3.2 Nature of the interaction betwe

3.2 Nature of the interaction between the VEGF
protein and the polyphenols
Having demonstrated that EGCG and dp4 interact directly
with the VEGF protein, we explored the nature of this interaction
further by investigating whether it was the result of
weak or strong interactions and whether these were covalent
or non-covalent binding. First, we dialysed VEGF-polyphenol
complexes and determined whether or not VEGF recovered
its ability to activate VEGFR-2. Our data show that untreated
VEGF caused strong activation of VEGFR-2 in HUVEC after
dialysis (Fig. 2) whereas EGCG-treated VEGF did not
exhibit any VEGFR-2 phosphorylation activity post-dialysis.
Similarly, dialysed dp4-treated VEGF was unable to phosphorylate
VEGFR-2 in HUVECs (data not shown). These observations
likely indicate that the EGCG and dp4 bind tightly to
Figure 1. Apple dp4 and EGCG inhibit VEGF-induced VEGFR-2
phosphorylation by interacting with the VEGF molecule. HUVECs
were exposed (A) to 1 M apple dp4 or EGCG for 4 h before removal
of the polyphenol (washing with PBS) and the addition and
incubation of 25 ng/mL VEGF for 5 min, or (B and C) for 5 min to
1 M apple dp4 or EGCG previously incubated with 25 ng/mL
VEGF for 5 min. Phosphorylated VEGFR-2 was determined by
ELISA (A and B) and Western blot (C). ***p < 0.001 compared
to the stimulated cells. Data are expressed as mean ± SD (n = 6
(A and B)). (C) Densitometric analysis of n = 3 Western blots.
VEGF and are not released after an extended period (24 h)
of dialysis. This is consistent with a covalent or strong noncovalent
interaction, but not with an easily reversible noncovalent
interaction. Second, EGCG- and dp4-treated VEGF
samples were subjected to various forms of gel electrophoresis.
Using SDS-PAGE, polyphenol-treated VEGF exhibited
exactly the same migration properties under both reducing

