To initiate a discovery effort to i

To initiate a discovery effort to identify potential scaffolds for selective inhibitors of human CYP2A13, a high throughput screening campaign was conducted. A cuvette-based assay based on UV/Vis absorbance changes upon ligand binding (described in Methods) was miniaturized and adapted for screening in 384-well format. Fig. 1 summarizes data from the high throughput screen. An average Z’ score of 0.89 ± 0.08 was obtained from positive (CYP2A13+PEITC) and negative control wells (CYP2A13+DMSO), which is an acceptable dynamic range for a high throughput screening assay. Primary screening of 35,200 Chembridge library compounds resulted in a high hit rate of 1.4%. This relatively high hit rate likely reflects the nature of the target. Xenobiotic-metabolizing cytochrome P450 enzymes have evolved to be promiscuous and would be expected to bind a higher number of library compounds than most proteins. Of the 508 primary screen actives that were repurchased and tested for binding with both CYP 2A13 and the 94% identical CYP2A6, 93 compounds were found to bind to CYP2A13 specifically (ΔAbs 385-419 nm > 0.2) compared with CYP2A6 (ΔAbs 385-419 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อเริ่มต้นความพยายามค้นหาเพื่อระบุ scaffolds ศักยภาพสำหรับ inhibitors เลือกของมนุษย์ CYP2A13 อัตราความเร็วสูงที่มีการคัดกรองการส่งเสริมการขายที่ดำเนิน ตามการเปลี่ยนแปลง absorbance UV/Vis เมื่อผูกลิแกนด์ (อธิบายไว้ในวิธี) การทดสอบใช้ cuvette miniaturized และดัดแปลงสำหรับการคัดกรองในรูปแบบดี 384 Fig. 1 สรุปข้อมูลจากหน้าจออัตราความเร็วสูง เฉลี่ย Z' คะแนน 0.89 ± 0.08 กล่าวจากบวก (CYP2A13 + PEITC) และบ่อควบคุมลบ (CYP2A13 + DMSO), ซึ่งเป็นอัตราความเร็วสูงที่มีการคัดกรองวิเคราะห์ช่วงแบบไดนามิกยอมรับ หลักการคัดกรองสารไลบรารี Chembridge 35,200 ผลในอัตรา 1.4% ตีสูง ค่อนข้างสูงตีอัตรานี้อาจสะท้อนให้เห็นถึงลักษณะของเป้าหมาย Xenobiotic metabolizing cytochrome P450 เอนไซม์ได้พัฒนาเพรื่อ และจะคาดหวังการผูกหมายเลขสูงสารไลบรารีมากกว่าโปรตีนมากที่สุด ของ actives จอหลัก 508 ที่ repurchased และทดสอบกับ CYP 2A13 และ 94% CYP2A6 เหมือน พบสาร 93 จะผูกกับ CYP2A13 โดยเฉพาะ (ΔAbs 385-419 nm > 0.2) เปรียบเทียบกับ CYP2A6 (nm ΔAbs 385-419 < 0.03) ระบุ scaffolds CYP2A13 เฉพาะหลายอย่าง วิเคราะห์สารประกอบบางตัวแทนที่ความเข้มข้นแตกต่างกันส่งผลให้เกิดในรหัส 4-(2-chloro-6-fluorobenzyl) morpholine เป็นลิแกนด์ใช้จริงของ CYP2A13 เทียบกับ CYP2A6 แสดงใน 1D รูป 4-(2-chloro-6-fluorobenzyl) morpholine ผูก CYP2A13 กับ Kd ของ μM ประมาณ 2 ได้เกิดกะไม่สเปกตรัมกับ 2A6

