Limitations of the technique A few

Limitations of the technique A few caveats exist for the infiltration-centrifugation AWF isolation method. First, the dilution of the apoplast during infiltration may elicit a response from the plant. If the surrounding leaf cells detect a diminished concentration for certain components of the apoplastic fluid, they may respond by excreting further metabolites, distorting the interpretation of metabolite concentrations. In an assessment of this problem it was observed that neither the time between infiltration and centrifugation nor moderate differences in the ionic strength of the infiltration fluid affected the composition of the extracted AWF14,22. Therefore, any artifacts resulting from apoplast dilution are thought to be minimal. A second potential drawback is that elution of AWF by centrifugation does not capture all the molecules present in the apoplast for several reasons. Some compounds, in particular cations and proteins may be tightly associated with the negatively charged cell wall and not elute with the AWF13. Other molecules such as proteins may be too large to elute efficiently out of the apoplast at the centrifugation speeds used14. Reactive oxygen species are an important class of compound produced in the apoplast, but due to the short-lived nature of these compounds, and unspecified requirements for their production, their presence is not well captured by AWF extraction. It is not known how accurately AWF represents the in vivo composition of the apoplast fluid and this may vary between species. Several assays exist to determine cytoplasmic contamination, though none are universally accepted. Assays of predominantly cytoplasmic enzymes (e.g., G6PDH, hexose phosphate isomerase, MDH) have the benefit of being easy to perform but may not correlate well with cytoplasmic leakage14,18. The assessment of cytoplasmic metabolites (e.g., hexose phosphates, chlorophyll) is perhaps more indicative but is less well established11. Nevertheless, either type of assay can be useful for relative quantification of apoplastic contamination between samples. Ideally, multiple independent measurements should be used to validate the integrity of the AWF sample. While acknowledging its limitations, the infiltration-centrifugation technique described here remains a simple and robust technique in the study of apoplastic proteins, primary and secondary metabolites and inorganic ions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ข้อจำกัดของเทคนิคที่กังวลไม่กี่ที่มีอยู่สำหรับวิธีแยก AWF หมุนเหวี่ยงแทรกซึม ครั้งแรก เจือจางของ apoplast ที่ระหว่างแทรกซึมอาจ elicit การตอบสนองจากโรงงาน ถ้าเซลล์ใบตรวจหาความเข้มข้นลดลงสำหรับบางคอมโพเนนต์ของเหลว apoplastic