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.2 ลักษณะของการโต้ตอบระหว่าง VEGFโปรตีนและโพลีฟีนรวมถึงว่า EGCG และ dp4 โต้ตอบกันโดยตรงมีโปรตีน VEGF เราได้สำรวจลักษณะของการโต้ตอบนี้เพิ่มเติม โดยตรวจสอบว่า มันเป็นผลของอ่อนแอ หรือแข็งแกร่งโต้ และว่าเป็น covalentหรือผูกไม่ covalent ครั้งแรก เรา dialysed VEGF polyphenolสิ่งอำนวยความสะดวก และกำหนดว่า หรือไม่กู้ VEGFความสามารถในการเรียกใช้ VEGFR-2 แสดงข้อมูลที่ไม่ถูกรักษาทำให้เกิดการเรียกใช้แรง VEGFR-2 HUVEC หลังจาก VEGFหน่วย (Fig. 2) โดยไม่ถือว่า EGCG VEGFแสดงใด ๆ VEGFR 2 phosphorylation กิจกรรมหลังหน่วยในทำนองเดียวกัน VEGF dp4 ถือว่า dialysed ไม่สามารถ phosphorylateVEGFR-2 ใน HUVECs (ข้อมูลไม่แสดง) ข้อสังเกตเหล่านี้มีแนวโน้มบ่งชี้ว่า EGCG และ dp4 ผูกให้แน่นรูปที่ 1 แอปเปิ้ล dp4 และ EGCG ยับยั้ง VEGF เกิด VEGFR-2phosphorylation โดยโต้ตอบกับโมเลกุล VEGF HUVECsได้สัมผัส (A) 1 M dp4 แอปเปิ้ลหรือ EGCG สำหรับ h 4 ก่อนเอาpolyphenol (ล้าง ด้วย PBS) และการเพิ่ม และบ่ม 25 ng/mL VEGF ใน 5 นาที หรือ (B และ C) สำหรับ 5 นาทีเพื่อDp4 แอปเปิ้ล 1 M หรือ EGCG ก่อนหน้านี้ incubated กับ 25 ng/mLVEGF สำหรับ 5 นาทีกำหนดโดย Phosphorylated VEGFR-2ELISA (A และ B) และตะวันตกทำลาย (C) p < 0.001 เทียบไปยังเซลล์ขาวกระตุ้น ข้อมูลจะแสดงเป็นหมายถึง ± SD (n = 6(A และ B) วิเคราะห์ (C) Densitometric n =กันบล็อทตะวันตก 3VEGF และจะไม่ออกหลังจากรอบระยะเวลา (24 ชม)ของหน่วยงาน นี้มีความสอดคล้อง กับแบบ covalent หรือแข็งแกร่ง noncovalentการโต้ตอบ แต่ไม่ มีการผันกลับได้ง่าย ๆ noncovalentโต้ตอบ สอง EGCG - และ dp4-รักษา VEGFตัวอย่างถูกต้องในแบบฟอร์มต่าง ๆ ของ electrophoresis เจลใช้ SDS-หน้า จัดแสดงถือว่า polyphenol VEGFตรงคุณสมบัติเดียวกันย้ายภายใต้ทั้งสองลดลง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.2 ลักษณะของการปฏิสัมพันธ์ระหว่าง VEGF
โปรตีนและโพลีฟีน
มีการแสดงให้เห็นว่า EGCG และ dp4 ติดต่อโดยตรง
กับโปรตีน VEGF เราสำรวจลักษณะของการปฏิสัมพันธ์นี้
ต่อไปโดยการตรวจสอบไม่ว่าจะเป็นผลมาจาก
การมีปฏิสัมพันธ์อ่อนแอหรือเข้มแข็งและไม่ว่าเหล่านี้เป็นโควาเลนต์
หรือไม่โควาเลนต์ที่มีผลผูกพัน ครั้งแรกที่เราไต-VEGF โพลีฟีน
คอมเพล็กซ์และความมุ่งมั่นหรือไม่ว่า VEGF กู้คืน
ความสามารถในการเปิดใช้งาน VEGFR-2 ข้อมูลของเราแสดงให้เห็นว่าได้รับการรักษา
ที่เกิด VEGF ยืนยันการใช้งานที่แข็งแกร่งของ VEGFR-2 ใน HUVEC หลังจาก
ฟอกเลือด (รูปที่. 2) ในขณะที่ VEGF EGCG รับการรักษาไม่ได้
แสดงกิจกรรม phosphorylation VEGFR-2 โพสต์ฟอกไต.
ในทำนองเดียวกันไต VEGF dp4 ที่ได้รับไม่สามารถที่จะ phosphorylate
VEGFR-2 ใน HUVECs (ไม่ได้แสดงข้อมูล) ข้อสังเกตเหล่านี้
มีแนวโน้มที่แสดงให้เห็นว่า EGCG และผูก dp4 แน่นกับ
รูปที่ 1 และแอปเปิ้ล dp4 EGCG ยับยั้ง VEGF ที่เกิด VEGFR-2
phosphorylation โดยการมีปฏิสัมพันธ์กับโมเลกุล VEGF HUVECs
ได้สัมผัส (A) 1? เอ็มแอปเปิ้ล dp4 หรือ EGCG 4 ชั่วโมงก่อนที่จะกำจัด
ของโพลีฟีน (ล้างด้วยพีบีเอส) และการเพิ่มและ
การบ่ม 25 ng / VEGF เวลา 5 นาทีหรือ (B และ C) เป็นเวลา 5 นาทีถึง
1 M dp4 แอปเปิ้ลหรือ EGCG บ่มก่อนหน้านี้มี 25 ng /
VEGF เป็นเวลา 5 นาที phosphorylated VEGFR-2 ถูกกำหนดโดย
วิธี ELISA (A และ B) และดวงตะวัน (C) *** p <0.001 เมื่อเทียบ
กับเซลล์กระตุ้น ข้อมูลจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD (n = 6
(A และ B)) (C) การวิเคราะห์ของ Densitometric n = 3 blots ตะวันตก.
VEGF และไม่ได้รับการปล่อยตัวหลังจากขยายระยะเวลา (24 ชั่วโมง)
ของการฟอกเลือด ซึ่งสอดคล้องกับโควาเลนต์หรือ noncovalent แข็งแกร่ง
การทำงานร่วมกัน แต่ไม่ได้มีย้อนกลับได้อย่างง่ายดาย noncovalent
ปฏิสัมพันธ์ ประการที่สอง EGCG- dp4 และได้รับการรักษา VEGF
ตัวอย่างถูกยัดเยียดให้รูปแบบต่างๆของข่าวคราว.
ใช้ระบบ SDS-PAGE, โพลีฟีนได้รับการรักษา VEGF แสดง
ว่าคุณสมบัติการโยกย้ายเดียวกันภายใต้ทั้งลด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.2 ลักษณะของปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีนและการศึกษา