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่จะเริ่มต้นความพยายามที่จะระบุการค้นพบโครงศักยภาพในการยับยั้งการเลือกของ CYP2A13 มนุษย์รณรงค์ตรวจคัดกรองสูง throughput ได้ดำเนินการ ทดสอบ cuvette ที่ใช้ขึ้นอยู่กับ UV / Vis การเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงที่มีผลผูกพันตามแกนด์ (ที่อธิบายไว้ในวิธีการ) ได้รับการขนาดเล็กและเหมาะสำหรับการตรวจคัดกรองในรูปแบบ 384 ดี มะเดื่อ 1 สรุปข้อมูลจากหน้าจอผ่านสูง เฉลี่ย Z 'คะแนน 0.89 ± 0.08 ที่ได้รับจากทางบวก (+ CYP2A13 PEITC) และบ่อควบคุมลบ (+ CYP2A13 DMSO) ซึ่งเป็นช่วงแบบไดนามิกที่ยอมรับได้สำหรับการตรวจคัดกรองสูงผ่านการทดสอบ หลักของการตรวจคัดกรอง 35,200 Chembridge สารห้องสมุดส่งผลให้อัตราการตีสูง 1.4% นี้อัตราการตีค่อนข้างสูงมีแนวโน้มที่สะท้อนให้เห็นถึงลักษณะของเป้าหมาย xenobiotic-เมแทบเอนไซม์ cytochrome P450 ได้พัฒนาไปสำส่อนและจะคาดว่าจะผูกจำนวนที่สูงขึ้นของสารห้องสมุดกว่าโปรตีนมากที่สุด ของ 508 actives หน้าจอหลักที่ได้รับการซื้อคืนและทดสอบสำหรับการผูกกับทั้ง CYP 2A13 และ 94% CYP2A6 เหมือนกัน 93 พบว่ามีสารที่จะผูกกับ CYP2A13 เฉพาะ (385-419 นาโนเมตรΔAbs> 0.2) เมื่อเทียบกับ CYP2A6 (ΔAbs 385-419 นาโนเมตร <0.03) หลายโครง CYP2A13 เฉพาะถูกระบุแน่นอน การวิเคราะห์สารตัวแทนไม่กี่ที่ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันส่งผลในตัวของ 4 (2-chloro-6-fluorobenzyl) morpholine เป็นแกนด์เลือกที่แท้จริงของ CYP2A13 กับ CYP2A6 ดังแสดงในรูปที่ 1 วัน, 4 (2-chloro-6-fluorobenzyl) CYP2A13 ที่ถูกผูกไว้กับ morpholine Kd ประมาณ 2 ไมครอน แต่ไม่ก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงสเปกตรัมกับ 2A6

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อเริ่มต้นการค้นพบความพยายามที่จะระบุโครงการ cyp2a13 นศักยภาพมนุษย์ สูง throughput รณรงค์คัดกรองเป็น เป็นคิวเวตต์ตามการทดสอบบนพื้นฐานของการเปลี่ยนแปลงค่าการดูดกลืนแสง UV / Vis บนลิแกนด์ผูกพัน ( อธิบายไว้ในวิธีการ ) คือขนาดเล็กและปรับการคัดกรองใน 384 ด้วยรูปแบบ รูปที่ 1 สรุปข้อมูลจากหน้าจอ throughput สูงเฉลี่ย Z ' คะแนน 0.89 ± 0.08 แบบบวก ( cyp2a13 peitc ) และบ่อดิน ( cyp2a13 DMSO ) ซึ่งมีช่วงไดนามิกสูง throughput การยอมรับสำหรับการทดสอบ การคัดกรองสาร 35200 chembridge ห้องสมุดมีผลในการตีสูงในอัตรา 1.4% นี้ค่อนข้างสูง ตี อัตราอาจสะท้อนให้เห็นถึงธรรมชาติของเป้าหมายต่อเอนไซม์ไซโตโครมพี metabolizing มีวิวัฒนาการมามั่ว และคาดว่าจะเป็นผูกตัวเลขที่สูงขึ้นของสารประกอบห้องสมุดกว่าโปรตีนมากที่สุด ของหน้าจอหลัก สำหรับผมที่ซื้อและทดสอบ ผูกพัน กับ ทั้ง และ 2a13 และ 94% เหมือนกัน 1.14% , 93 สารประกอบที่พบผูก cyp2a13 เฉพาะ ( Δ ABS 385-419 nm > 02 ) เมื่อเทียบกับ 1.14% ( Δ ABS 385-419 nm < 0.03 ) นั่งร้านเฉพาะหลาย cyp2a13 ระบุไม่แน่นอน การวิเคราะห์สารประกอบตัวแทนไม่กี่ที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน ส่งผลให้ประชาชน 4 - ( 2-chloro-6-fluorobenzyl ) ซิลเป็นลิแกนด์ที่เลือกที่แท้จริงของ cyp2a13 vs 1.14% . ดังแสดงในรูปที่ 1 ดี ,4 - ( 2-chloro-6-fluorobenzyl ) เคมีจำกัด cyp2a13 กับ KD ประมาณ 2 μม. แต่ไม่ก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงกับ 2a6 .