อาจตอบ โดยการเติมสาร บิดเบือนตีความเข้มข้นของ metabolite ชีวิต ในการประเมินปัญหานี้ พบที่ไม่เวลาแทรกซึมและหมุนเหวี่ยง หรือความแรงของไอออนของน้ำแทรกซึมปานกลางต่างได้รับผลกระทบส่วนประกอบของ AWF14 สกัด 22 ดังนั้น สิ่งประดิษฐ์ใด ๆ ที่เกิดจากการผสมของ apoplast มีความคิดที่น้อยที่สุด การจัดอันดับสองคือชะของ AWF โดยหมุนจับภาพทั้งหมดโมเลกุลอยู่ใน apoplast ที่เหตุผลหลาย บาง โดยเฉพาะแคทไอออนและโปรตีนอาจจะเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับผนังเซลล์ประจุ และ elute กับ AWF13 ไม่ โมเลกุลอื่น ๆ เช่นโปรตีนอาจจะใหญ่เกินไป elute ประสิทธิภาพจาก apoplast ที่ used14 ความเร็วในการหมุนเหวี่ยง ปฏิกิริยาออกซิเจนชนิดเป็นชั้นสำคัญของสารประกอบใน apoplast แต่เนื่องจากความสั้นของสารประกอบเหล่านี้ และไม่ระบุข้อกำหนดสำหรับการผลิตของพวกเขา พวกไม่ดีจับภาพ โดย AWF สกัด ไม่ทราบความแม่นยำ AWF แสดงถึงองค์ประกอบในสัตว์ทดลองของเหลว apoplast และนี้อาจแตกต่างกันระหว่างพันธุ์ Assays หลายมีอยู่การตรวจสอบการปนเปื้อน รายการเลือกว่าไม่เป็นที่ยอมรับระดับสากล Assays เป็นรายการเลือกเอนไซม์ (เช่น G6PDH เฮกโซสฟอสเฟต isomerase, MDH) มีประโยชน์เป็นการแต่พฤษภาคมไม่เชื่อมโยงกับรายการเลือก leakage14, 18 การประเมินสารรายการเลือก (เช่น เฮกโซสฟอสเฟต คลอโรฟิล) คืออาจจะ บ่งชี้เพิ่มเติมแต่เป็น established11 น้อยดี อย่างไรก็ตาม ทดสอบชนิดใดสามารถใช้สำหรับนับญาติของ apoplastic การปนเปื้อนระหว่างตัวอย่าง แห่ง วัดอิสระหลายควรใช้การตรวจสอบความสมบูรณ์ของตัวอย่าง AWF ในขณะที่ตัวชี้ข้อจำกัด เทคนิคการหมุนเหวี่ยงแทรกซึมที่อธิบายที่นี่ยังคง เป็นเทคนิคที่ง่าย และทนทานในการศึกษาของ apoplastic โปรตีน สารหลัก และรอง และไอออนอนินทรีย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ข้อ จำกัด ของเทคนิคไม่กี่คำเตือนที่มีอยู่สำหรับการแทรกซึม-หมุนเหวี่ยงวิธี AWF แยก ประการแรกการลดสัดส่วนของ apoplast ในระหว่างการแทรกซึมอาจกระตุ้นการตอบสนองจากโรงงาน หากเซลล์ใบรอบการตรวจสอบความเข้มข้นลดลงสำหรับส่วนประกอบหนึ่งของของเหลว apoplastic พวกเขาอาจจะตอบสนองโดยการขับถ่ายสารเพิ่มเติมบิดเบือนความหมายของความเข้มข้นของสาร ในการประเมินผลของปัญหานี้มันถูกตั้งข้อสังเกตว่าไม่ว่าเวลาระหว่างการแทรกซึมและการหมุนเหวี่ยงมิได้แตกต่างในระดับปานกลางในความแรงของอิออนของของเหลวแทรกซึมได้รับผลกระทบองค์ประกอบของ AWF14,22 สกัด ดังนั้นสิ่งประดิษฐ์ใด ๆ ที่เกิดจากการลดสัดส่วน apoplast มีความคิดที่จะน้อยที่สุด อุปสรรคที่อาจเกิดขึ้นที่สองคือการชะของ AWF โดยการหมุนเหวี่ยงไม่จับโมเลกุลทั้งหมดที่มีอยู่ใน apoplast ได้จากหลายสาเหตุ สารบางอย่างในไพเพอร์โดยเฉพาะอย่างยิ่งและโปรตีนอาจจะเกี่ยวข้องอย่างแน่นหนากับผนังเซลล์ที่มีประจุลบและไม่ได้ชะ AWF13 โมเลกุลอื่น ๆ เช่นโปรตีนอาจมีขนาดใหญ่เกินกว่าที่จะชะอย่างมีประสิทธิภาพจาก apoplast ที่ used14 ความเร็วการหมุนเหวี่ยง ปฏิกิริยาชนิดออกซิเจนเป็นชั้นที่สำคัญของสารประกอบที่ผลิตใน apoplast แต่เนื่องจากลักษณะที่สั้นของสารเหล่านี้และความต้องการที่ไม่ได้ระบุในการผลิตของพวกเขาปรากฏตัวของพวกเขาจะไม่ได้บันทึกอย่างดีจากการสกัด AWF