มีโพลีฟีนอลและพบว่า EGCG dp4 โต้ตอบโดยตรง
กับการศึกษาโปรตีน เราสำรวจธรรมชาติของการมีปฏิสัมพันธ์
เพิ่มเติม โดยตรวจสอบว่ามันเป็นผลมาจาก
อ่อนแอหรือแข็งแรงหรือไม่ และมีการปฏิสัมพันธ์หรือการ
ไม่ผูกพัน ก่อนอื่น เรา dialysed การศึกษา
โพลีฟีนอลเชิงซ้อนและกำหนดหรือไม่การศึกษาดีแล้ว
ของความสามารถในการเปิดใช้งาน vegfr-2 . ข้อมูลจากการศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่าการกระตุ้นที่แข็งแกร่งของดิบ

เพิ่ vegfr-2 ในหลังจากฟอกไต ( รูปที่ 2 ) ส่วนในการศึกษาปฏิบัติไม่ได้
EGCG มีไตฟอสโฟริเลชันกิจกรรมโพสต์ vegfr-2 .
ในทํานองเดียวกัน dialysed dp4 การศึกษาปฏิบัติ ไม่สามารถ phosphorylate
vegfr-2 ในกลุ่ม ( ข้อมูลไม่แสดง )ข้อสังเกตเหล่านี้อาจพบว่า EGCG
และผูกแน่น dp4

รูปที่ 1 แอปเปิ้ล dp4 EGCG ยับยั้งการเหนี่ยวนำและการศึกษา vegfr-2
ฟอสโฟริเลชันโดยการโต้ตอบกับการศึกษาโมเลกุล กลุ่มที่ถูกเปิดเผย ( A )
1  M แอปเปิ้ล dp4 หรือ EGCG สำหรับ 4 ชั่วโมงก่อนที่จะกำจัด
ของโพลีฟีนอล ( ล้างด้วย pbs ) และเพิ่ม
บ่ม 25 นาโนกรัม / มิลลิลิตรการศึกษาสำหรับ 5 นาทีหรือ ( B และ C ) เป็นเวลา 5 นาที

แอปเปิ้ล 1 dp4 M  หรือ EGCG ก่อนหน้านี้แยก 25 นาโนกรัม / มิลลิลิตรการศึกษา
5 นาที ฟอสฟอรีเลเตต vegfr-2 ถูกกำหนดโดย
ELISA ( A และ B ) และ Western blot ( C ) * * * p < 0.001 เทียบ
เพื่อกระตุ้นเซลล์ ข้อมูลที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD ( N = 6
( A และ B ) ( c ) การวิเคราะห์ densitometric n = 3
blots ตะวันตก และไม่ปล่อยตัว หลังจากการศึกษาขยายระยะเวลา ( 24 ชั่วโมง )
ของไตซึ่งสอดคล้องกับการปฏิสัมพันธ์หรือแข็งแรง noncovalent
, แต่ไม่ได้มีปฏิสัมพันธ์ noncovalent
กลับได้อย่างง่ายดาย ที่สอง , EGCG และ dp4 ถือว่าการศึกษา
ตัวอย่างถูกต้องในรูปแบบต่างๆของ gel electrophoresis โดยใช้เอนไซม์ polyphenol ถือว่าการศึกษา
,
( เหมือนกันทั้งคุณสมบัติภายใต้การลด