิ้งพลาสติก) เพื่อใช้เป็นที่ว่างเปล่า กำหนด OD398nm ของญาติ ENU ไปที่ว่างเปล่า.
OD ที่ความยาวคลื่นนี้จะแตกต่างกันขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของการแก้ปัญหา ENU ได้.
4 คำนวณความเข้มข้นของ ENU ในการแก้ปัญหาบนพื้นฐานของการสังเกตที่ 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรวิธีการแก้ปัญหาให้ OD398nm 0.72.
เพื่อให้แน่ใจว่า spectrophotometer จะทำงานอย่างเหมาะสมทำการสแกนความยาวคลื่น 350-450 นาโนเมตร การสแกนนี้ควรให้การอ่านสูงสุดที่ OD398 เราขอแนะนำให้มีประสิทธิภาพการสแกนอย่างน้อยปีละครั้ง