มันไม่ได้เป็นที่รู้จักกันในวิธีการที่ถูกต้อง AWF หมายถึงองค์ประกอบในร่างกายของของเหลว apoplast และนี้อาจแตกต่างกันระหว่างสายพันธุ์ หลายชุดตรวจที่มีอยู่เพื่อตรวจสอบการปนเปื้อนนิวเคลียสแม้จะไม่มีใครได้รับการยอมรับในระดับสากล การตรวจของเอนไซม์ส่วนใหญ่นิวเคลียส (เช่น G6PDH, hexose ฟอสเฟต isomerase, MDH) ได้รับประโยชน์จากการเป็นเรื่องง่ายที่จะดำเนินการ แต่ไม่อาจมีความสัมพันธ์ดีกับ leakage14,18 นิวเคลียส การประเมินผลของสารนิวเคลียส (เช่นฟอสเฟต hexose คลอโรฟิล) อาจจะเป็นตัวบ่งชี้มากขึ้น แต่น้อยดี established11 แต่ประเภทของการทดสอบอย่างใดอย่างหนึ่งจะมีประโยชน์สำหรับปริมาณสัมพัทธ์ของการปนเปื้อนระหว่าง apoplastic ตัวอย่าง จะเป็นการดีที่หลายวัดอิสระควรจะใช้ในการตรวจสอบความสมบูรณ์ของตัวอย่าง AWF ขณะที่ยอมรับข้อ จำกัด ของเทคนิคการแทรกซึม-หมุนเหวี่ยงที่อธิบายที่นี่ยังคงเป็นวิธีที่ง่ายและมีประสิทธิภาพในการศึกษาของโปรตีน apoplastic, สารประถมศึกษาและมัธยมศึกษาและไอออนนินทรีย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ข้อจำกัดของเทคนิคไม่กี่ caveats มีการแทรกซึม ปั่น awf แยกวิธีการ ก่อนการเจือจางของแอโพพลาสต์ในระหว่างการซึมอาจกระตุ้นการตอบสนองจากโรงงาน ถ้ารอบเซลล์ของใบตรวจสอบลดลงความเข้มข้นสำหรับองค์ประกอบบางอย่างของของเหลว apoplastic , พวกเขาอาจจะตอบสนองด้วยการขับถ่ายสารเพิ่มเติม บิดเบือนความหมายของระดับความเข้มข้น ในการประเมินปัญหาพบว่า ไม่มีเวลาปั่น หรือความแตกต่างระหว่างการแทรกซึมและปานกลางในความแรงของไอออนแทรกซึมมีผลต่อองค์ประกอบของของเหลวที่สกัด awf14,22 . ดังนั้น ใด ๆ , สิ่งประดิษฐ์ที่เกิดจากโพพลาสต์เจือจางจะคิดว่าเป็นน้อยที่สุด ที่สองที่อาจเกิดขึ้นตามมาคือใช้ awf โดยปั่นไม่ได้จับโมเลกุลทั้งหมดที่มีอยู่ในโพพลาสต์ด้วยเหตุผลหลายประการ บางชนิดโดยเฉพาะไอออนและโปรตีนอาจจะแน่นที่เกี่ยวข้องกับประจุลบที่ผนังเซลล์ และไม่ elute กับ awf13 . โมเลกุลอื่นๆ เช่น โปรตีน อาจจะมีขนาดใหญ่เกินไปที่จะ elute มีประสิทธิภาพออกจากแอโพพลาสต์ที่ปั่นเร็ว used14 . ปฏิกิริยาชนิดออกซิเจนเป็นคลาสที่สำคัญของสารประกอบที่ผลิตในโพพลาสต์ แต่เนื่องจากลักษณะช่วงสั้น ๆของสารประกอบเหล่านี้ และความต้องการที่ไม่ระบุสำหรับการผลิตของพวกเขา สถานะของพวกเขาไม่ดีจับโดยการสกัด awf . มันไม่เป็นที่รู้จักวิธีที่ถูกต้อง awf เป็นองค์ประกอบในร่างกายของแอโพพลาสต์ของเหลวและนี้อาจแตกต่างกันระหว่างชนิด มีอยู่หลายวิธีเพื่อตรวจสอบการปนเปื้อนนี้ แต่ไม่มีได้รับการยอมรับระดับสากล . ยีนของเอนไซม์นี้ส่วนใหญ่ ( เช่น g6pdh เฮกโซส , ฟอสเฟตไอโซเมอเรส , MDH ) มีประโยชน์ในการง่ายที่จะดำเนินการ แต่อาจจะไม่สัมพันธ์กับ leakage14,18 นี้ . การประเมินนี้หลายชนิด ( เช่น ฟอสเฟต , เฮกโซสคลอโรฟิลล์ ) คืออาจจะดังมากขึ้น แต่น้อยก็ established11 . อย่างไรก็ตาม ชนิดของการทดสอบสามารถเป็นประโยชน์สำหรับปริมาณสัมพัทธ์ของการปนเปื้อน apoplastic ระหว่างตัวอย่าง ใจกลาง วัดอิสระหลายควรจะใช้เพื่อตรวจสอบความสมบูรณ์ของ awf ตัวอย่าง ขณะที่ข้อจำกัดของรับทราบ , แทรกซึมปั่นเทคนิคอธิบายไว้ที่นี่ยังคงเป็นง่ายและมีประสิทธิภาพเทคนิคในการศึกษาโปรตีน apoplastic ประถมศึกษาและมัธยมศึกษาและไอออน , สารอนินทรีย์